CD133在子宮內膜癌患者中的表達及患者侵襲轉移高危因素研究

梁健梅+周志君+盧宇青

[摘要] 目的 探討CD133在子宮內膜癌患者中的表達及患者侵襲轉移高危因素。 方法 取2014年12月～2016年12月醫院收治子宮內膜癌患者組織30例作為研究對象，設為觀察組，取同期因異常子宮出血入院行宮腔鏡檢查的30例子宮內膜組織，設為對照組。采用免疫組織化學法測定兩組組織CD133表達情況，分析CD133與子宮內膜癌侵襲轉移的關系。 結果 免疫組化結果顯示：在正常子宮內膜組織中CD133多數呈陰性表達，僅少數在包膜、胞質中存在輕微的陽性反應；子宮內膜癌組織中24例CD133呈陽性表達，陽性率為80.0%，細胞多呈強棕黃色包膜染色；子宮內膜癌組織CD133表達水平與年齡差異無統計學意義（P>0.05）；子宮內膜癌組織CD133表達水平與腫瘤大小、淋巴結轉移、臨床分期及腫瘤類型關系密切（P<0.05）。 結論 CD133在子宮內膜癌患者中呈高表達，且與患者侵襲、轉移關系密切，有助于預測腫瘤的生物行為，值得推廣應用。

[關鍵詞] CD133；子宮內膜癌；侵襲轉移；高危因素；生物行為

[中圖分類號] R737.77 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）13-178-04

[Abstract] Objective To investigate the expression of CD133 in patients with endometrial carcinoma and the risk factors of invasion and metastasis. Methods 30 cases of patients with endometrial carcinoma tissue cured in our hospital from December 2014 to December 2016 were selected as the observation group.During the same period，30 cases of endometrial carcinoma because of abnormal uterine bleeding were selected as control group.Immunohistochemistry was used to detect the expression of CD133 in 2 groups，and the relationship between CD133 and invasion and metastasis of endometrial carcinoma were analyzed. Results The results of immunohistochemistry showed that the expression of CD133 in normal endometrium in the most negative，only a few in the capsule，cytoplasm positive reaction was mild.24 cases of CD133 expression in endometrial carcinoma showed positive，the positive rate was 80%，the cells showed strong brown envelope staining.Endometrial carcinoma the CD133 levels and age had no significant difference（P>0.05）.The CD133 expression in endometrial carcinoma was close to the level of tumor size， lymph node metastasis，clinical staging and tumor type （P<0.05）. Conclusion CD133 is highly expressed in patients with endometrial cancer.It is closely related to the invasion and metastasis of patients，which is helpful to predict the biological behavior of tumor.It is worthy of popularization and application.

[Key words] CD133；Endometrial carcinoma；Invasion and metastasis；Risk factors；Biological behavior

子宮內膜癌（EC）是臨床上常見的疾病，屬于女性生殖器官惡性腫瘤，且隨著人們生活方式的改變，導致EC發生率呈現上升及年輕化趨勢，嚴重影響我國女性健康[1]。目前，臨床上對于EC發病機制尚不完全知曉，而成體干細胞的子宮內膜干細胞可能涉及腫瘤啟動、復發、轉移等[2]。研究表明[3]腫瘤干細胞在白血病和一系列實體腫瘤細胞中發現，并且能表達一種或多種細胞表面標記物。CD133作為常見的表面標志物，最早于國外學者在造血干細胞中發現，并且在腦腫瘤、前列腺癌、結直腸癌、卵巢等等實體瘤中均可表達[4-5]。目前，臨床上對于CD133在子宮內膜癌患者中的研究及與患者侵襲轉移高危因素研究相對較少。為了探討CD133在子宮內膜癌患者中的表達及患者侵襲轉移高危因素。本研究選取2014年12月～2016年12月本院收治子宮內膜癌患者組織30例作為研究對象，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選取2014年12月～2016年12月本院收治子宮內膜癌患者組織30例作為研究對象，設為觀察組，年齡41～72歲，平均（57.5±5.4）歲。腫瘤類型：子宮內膜樣腺癌8例，子宮內膜漿液性乳頭狀腺癌9例，子宮內膜黏液腺癌6例，子宮內膜透明細胞癌4例，其他3例。臨床分期：13例I期，10例II期，5例III期，2例IV期。納入標準：（1）符合《婦產科學》[6-7]中關于子宮內膜癌臨床診斷標準；（2）均經過生化指標、手術病理檢查得到確診；（3）本課題均經過醫院倫理委員會批準同意，自愿簽署知情同意書。取同期因異常子宮出血入院行宮腔鏡檢查的30例子宮內膜組織，設為對照組，年齡40～73歲，平均（57.0±5.3）歲。排除標準：（1）不符合納入標準及子宮內膜癌臨床診斷標準者；（2）合并嚴重心、肝、腎功能異常者；（3）資料不全或伴有其他惡性腫瘤者。兩組患者一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 主要儀器和試劑

