慢性乙型肝炎證候虛實分類與外周血淋巴細胞亞群的關系

楊麗莎，范劍薇，梁志清，唐美媛，吳淋玲，張 兵，聶 琳，王君宜

(桂林醫學院附屬醫院，廣西 桂林 541001)

【臨床基礎】

慢性乙型肝炎證候虛實分類與外周血淋巴細胞亞群的關系

楊麗莎，范劍薇，梁志清，唐美媛，吳淋玲，張 兵，聶 琳，王君宜

(桂林醫學院附屬醫院，廣西 桂林 541001)

目的：了解慢性乙型肝炎(CHB)患者中醫證候虛實分類與外周血淋巴細胞亞群之間的關系。方法：將CHB患者進行證候虛證、實證及虛實夾雜證分類，并檢測其外周血T、B細胞及自然殺傷(NK)細胞亞群，并對其3個證型組的指標進行分析。結果：CHB 虛證、實證及虛實夾雜3個組的CD4+T細胞百分比均較對照組低(；CD8+T細胞百分比由高至低依次為實證組、虛實夾雜證組、對照組、虛證組，實證組CD4+/CD8+比值顯著低于虛證組或對照組，3個組的B細胞百分比均高于對照組，NK細胞百分比低于對照組。結論：CHB存在著免疫調節紊亂,證候虛實分類與外周血淋巴細胞亞群之間存在一定的相關性，中醫虛實證辨證結合免疫功能檢測具有一定的臨床意義。

慢性乙型肝炎；免疫狀態；中醫虛實分類；T淋巴細胞；B淋巴細胞；NK細胞

我國一般人群乙型肝炎病毒 (hepatitis B virus, HBV)流行率7.18%，估計約9300萬人為慢性HBV感染,其中慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B CHB)患者約2000萬例[1]，中西醫結合防治CHB是我國獨特的方法，中醫藥對人體免疫功能的影響是大多數中藥抗病毒的主要機制之一，其治療優勢在于辨證論治。本研究將CHB患者按照中醫辨證虛實分類，通過檢測其外周血T、B細胞及NK細胞亞群的百分比, 探討中醫證候虛實病機與免疫機制之間的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年9月至2015年12月廣西桂北地區范圍在桂林醫學院附屬醫院及附屬傳染病院符合慢性乙型肝炎的患者200例，年齡在18～60歲(36±11)，病程在1～3年。通過中醫專家進行虛實證分類，虛證共70例，其中男性51例，女性19例；實證共97例，其中男性67例，女性30例；虛實夾雜證共33例，其中男性20例，女13例。同時選取60例健康獻血員作為對照組。

1.2 研究對象

1.2.1 納入標準 參考《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》[1]，檢測血清HBV標志物HBsAg、HBeAg和抗-HBc陽性，HBV-DNA≥ 105copies/ml(中、高復制),肝功能ALT持續或反復升高≥100 U，病程在半年以上，排除其他引起肝臟損傷的病因。

1.2.2 虛實辨證納入標準 依據《病毒性肝炎中醫辨證標準》《中醫診斷學》及2002年《中藥新藥臨床研究指導原則》[2-4]，臨床辨證分為虛證類:主癥面色萎黃、脅肋隱痛不適、頭暈乏力、納少、便溏等,舌質淡紅,苔薄白或少苔脈弱或細等；實證類:主證惡心厭油、脅肋脹痛或刺痛、大便秘結或穢臭、小便黃、舌質紅或紫暗，或有瘀斑、苔黃或膩或粗干，脈弦或弦滑或數等；虛實夾雜類既有虛證又有實證的表現。

1.3 排除標準

排除其他類型肝炎；正在使用核苷(酸)類似物和干擾素等抗病毒藥物或免疫調節劑；已明確診斷為肝癌者；合并嚴重的心、腦、腎、肺功能障礙及重癥糖尿??；無自身免疫性疾病史、嗜酒史及肝毒性藥物使用史。

1.4 血清學指標檢測方法

血清學檢測采自不同組別受試者靜脈血。采用酶法檢測肝功能。采用時間分辨免疫熒光分析法檢測HBV血清標記物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)。采用實時熒光探針定量-聚合酶鏈反應(FQ-PCR)方法,檢測HBV-DNA。外周血淋巴細胞亞群檢測，采用四色熒光標記流式細胞術(Flow cytometry,FCM)，四色淋巴細胞亞群試劑，溶血素0.01 mol/L磷酸緩沖液(PBS),EDTA抗凝血。

