大七厘散中大黃及當(dāng)歸薄層色譜鑒別方法改進(jìn)*

溫 馨，江耀倫，陳素珍，涂玉蓉，李美娣，武 力△

（1．廣州華農(nóng)大實(shí)驗(yàn)獸藥有限公司，廣東 廣州 510642； 2．廣東省獸用中藥與天然藥物工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510642）

·檢驗(yàn)檢測(cè)·

大七厘散中大黃及當(dāng)歸薄層色譜鑒別方法改進(jìn)*

溫 馨1，2，江耀倫1，2，陳素珍1，2，涂玉蓉1，2，李美娣1，2，武 力1，2△

（1．廣州華農(nóng)大實(shí)驗(yàn)獸藥有限公司，廣東 廣州 510642； 2．廣東省獸用中藥與天然藥物工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510642）

目的 對(duì)大七厘散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的大黃、當(dāng)歸的薄層色譜鑒別法進(jìn)行改進(jìn)。方法 在大黃的薄層色譜鑒別條件中，選用羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠H薄層板，以正己烷－乙酸乙酯－甲酸（30∶10∶0．5）為展開劑，分離大黃含有的5種有效成分；在當(dāng)歸薄層色譜條件的選擇上，改用正己烷－乙酸乙酯（4∶1）為展開劑。結(jié)果 改進(jìn)后能得到斑點(diǎn)清晰、分離度好的薄層色譜圖，且易觀察，無干擾。結(jié)論 改進(jìn)后的薄層色譜鑒別方法更適合于大七厘散中大黃、當(dāng)歸的鑒別，符合質(zhì)量控制要求，值得關(guān)注并推廣。

大七厘散；大黃；當(dāng)歸；薄層色譜鑒別；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

大七厘散由大黃（酒制）、當(dāng)歸尾（酒制）、血竭、三七、骨碎補(bǔ)等11味藥組方，有化瘀消腫、止痛止血功效，現(xiàn)收載于2015年版《中國(guó)藥典（一部）》[1]，可內(nèi)服也可外敷，古代述其“散者散也，去急病用之”。因散劑比表面積較大，易分散，起效快，故本藥對(duì)跌打損傷、瘀血疼痛、外傷止血等病癥有獨(dú)特療效。關(guān)于大七厘散質(zhì)量研究的文獻(xiàn)中，大多采用高效液相色譜法測(cè)定方中血竭的有效成分血竭素含量[2－5]，也有學(xué)者檢測(cè)方中三七的有效成分人參皂苷 Rg1、人參皂苷 Rb1和三七皂苷 R1的含量[6－7]，卻少有對(duì)大七厘散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)改進(jìn)或提高的研究。為此，筆者在參考2015年版《中國(guó)藥典（一部）》大七厘散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，研究了該藥的鑒別、檢查和含量測(cè)定項(xiàng)，發(fā)現(xiàn)處方中的大黃和當(dāng)歸的薄層鑒別圖譜特異性較差，經(jīng)反復(fù)研究，對(duì)其薄層色譜鑒別法進(jìn)行改進(jìn)，最終得到斑點(diǎn)清晰、分離度好的薄層色譜圖，且陰性樣品無干擾，符合質(zhì)量控制要求。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

儀器：JP－020型超聲波清洗機(jī)（深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司）；WFH－203B型三用紫外分析儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；DHG－9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海申賢恒溫設(shè)備廠）；DFY－500型粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）；HWS－24型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；SHIMADZU AUW120D型電子天平（日本島津公司）。

試藥：大黃對(duì)照藥材（批號(hào)為120984－201202），蘆薈大黃素對(duì)照品（批號(hào)為110795－201308），大黃酸對(duì)照品（批號(hào)為110757－200206），大黃素對(duì)照品（批號(hào)為110756－201512），大黃素甲醚對(duì)照品（批號(hào)為110758－201415），大黃酚對(duì)照品（批號(hào)為 110796－201520），當(dāng)歸對(duì)照藥材（批號(hào)為120927－201516），均購自中國(guó)食品藥品檢定研究院；大七厘散（廈門中藥廠有限公司，批號(hào)為151104，規(guī)格為每袋1．5 g）；其他試劑均為分析純；水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2．1 大黃

溶液制備：取大七厘散6 g，研細(xì)，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，再加鹽酸2 mL，加熱回流30 min，冷卻，用乙醚振搖提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備缺大黃的陰性對(duì)照品溶液。取大黃對(duì)照藥材0．5 g，按供試品溶液制備方法制備對(duì)照藥材溶液。取蘆薈大黃素對(duì)照品、大黃酸對(duì)照品、大黃素對(duì)照品、大黃素甲醚對(duì)照品和大黃酚對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL各含0．5 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。

藥典鑒別方法：照薄層色譜法（2015年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0502）試驗(yàn)，吸取供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各10 μL，對(duì)照藥材溶液及對(duì)照品溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一高效硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶6∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的5個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同的橙黃色熒光主斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1 A。對(duì)照藥材和對(duì)照品在相應(yīng)位置上，不能很好地顯相同的5個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)，未能達(dá)到分離要求；供試品則斑點(diǎn)不清晰，只能模糊顯示3個(gè)橙黃色斑點(diǎn)。試驗(yàn)結(jié)果與2015年版《中國(guó)藥典（一部）》大七厘散大黃薄層色譜鑒別項(xiàng)下描述的“在供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)”有差異。

