黑龍江省實驗室能力比對乳粉中阪崎腸桿菌檢驗結(jié)果分析

（黑龍江省食品藥品檢驗檢測所，哈爾濱150088）

黑龍江省實驗室能力比對乳粉中阪崎腸桿菌檢驗結(jié)果分析

田冬梅，史春輝，張肖寧

（黑龍江省食品藥品檢驗檢測所，哈爾濱150088）

通過實驗室能力比對工作，評價食品微生物實驗室的檢測能力，提高實驗室的檢測水平，保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。依據(jù)CNAS-GL02《能力驗證結(jié)果的統(tǒng)計處理和能力評價指南》和CNAS-CL57《能力驗證提供者認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說明》進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計和評價。結(jié)果表明：40家參比實驗室中，4家為不滿意結(jié)果，滿意率為90%。食品微生物實驗室檢驗?zāi)芰ι写嬖诓蛔悖瑱z驗?zāi)芰τ写岣摺?/p>

阪崎腸桿菌；實驗室能力比對；結(jié)果評價

0 引言

阪崎腸桿菌（Enterobacter sakazakii）是腸桿菌科的一種，1980年由黃色陰溝腸桿菌更名而來，是人和動物腸道內(nèi)寄生的一種周身有鞭毛，兼性厭氧，無芽孢的革蘭陰性棒狀桿菌，營養(yǎng)要求不高，能在6～47℃寬泛的溫度下生長繁殖[1]。2008年，IVERSEN等在雜志《國際系統(tǒng)與進(jìn)化微生物學(xué)雜志》提議將阪崎腸桿菌生物群劃分為一個新屬，即克羅諾桿菌屬（Crono?bacter spp.）[2-3]，屬內(nèi)包括阪崎克羅諾桿菌（Crono?bacter sakazakii）等7個種和3個亞種[4-5]。阪崎腸桿菌主要危害免疫力低下的嬰幼兒，可引起嚴(yán)重的新生兒腦膜炎小腸結(jié)腸炎和菌血癥，嚴(yán)重者可引起神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥或死亡，死亡率高達(dá)50.0%以上[6]。

1 實驗室能力比對基本情況

1.1 實驗室能力比對樣品

參加比對的實驗室均收到3份樣品，其中包括3個阪崎腸桿菌樣品和3袋奶粉樣品，每個相同編號的阪崎腸桿菌樣品和奶粉樣品作為1份樣品，阪崎腸桿菌樣品為西林瓶裝的白色小球，奶粉樣品每袋質(zhì)量100 g，比對樣品均由中國食品藥品檢定研究院提供。

1.2 參加比對的實驗室

參加黑龍江省乳粉中阪崎腸桿菌實驗室能力比對的實驗室共計40家，包括地市級食品檢驗機(jī)構(gòu)4家，黑龍江省承檢機(jī)構(gòu)7家，嬰配基粉生產(chǎn)企業(yè)29家。按照參加實驗室城市劃分，哈爾濱市、齊齊哈爾市、綏化市及大慶市為主要集中城市，共占77.5%，如圖1所示。

1.3 檢測方法

依據(jù)GB 4789.40-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗阪崎腸桿菌檢驗》[7]及作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行阪崎腸桿菌檢測。

圖1 參加實驗室比對計劃的實驗室城市分布情況

1.4 結(jié)果統(tǒng)計與評價

1.4.1 統(tǒng)計與評價依據(jù)

依據(jù)CNAS-GL02《能力驗證結(jié)果的統(tǒng)計處理和能力評價指南》[8]和CNAS-CL57《能力驗證提供者認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說明》[9]進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計和評價。

1.4.2 結(jié)果評價原則

判定不滿意的標(biāo)準(zhǔn)：實驗室上報結(jié)果中任意一份樣品與樣品實際結(jié)果不一致的，則判定結(jié)果為“不滿意”。

判定滿意的標(biāo)準(zhǔn)：實驗室上報結(jié)果與樣品實際結(jié)果完全一致；且結(jié)果提交時間在截止日期內(nèi)，則判定結(jié)果為“滿意”。