為了保證試驗的順利完成，采用的主要儀器和試劑主要由石蠟切片機、掃描電鏡、光學顯微鏡、電熱恒溫鼓風干燥箱、恒溫水浴箱、Trizol試劑等，相關試劑和儀器廠家如下，見表1。

1.3 方法

采用免疫組織化學法測定兩組組織CD133表達情況，取制備的乳腺癌組織和癌旁組織，采用10.0%甲醛液固定，石蠟包埋，制備4um厚連續切片。將切片放置在烘烤箱（60℃）下進行1h烘烤，脫蠟至水，采用PH為7.2～7.4PBS緩沖液3次清洗，每次3min，采用濃度為3%H2O2溶液放在室溫下進行20min孵育，將組織中內源性過氧化物酶消除，采用PBS進行3次沖洗，每次3min，加入1：10普通山羊血清進行15min下孵育，減少非特異性抗原抗體結合。去除組織切片上的血清，滴加一抗（CD133單克隆抗體），4℃下過夜，室溫下放置1h，采用PBS進行3次清洗，每次3min，加入生物素標記的二抗，孵育30min，溫度為37℃。加入辣根過氧化物酶，孵育30min，溫度為37℃，采用PBS進行3次清洗，每次3min，DAB顯色，蘇木精復染8-10s，中性樹膠封片。根據陽性細胞數和染色強度進行半定量測定，在200倍光鏡下每張切片隨機選擇5個視野，每個視野測定3次后取平均值[8-9]。

1.4 評定方法

隨機選擇10個視野，在高倍鏡下每個視野取100個細胞，陽性細胞數共分為5級。0分：染色細胞占總細胞<5%；1分：染色細胞占總細胞5%～25.0%；2分：染色細胞占總細胞25.0～50.0%；3分：染色細胞占總細胞50.0%～75.0%；4分：染色細胞占總細胞75%以上[10-11]。

1.5 統計學分析

采用SPSS18.0軟件處理，計數資料以百分比表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CD133在子宮內膜癌組織和宮內膜組織中的表達

免疫組化結果顯示：正常子宮內膜組織中CD133多數呈陰性表達，僅少數在包膜、胞質中存在輕微的陽性反應（見圖1-A）；子宮內膜癌組織中24例CD133呈陽性表達，陽性率為80.0%，細胞多呈強棕黃色包膜染色（見圖1-B）。

2.2 子宮內膜癌組織CD133與臨床資料相關性

相關性研究結果顯示：子宮內膜癌組織CD133表達水平與年齡差異無統計學意義（P>0.05）；子宮內膜癌組織CD133表達水平與腫瘤大小、淋巴結轉移、臨床分期、腫瘤類型存在正相關性（P<0.05），見表2。

3 討論

子宮內膜癌是臨床上常見的，發病早期臨床癥狀缺乏特異性，多數患者一旦確診已經是中、晚期，從而錯過了最佳治療時機，影響女性健康。目前，臨床上對于子宮內膜癌發病機制尚不完全知曉，多于干細胞有關[12]。國內學者報道[13-14]：從腦腫瘤中分離CD133陽性細胞亞群呈干細胞特性，并且將100個CD133陽性細胞種植于裸鼠體內能發生于人類原發瘤類型相同的腫瘤。從大的角度來說，CD133是一種相對分子量為120KDa，具有5個跨膜區的單肽鏈糖蛋白，主要由胞內C端、兩個含有250個氨基酸殘基的糖計劃位點的胞外大環及胞外的N端結構域組成，局限性的分布在細胞漿膜中，在多種惡性腫瘤的發生、發展中發揮了重要的作用[15]。本研究中，免疫組化結果顯示：在正常子宮內膜組織中CD133多數呈陰性表達，僅少數在包膜、胞質中存在輕微的陽性反應；子宮內膜癌組織中24例CD133呈陽性表達，陽性率為80.0%，細胞多呈強棕黃色包膜染色。提示CD133在子宮內膜癌組織中呈高表達，能直接參與腫瘤的發生、發展。為了進一步驗證CD133在子宮內膜癌患者侵襲轉移中的表達，本課題對入組患者CD133水平與腫瘤大小、淋巴結轉移、臨床分期及腫瘤類型進行研究，結果顯示：子宮內膜癌組織CD133表達水平與年齡差異無統計學意義（P>0.05）；子宮內膜癌組織CD133表達水平與腫瘤大小、淋巴結轉移、臨床分期及腫瘤類型關系密切（P<0.05）。提示CD133與淋巴結轉移及臨床分析存在緊密的聯系，能參與子宮內膜癌的侵襲、轉移，多于子宮內膜癌細胞的遷移和侵襲能力有關，但是對于CD133在子宮內膜癌中的具體機制尚需要進一步研究和探討[16]。

綜上所述，CD133在子宮內膜癌患者中呈高表達，且與患者侵襲、轉移關系密切，有助于預測腫瘤的生物行為，值得推廣應用。

[參考文獻]

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（收稿日期：2017-03-27）