1.5 統計學方法

采用SPSS 17.0統計軟件進行統計分析，采用單因素方差分析，統計學顯著性檢驗水準為0.05(雙側)，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

表1顯示，慢性乙型肝炎3個組的CD3+T細胞百分比較對照組差異無統計學意義(P>0.05)；CD4+T細胞百分比與對照組比較，對照組均高于虛證組、實證組及虛實夾雜證組(P<0.05)。CD8+T細胞百分比由高至低依次為實證組、虛實夾雜證組、對照組、虛證組(P<0.05)。CD4+/CD8+比值4個組比較，由高至低依次為虛證組、對照組、虛實夾雜證組、實證組(P<0.05)。B淋巴細胞百分比3個組與對照組比較均升高(P<0.05)，NK細胞百分比3個組與對照組比較均降低(P<0.05)。

組別例數CD3+T細胞(%)CD4+T細胞(%)CD8+T細胞(%)CD4+/CD8+B細胞(%)NK細胞(%)虛證7070.5±9.632.9±6.0*19.2±6.1*1.81±0.4*15.3±4.2*9.93±5.8*實證9771.1±9.831.7±6.6*30.2±6.5*△1.05±0.4*△15.7±5.1*10.5±5.6*虛實夾雜證3370.9±9.132.5±5.9*27.6±5.7*△1.24±0.4*△15.5±4.5*10.2±5.4*對照組6072.1±8.240.4±6.623.8±5.91.62±0.411.5±4.314.6±5.6

注:與健康對照組比較:*P<0.05；與虛證組比較:△P<0.05

3 討論

HBV感染引起肝臟慢性炎癥，主要取決于病毒學和免疫學，尤其是免疫學因素在很大程度上決定了疾病進展與否。當機體感染HBV后，人體各淋巴細胞亞群間的平衡被打破，表現為外周血淋巴細胞亞群百分比、絕對數或功能改變，臨床常進行外周血淋巴細胞免疫功能檢測，以評估患者的病情及預后。其中，CD3+細胞代表總T淋巴細胞。T淋巴細胞依其表型及功能的不同可以分為CD4+與CD8+2個亞群，CD4+T細胞主要為輔助T細胞(Th)，在免疫應答中起輔助和誘導作用；CD8+T細胞主要為細胞毒性T細胞(cytotoxic lymphocyte CTL)，是免疫系統清除病毒感染細胞的主要效應細胞；CD4+/CD8+比值變化可反映機體細胞免疫功能，是衡量機體免疫平衡的重要標志。B淋巴細胞是人體內主要體液免疫細胞。自然殺傷(Natural killer NK)細胞是機體天然免疫的主要承擔者,在天然免疫中發揮重要作用[5]。

HBV感染后導致機體免疫紊亂,表現出不同的免疫狀態與中醫證候有一定的相關性。由于機體正氣不足，濕濁困遏，脾失健運，肝失條達，氣血不和等，臨床上出現肝郁脾虛、脾氣虛弱、肝腎不足、肝膽濕熱及瘀血阻絡等為代表的虛證或實證或虛實夾雜等證[6-7]。關于CHB辨證分型與淋巴細胞免疫功能關系的研究表明，部分指標可以作為臨床辨證的參考依據[8]。探討CHB外周血淋巴細胞百分比變化與虛實證之間的關系，以進一步了解外周血淋巴細胞亞群對CHB中醫證候形成的機制。

本研究結果顯示，CHB虛證、實證、虛實夾雜證型組的CD3+T細胞百分比與對照組比較無統計學意義，提示CD3+T細胞對CHB虛證、實證、虛實夾雜證型所起的免疫作用無明顯的差別。CHB虛證、實證、虛實夾雜證型組的CD4+T細胞百分比均較對照組低，提示機體免疫功能低下、體內特異性抗體生成不足不能清除游離的HBV。CD8+T細胞百分比由高至低依次為實證、虛實夾雜證、對照組、虛證，中醫認為實證主要是病邪過盛“邪正相爭”，CD8+T細胞百分比高于其他證，提示CTL介導的免疫損傷是以實證、虛實夾雜證為主要矛盾的病理基礎。虛證為正氣不足，是CD8+T細胞過多消耗或產生較少，免疫功能紊亂，以致“正虛邪戀”，因此CD8+T細胞可以作為中醫虛證的參考指標。CD4+/CD8+比值在CHB中實證顯著低于虛證或對照組，表明CHB患者機體證候虛實表現與現代免疫功能的變化存在一定的關系。