2 實驗室能力比對結(jié)果分析

在上報結(jié)果的40家實驗室中，36家為滿意結(jié)果，4家為不滿意結(jié)果（具體情況如表1所示），整體滿意率為90%，不滿意結(jié)果均為嬰配基粉生產(chǎn)企業(yè)，占生產(chǎn)企業(yè)的13.8%，如圖2所示。圖2中，帶百分號的數(shù)據(jù)表示的是滿意率。析產(chǎn)生錯誤結(jié)果的具體原因，建議加強(qiáng)增菌步驟的操作，提高檢驗人員的檢測能力，加強(qiáng)無菌操作意識。

圖2 參加實驗室比對不滿意結(jié)果情況

3 討論

此次實驗室能力比對為黑龍江省食品藥品監(jiān)督管理局首次牽頭組織的乳粉中阪崎腸桿菌檢驗，比對樣品無背景干擾菌，對實驗室檢驗?zāi)芰σ蟛桓撸ㄟ^上報結(jié)果及實驗室提供的原始記錄分析，發(fā)現(xiàn)食品微生物檢驗實驗室仍存在不足，應(yīng)在原始記錄、檢驗?zāi)芰鞍踩庾R等方面進(jìn)行提高，并加強(qiáng)實驗室的質(zhì)量控制管理工作。

3.1 提升原始記錄書寫能力

實驗室的原始記錄是對檢測人員的檢測活動和結(jié)果數(shù)據(jù)真實性提供的關(guān)鍵證據(jù)，記錄應(yīng)原始、真實、內(nèi)容完整、數(shù)據(jù)無誤、結(jié)論正確、書寫清晰、整潔，應(yīng)包含所有關(guān)鍵實驗操作步驟。但通過實驗室能力比對工作發(fā)現(xiàn)各實驗室提供的原始記錄存在最大的問題是溯源性不強(qiáng)，無具體的樣品處理過程、試驗步驟、菌落形態(tài)描述、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基配制及菌種使用等相關(guān)信息，無法通過原始記錄進(jìn)行回溯，多數(shù)實驗室在對原始記錄的重要性理解不到位。實驗室原始記錄應(yīng)包括以下內(nèi)容[10-11]：樣品名稱、實驗日期、檢驗依據(jù)、檢驗方法、實驗參數(shù)（所用的重要設(shè)備、培養(yǎng)基、試劑、菌株相關(guān)信息）、培養(yǎng)條件、實驗結(jié)果（包括菌落形態(tài)描述）、判定標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)論、檢驗者、復(fù)核者等。對于試驗過程的重要參數(shù)，如培養(yǎng)箱、滅菌器的溫度，培養(yǎng)基及試劑批號，菌種編號、傳代代數(shù)等均應(yīng)有記錄，以滿足實驗記錄的追溯性。實驗記錄修改，應(yīng)有明確要求，如記錄有誤時，應(yīng)用單線劃掉并簽字或蓋章，保持原有字跡清晰可辨，原來數(shù)據(jù)不能抹去或覆蓋等，避免造假。

3.2 提高人員的檢驗?zāi)芰?/p>

通過問卷調(diào)查發(fā)現(xiàn)，從事食品微生物檢驗的人員專科以下學(xué)歷的超過50%，本科學(xué)歷的接近30%，研究生學(xué)歷不足20%，并且研究生學(xué)歷的檢驗人員絕大多數(shù)均為剛畢業(yè)的學(xué)生，工作經(jīng)驗不到3年，微生物專業(yè)領(lǐng)域的檢驗人員不足50%，這很大程度上說明目前食品微生物實驗室檢驗人員專業(yè)素質(zhì)不高，通過不滿意實驗室結(jié)果分析，發(fā)現(xiàn)檢驗人員的基本無菌操作理念和方式方法仍存在較大差異性。故應(yīng)加強(qiáng)實驗室人員專業(yè)技能培訓(xùn)，提高檢驗人員的整體檢驗水平，尤其非微生物專業(yè)或工作經(jīng)驗少的人員應(yīng)提高對標(biāo)準(zhǔn)掌握能力，專業(yè)的檢驗?zāi)芰Αz驗過程的把控及結(jié)果判斷能力，避免誤判或漏判現(xiàn)象。

