紅原牦牛乳制品中苯甲酸溯源分析

章唯++李江

當(dāng)前，牦牛乳的加工環(huán)境，由于經(jīng)濟(jì)落后的原因，主要是以自給自足的方式進(jìn)行生產(chǎn)一直處于初級(jí)階段。手工采集、清洗的不達(dá)標(biāo)、較差的衛(wèi)生環(huán)境、質(zhì)量的不穩(wěn)定、加上工業(yè)化程度的不足，使牦牛乳一直沒(méi)有登上乳制品的主流銷售渠道。牦牛作為高原地區(qū)的特殊群種，其特殊的經(jīng)濟(jì)效益是值得我們研究的。

紅原牦牛乳業(yè)有限公司是專注于牦牛奶粉的一家企業(yè)，但是由于其苯甲酸的含量過(guò)高，一直被受限于局部地區(qū)的銷售。本次研究的主要目的是為了追溯其苯甲酸的來(lái)源，建立了乳產(chǎn)品中苯甲酸超標(biāo)控制方案，使其產(chǎn)生更加廣闊的經(jīng)濟(jì)效益。

高效液相色譜法檢測(cè)苯甲酸馬尿酸

試劑與儀器。（1）主要儀器與試劑

高效液相色譜儀（AgiLent-1220）；色譜柱（迪馬公司C18柱，250×2.6mm）；超聲波清洗器（Multiwave PRO公司）；甲醇（色譜純，F(xiàn)isher Chemicl公司）； 0.4%乙酸（抽濾）；乙酸鋅（183 g/L）；亞鐵氰化鉀（92 g/L）；苯甲酸、馬尿酸混合標(biāo)準(zhǔn)液（0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、50μg/ml，上海源葉生物科技有限公司）（2）樣品紅原牦牛乳奶粉；紅原牦牛發(fā)酵乳；紅原源頭奶（經(jīng)過(guò)8小時(shí)運(yùn)輸24小時(shí)4℃冰箱儲(chǔ)存）。

樣品均由紅原牦牛乳業(yè)有限責(zé)任公司提供。

實(shí)驗(yàn)方法。

（1）HPLC參考條件

色譜柱：C18柱，250×2.6mm，粒徑5μm

流動(dòng)性：甲醇+0.4%乙酸溶液（抽濾）=50+50

流速：1mL/min

柱溫：35℃

檢測(cè)波長(zhǎng)：235nm

進(jìn)樣量：20μL

進(jìn)樣時(shí)間：15min

（2）苯甲酸馬尿酸標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

出峰時(shí)間：馬尿酸于7.9分鐘出峰，苯甲酸于10.7分鐘出峰。兩者出峰時(shí)間不同，馬尿酸、苯甲酸得到了很好的分離。

建立線性方程：

馬尿酸：Y= 68.17743X - 20.70608，R2= 0.99961

苯甲酸：Y= 108.65547X - 4.57035，R2= 0.99920

（3）樣品預(yù)處理

準(zhǔn)確稱量約2g試樣于50mL離心管中，加入超純水25mL并混勻，于50℃水浴超聲20min。冷卻后，加入亞鐵氰化鉀溶液4mL與乙酸鋅溶液4mL，震蕩混勻，于5000r/min離心機(jī)，離心20min。將離心后樣品中的水相轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，用超純水定容至刻度。經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜，樣品瓶分裝后，用高效液相色譜測(cè)定。

數(shù)據(jù)與分析。

對(duì)進(jìn)行預(yù)處理的樣品用HPLC進(jìn)行，再根據(jù)GB5009.28-2016中的公式，可以得試樣中苯甲酸、馬尿酸的含量。通過(guò)測(cè)量可以得出紅原牦牛乳中馬尿酸含量為17.627mg/kg，苯甲酸的含量為17.139mg/kg；發(fā)酵乳中馬尿酸的含量為0mg/kg，苯甲酸的含量為29.656mg/kg；奶粉中馬尿酸的含量為85.259mg/kg，苯甲酸的含量為118.986mg/kg。

由此可以發(fā)現(xiàn)，本來(lái)存在于牛乳中的馬尿酸，到了發(fā)酵乳中就消失了。而發(fā)酵乳中的苯甲酸含量也上升了。根據(jù)此趨勢(shì)，實(shí)驗(yàn)可得馬尿酸的確轉(zhuǎn)化為了苯甲酸。而乳粉，也因?yàn)榧庸すに囍械睦鋬鰸饪s，苯甲酸產(chǎn)生了富集而有著較高的含量。因此控制原料乳中的苯甲酸便可以控制紅原乳制品中苯甲酸的含量。

回收率實(shí)驗(yàn)。取牛奶樣品，做空白對(duì)照組。樣品按預(yù)處理后，分別取苯甲酸馬尿酸5μg/ml，10μg/ml2個(gè)水平2個(gè)平行做回收率實(shí)驗(yàn)，并用高效液相色譜進(jìn)行測(cè)定。

本文采用苯甲酸、馬尿酸的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液加標(biāo)5μg/ml，10μg/ml回收率分別為：94.64%，89.57%，82.55%，94.89%。馬尿酸、苯甲酸平均回收率為88.60%和92.23%，大于80%，可得該方法有著較高的可行度。

結(jié)果與分析

紅原牦牛乳目前存在問(wèn)題。

（1）采集環(huán)境：牦牛乳目前的都是采用傳統(tǒng)的牧民手工采集然后奶站收購(gòu)的方式，既沒(méi)有機(jī)械的工業(yè)化，也沒(méi)有奶牛的乳頭藥浴技術(shù)。不規(guī)范的采集方式與惡劣的采集環(huán)境，對(duì)牦牛乳中微生物的數(shù)目有著較大影響。而微生物的數(shù)目也直接影響了馬尿酸的轉(zhuǎn)化。

（2）溫度：高原的晝夜有著較大的溫差，中午的高溫會(huì)導(dǎo)致微生物的迭代生長(zhǎng)。

（3）儲(chǔ)存環(huán)境：牧民將采集了的牦牛乳，并不會(huì)直接送向移動(dòng)收奶站，待儲(chǔ)存一定時(shí)間后才會(huì)進(jìn)行回收。期間的不規(guī)范儲(chǔ)存也會(huì)導(dǎo)致微生物的生長(zhǎng)。

紅原牦牛乳中苯甲酸的控制措施。控制苯甲酸的含量，我對(duì)此提出了2點(diǎn)控制措施：一方面是采集的規(guī)范化：環(huán)境衛(wèi)生的控制、規(guī)范的擠奶操作、牦牛乳原料乳儲(chǔ)存與運(yùn)輸?shù)馁|(zhì)量控制等方法都對(duì)控制牦牛原料乳中的質(zhì)量都有著明顯的效果。優(yōu)良的環(huán)境可以減少微生物的菌落總數(shù)，對(duì)苯甲酸的含量進(jìn)行了一定程度上的控制。一方面是保存的質(zhì)量提高：牧民可以利用高溫殺菌；加入41. 47mmol/L 濃度二氧化碳的碳酸水；低溫的保存環(huán)境；添加30～50IU/ mL的Nisin等方法，提高牦牛乳在牧民中的保存質(zhì)量，之后再將牛乳運(yùn)輸至移動(dòng)奶站進(jìn)行系統(tǒng)的工業(yè)加工，得到較高質(zhì)量的牦牛乳。