改進(jìn)方法：同法，吸取供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各10 μL、對(duì)照藥材溶液及對(duì)照品溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑硅膠H薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯－甲酸（30∶10∶0．5）為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏后，在日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同的5個(gè)紅色主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同的紅色斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰，分離度好，且陰性對(duì)照品溶液無干擾。結(jié)果見圖1 B。

圖1 大黃薄層色譜圖

2．2 當(dāng)歸

溶液制備：取大七厘散10 g，加乙醚30 mL，加熱回流1 h，濾過，乙醚液60℃揮干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。同法制備缺當(dāng)歸的陰性對(duì)照品溶液。另取當(dāng)歸對(duì)照藥材0．5 g，按供試品溶液制備方法制備對(duì)照藥材溶液。

藥典鑒別方法：照薄層色譜法（2015年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0502）試驗(yàn)，吸取供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液及對(duì)照藥材溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖2 A。可見，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，但斑點(diǎn)分離度較差，拖尾嚴(yán)重，對(duì)照藥材和供試品的斑點(diǎn)對(duì)不齊，且陰性對(duì)照品溶液有干擾，結(jié)果難以判定。

改進(jìn)方法：同法，吸取供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液及對(duì)照藥材溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光（365 nm）下檢視。結(jié)果見圖2 B。可見，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照品溶液無干擾。

3 討論

中藥質(zhì)量直接關(guān)系人類健康，鑒別中藥常采用的手段有性狀、理化和色譜鑒別等。薄層色譜鑒別法廣泛應(yīng)用于中藥成分分析，可同時(shí)鑒別多個(gè)樣品，具有成本較低、分析時(shí)間較短，分析結(jié)果直觀性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。然而，被分離物質(zhì)的復(fù)雜程度可能會(huì)使成分之間相互干擾，色譜效果較單一藥材的色譜效果差。且也易受外界環(huán)境因素的影響，供試品的預(yù)處理、展開劑、薄層板等因素均會(huì)影響薄層色譜圖的效果。因此，需要研究者根據(jù)具體處方調(diào)整薄層色譜鑒別的條件。

圖2 當(dāng)歸薄層色譜圖

傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為，筋脈受損，氣血無以運(yùn)行，血不循經(jīng)，溢于脈外，故發(fā)為肢體腫脹、疼痛。大七厘散方中主以血竭入血分，可活血散瘀、收斂止血；三七活血止血，消腫止痛；輔以乳香、沒藥、祛瘀行氣、活血消腫；大黃酒制則加強(qiáng)其破血散瘀之力，尤對(duì)損傷瘀血更為有效；當(dāng)歸有活血補(bǔ)血止痛之效；骨碎補(bǔ)、自然銅、土鱉蟲既活血消瘀，又接筋續(xù)骨；冰片、硼砂靜心養(yǎng)氣，以助諸藥發(fā)揮藥力。由此可見，大七厘散內(nèi)服還是外敷，均對(duì)多重病癥有確切療效。國(guó)內(nèi)很多報(bào)道也證實(shí)，大七厘散配合其他療法不僅能縮短急性踝關(guān)節(jié)損傷的治療時(shí)間[8－10]，還對(duì)慢性累積性勞損引起的肱骨外上髁炎有明顯療效[11]。王秉慧等[12]認(rèn)為，大七厘散與頻譜聯(lián)合使用，可擴(kuò)張皮膚毛囊，加強(qiáng)藥物的滲透和吸收，同時(shí)大七厘散有化瘀消腫和止痛止血功效，可明顯改善局部血液循環(huán)，消腫止痛，加速損傷組織恢復(fù)。此外，張明興[13]研究發(fā)現(xiàn)，采用大七厘散口服及外敷治療帶狀皰疹能快速止痛，阻止新皰疹產(chǎn)生。王守信[14]曾報(bào)道，使用抗生素治療血尿效果不滿意，后口服大七厘散，并用青霉素和鏈霉素，血尿癥狀痊愈，隨訪1．5年未見復(fù)發(fā)[14]。

大七厘散質(zhì)量研究中關(guān)于大七厘散薄層色譜鑒別的報(bào)道較少[5－6，15]，且鑒別方法均與《中國(guó)獸藥典》類似。大七厘散為純中藥制劑，成分較復(fù)雜，在大七厘散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的過程中，對(duì)方中大黃和當(dāng)歸的薄層色譜鑒別方法進(jìn)行了改進(jìn)。對(duì)大黃的研究中，先用藥典方法對(duì)其的5種有效成分進(jìn)行分離，結(jié)果，有蘆薈大黃素與大黃酸的斑點(diǎn)大部分重疊，未能分離，且大黃素甲醚的橙黃色斑點(diǎn)沒有顯示。在改進(jìn)方法中，探索了薄層板和展開劑的選擇，分離大黃含有的5種有效成分，結(jié)果，供試品溶液、對(duì)照藥材溶液以及5種對(duì)照品混合溶液均得到滿意的分離效果，斑點(diǎn)清晰。改進(jìn)方法所用的展開劑與李蒙蒙等[16]用薄層色譜法鑒別三黃片中的有效成分一致，并可以得知，薄層色譜圖中大黃有效成分從上到下依次為大黃酚、大黃素甲醚、大黃素、大黃酸、蘆薈大黃素。尹麗等[17]也曾用正己烷－乙酸乙酯－甲酸（30∶10∶0．5）為展開劑，但蘆薈大黃素和大黃酸的斑點(diǎn)仍有部分重疊，分離效果不佳。這可能與薄層板的種類有關(guān)。