3.3 重視安全意識

實驗室應(yīng)加強(qiáng)生物安全管理理念，提高檢驗人員的安全意識，應(yīng)嚴(yán)格按照《病原微生物實驗室生物安全管理條例》[12]、《病原微生物實驗室生物安全環(huán)境管理辦法》[13]、《實驗室生物安全通用要求》[14]及《生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范》[15]進(jìn)行實施管理，質(zhì)控用菌的管理及使用應(yīng)參照《中國微生物菌種保藏管理條例》[16]及實驗室相應(yīng)管理文件執(zhí)行。微生物實驗室應(yīng)制定適合自己的生物安全手冊，包括緊急聯(lián)系信息（電話、聯(lián)系人等）、緊急導(dǎo)向信息（實驗室平面圖、緊急出口、實驗室標(biāo)識系統(tǒng)等）、應(yīng)急操作（人員物品出入控制、急救處理指南等）、危險源及處理措施（生物危險、化學(xué)品安全等）及個人防護(hù)措施等。與此同時，定期對實驗室進(jìn)行生物安全檢查，檢驗人員應(yīng)嚴(yán)格遵守生物安全規(guī)范，經(jīng)考核合格的實驗人員方可進(jìn)行致病性微生物的后期鑒定工作[17]。通過提高操作規(guī)范性，加強(qiáng)自我防護(hù)意識，在不污染樣品的同時更應(yīng)避免致病性微生物對試驗人員、實驗室的污染，避免生物安全事故的發(fā)生。

3.4 加強(qiáng)實驗室質(zhì)量控制

實驗室質(zhì)量控制是實驗室質(zhì)量管理不可缺少的一部分，是保障實驗室質(zhì)量安全的至關(guān)點，通過控制樣品檢驗的各個環(huán)節(jié)及影響因素，將檢驗結(jié)果的誤差控制在可控范圍內(nèi)。實驗室的質(zhì)量控制一般包括內(nèi)部質(zhì)量控制和外部質(zhì)量評估。首先，實驗室應(yīng)該做好實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制，應(yīng)盡可能覆蓋實驗室的所有檢測項目和檢測人員，定期對實驗環(huán)境的潔凈度、設(shè)備性能、培養(yǎng)基、關(guān)鍵試劑、生化試劑盒、菌株的活性以及人員檢驗?zāi)芰Αz驗過程關(guān)鍵點進(jìn)行監(jiān)控[18-19]；定期對每個檢測人員進(jìn)行定性或定量檢測的加標(biāo)回收試驗、科室內(nèi)部人員比對、儀器比對等質(zhì)控活動，檢驗過程還應(yīng)考慮到平行樣、空白對照及陽性對照等，降低檢驗過程對結(jié)果的影響。除此之外，實驗室還應(yīng)積極參加檢測范圍相關(guān)的國家能力驗證或有關(guān)政府部門、國際組織、專業(yè)技術(shù)評價機(jī)構(gòu)組織開展的檢驗檢測機(jī)構(gòu)能力驗證或者檢驗檢測機(jī)構(gòu)間比對，提高檢驗人員的技術(shù)水平，確定實驗室的檢測能力，證實實驗室對檢驗程序、方法等有效控制[20]。

[1]曲春波.嬰兒奶粉中阪崎腸桿菌的檢測[J].農(nóng)產(chǎn)品加工（學(xué)刊），2013（7）：64-66.

[2]WHO[World Health Organization].Enterobacter sakazakii（Cronobacter spp.）in powdered follow-up formulae：meeting report，2008.MRA Series15[R].www.who.int/entity/food-safety/publications/micro/ MRA_followup.pdf.