CHB虛證、實證、虛實夾雜證型組的B細胞百分比均高于對照組，但虛實證組之間比較差異無統計學意義，這表明體液免疫在抵抗HBV中起一定的作用，特別是機體免疫處于清除狀態時尤為明顯。CHB虛證、實證、虛實夾雜證型組的NK細胞百分比顯著低于對照組，提示NK細胞數目的減少可能與機體免疫損傷程度有一定的關系。

綜上所述，CHB患者存在著免疫調節紊亂，中醫辨證虛實分類與T、B及NK細胞亞群之間存在一定關系，免疫功能檢測對于臨床虛實證的判定具有一定的作用。

[1] 中華醫學會肝病學分會,中華醫學會感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J].中國病毒病雜志,2011,1(1):9-23.

[2] 中華醫學會肝臟病學分會,感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南[J].中華肝臟病雜志,2005,13(12): 881-891.

[3] 中國中醫藥學會內科肝病專業委員會．病毒性肝炎中醫辨證標準[J]．中醫雜志,1992,5(5):39-40．

[4] 中華人民共和國衛生部.中藥新藥臨床研究指導原則[S]．北京：中國中醫藥科技出版社,2002:147-156．

[5] MONDELLI M U,VAREHETTA S,OLIVIERO B.Natural killer cells in viral hepatitis:facts and controversies[J].Eur J Clin Invest,2010,9(40):851-563.

[6] 王見義,韓向暉,王靈臺,等.慢性乙型肝炎中醫證型與免疫功能的相關性研究[J].上海中醫藥雜志,2007,41(9):35-36.

[7] 楊麗莎,范劍薇,梁志清.慢性乙型肝炎病毒感染者不同免疫狀態的中醫證候特點[J].中醫雜志,2013,54(13):1135-1137.

[8] 唐翔宇,楊麗莎,唐美媛.廣西桂北地區慢性HBV感染不同免疫狀態與外周血T、B細胞亞群和NK細胞的相關性研究[J].重慶醫學,2013,42(5):496-498.

Chronic Hepatitis B TCM Syndrome Classification and the Relationship Between Peripheral Blood Lymphocyte Subsets

YANG Li-sha， FAN Jian-wei，LIANG Zhi-qing， TANG Mei-yuan，WU Lin-ling， ZHANG Bing， NIE Li，WANG Jun-yi

(AffiliatedHospitalofGuilinMedicalCollege,Guilin,Guangxi541001,China)

Objective:Understand the patients with chronic hepatitis B(CHB) nakedness of TCM syndrome classification and the relationship between peripheral blood lymphocyte subsets.Methods:The patients with CHB were divided into asthenia syndrome (AS) group and sthenia syndrome(SS) group, deficiency and excess syndrome (DES) group, and detect the peripheral blood T and B cells and natural killer (NK) cells, the three card type group index were analyzed. Results In chronic hepatitis B, AS and SS, DES with three groups CD4+T cell percentages are lower than normal control group, CD8+T cell percentage were SS group>the DES group>control group>the AS group. the ratio of CD4+/CD8+SS group were significantly lower than the AS group or control group, the three group B lymphocyte percentage is higher than the control group, the percentage of NK cells is lower than the control group.Chronic hepatitis B have immune dysfunction, CHB of TCM classification have relationship with T and B cell subsets and NK cells, virtual empirical differentiation of TCM combined with immune function test has a certain clinical significance.

chronic hepatitis B; immune status; TCM syndrome classification; T-lymphocytes; B-lymphocytes; NK cell

國家自然科學基金資助項目(81260602)-HBV感染不同免疫狀態證候要素與外周血淋巴細胞亞群的關系

楊麗莎(1957-)，女，桂林人，教授，醫學學士，從事中西醫結合肝病的臨床與基礎研究。

R512.6+2

A

1006-3250(2017)05-0669-03

2016-10-17