[3]趙貴明，袁飛，楊海榮，等.阪崎腸桿菌的分類變化及新種屬生物學(xué)特性[J].衛(wèi)生研究，2011，39（2）：248-250.

[4]董曉輝，李程思，吳清平，等.食品污染克羅諾桿菌（阪崎腸桿菌）的分離鑒定[J].微生物學(xué)報，2013，53（5）：429-436.

[5]田雪，綜述，王娉，等.克羅諾桿菌（阪崎腸桿菌）分子分型技術(shù)研究進(jìn)展[J].衛(wèi)生研究，2014，43（5）：862-865.

[6]The Centers for Disease Control and Prevention US.Enterobacter sakazakii infect ions associated with the use of powdered infant fomu?la-Tennessee 2001[J].MMWR，2002，51（14）：298-300.

[7]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.GB 4789.40-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗阪崎腸桿菌檢驗[S].2010.

[8]中國合格評定國家認(rèn)可委員會.CNAS-GL02能力驗證結(jié)果的統(tǒng)計處理和能力評價指南[S].2014.

[9]中國合格評定國家認(rèn)可委員會.CNAS-CL57能力驗證提供者認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說明[S].2015.

[10]蘇德模，胡昌勤，曹曉云.藥品檢驗所微生物實驗室質(zhì)量管理規(guī)范問題的淺見[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2003，3（4）：8-10.

[11]李秋菲，王小亮，繩金房.現(xiàn)行版美國藥典微生物實驗室質(zhì)量管理規(guī)范譯介[J].中國藥事，2010，18（19）：4-5.

[12]中華人民共和國國務(wù)院.國務(wù)院令第424號病原微生物實驗室生物安全管理條例[S].2004.

[13]國家環(huán)境保護(hù)總局.國家環(huán)境保護(hù)總局令第32號病原微生物實驗室生物安全環(huán)境管理辦法[S].2006.

[14]中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB 19489-2008實驗室生物安全通用要求[S].2008.

[15]中華人民共和國住房和城鄉(xiāng)建設(shè)部.GB 50346-2011生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范[S].2011.

[16]衛(wèi)生部菌種管理委員會.中國醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理辦法[S]. 1985：03-23.

[17]蔡雪鳳，侯翠艷.淺談食品微生物實驗室全面質(zhì)量管理[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2014，24（13）：1969-1971.

[18]劉銳萍，王峰，劉珊珊，等.食品、藥品微生物檢測實驗室質(zhì)量控制方法分析[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2013，25（07）：847-850.

[19]任軍霞.2011年微生物實驗室質(zhì)控盲樣結(jié)果分析[J].醫(yī)學(xué)動物防制，2012，28（12）：1401-1402.

[20]毛歆，項新華，肖鏡，等.2013年食品藥品系統(tǒng)實驗室能力驗證結(jié)果分析[J].中國藥事，2015，29（11）：1145-1150.

Result analysis of the laboratory proficiency comparison in HeiLongjiang prov?ince:Enterobacter Sakazakii examination in the milk powder

TIAN Dongmei,SHI Chunhui,ZHANG Xiaoning
（Heilongjiang Institute for Food and Drug Control，Harbin 150088，China）

To assess and evaluate the testing proficiency of the food microbiology laboratory by the laboratory proficiency comparison,im?prove the level of laboratory testing,and ensure the accuracy and reliability of testing result.Statistics and evaluate the results according to CNAS-GL02“guidance on statistic treatment of proficiency testing results and performance evaluation”and CNAS-CL57“guidance on the application of accreditation criteria for proficiency testing providers in the field of microbiology”.There were four laboratories that were un?satisfied results in 40 laboratories,satisfaction rate was 90%.The testing proficiency of the food microbiology laboratory is insufficient,and needs to improve.

Enterobacter sakazakii；laboratory proficiency testing；results evaluation

TS252.7

：A

：1001-2230（2017）07-0045-03

2016-11-25

田冬梅（1980-）女，主管藥師，研究方向為食品、藥品、醫(yī)療器械等微生物檢驗。

張肖寧