本研究中，大黃薄層色譜鑒別的改進(jìn)方法使用了羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板，能使大黃5種成分達(dá)到分離要求。另外，在當(dāng)歸薄層色譜展開劑的選擇上，減少了正己烷與乙酸乙酯的比例，增加了展開劑極性，更有利于斑點(diǎn)的顯示，減少了非主斑點(diǎn)的干擾，色譜圖斑點(diǎn)清晰，且陰性樣品無干擾。經(jīng)改進(jìn)，大七厘散中當(dāng)歸的薄層色譜鑒別方法所使用的展開劑比例與止痛紫金丸的一致[18]，而且在大七厘散的處方組成中，除了三七、冰片和硼砂外，其余8味藥均為止痛紫金丸的處方組成，說明使用正己烷－乙酸乙酯（4∶1）為展開劑更有利于當(dāng)歸在這2個(gè)成方制劑中的薄層色譜鑒別。

綜上所述，經(jīng)過改進(jìn)大七厘散中大黃、當(dāng)歸薄層色譜鑒別方法，在不增加工作量的前提下，能獲得比藥典法分離效果更好的圖譜，斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無干擾，適應(yīng)性較強(qiáng)，符合質(zhì)量控制要求，值得推廣。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：495．

[2]陳 ，劉振香，章麗華．HPLC法測(cè)定大七厘散中血竭素的含量[J]．中國(guó)藥師，2006，9（12）：1126－1127．

[3]徐雄華，胡珊梅．HPLC法測(cè)定化瘀止痛散中血竭素的含量[J]．海峽藥學(xué)，2011，23（9）：69－71．

[4]葉優(yōu)苗．高效液相色譜法測(cè)定大七厘散中血竭素含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2008，17（11）：35．

[5]陳惠玲，胡珊梅，陳 潔，等．大七厘散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]．中國(guó)藥物評(píng)價(jià)，2015，32（2）：83－86．

[6]丁鴻珊 ．大七厘散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J]．海峽藥學(xué)，2009，21（2）：56－58．

[7]席珊珊，謝亞晶．HPLC法同時(shí)測(cè)定大七里散中3種成分的含量[J]．黑龍江科技信息，2016（12）：81．

[8]熊小燕．大七厘散外敷配合電針治療踝關(guān)節(jié)韌帶損傷34例[J]．江西中醫(yī)藥，2005，36（5）：55．

[9]何慶生，羅 萍．手法配合大七厘散外敷治療急性踝關(guān)節(jié)扭傷臨床觀察[J]．陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，38（6）：76－78．

[10]陳傳江．止痛消炎軟膏合大七厘散治療急性踝關(guān)節(jié)扭傷的臨床觀察[J]．中國(guó)實(shí)用鄉(xiāng)村醫(yī)生雜志，2006，13（9）：35．

[11]李世林，魏 理，宋英麗，等．大七厘散配合針刺拔罐治療肱骨外上髁炎的臨床觀察[J]．中國(guó)民間療法，2014，22（7）：27．

[12]王秉慧，逄麗華，郭保利，等．紅外線與大七厘散聯(lián)合治療急性軟組織損傷[J]．青島醫(yī)藥衛(wèi)生，1997，29（12）：11－12．

[13]張明興．大七厘散治療帶狀皰疹18例[J]．中國(guó)民間療法，1999，7（12）：45－46．

[14]王守信．大七厘散治療血尿[J]．中成藥研究，1983，6（9）：47．

[15]吳敏姿，吳 鋒，葉端爐．大七厘散中血竭、大黃的薄層色譜鑒別[J]．中國(guó)藥業(yè)，2005，14（10）：74－75．

[16]李蒙蒙，田小杏，馬麗娟，等．薄層色譜法鑒別三黃片中的有效成分[J]．河南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2016，35（2）：81－84．

[17]尹 麗，張瀟菡，馬麗娟，等．牛黃解毒片的顯微鑒別及薄層鑒別[J]．河南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2016，35（2）：85－88．

[18]劉 燕，鄭笑為，姚令文，等．止痛紫金丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J]．中國(guó)藥事，2010，24（6）：573－575．

Improvement of TLC Identification ofRheum Palmatum and Radix Angelicae Sinensis in Daqili San

Wen Xin1，2，Jiang Yaolun1，2，Chen Suzhen1，2，Tu Yurong1，2，Li Meidi1，2，Wu Li1，2
（1．Guangzhou Huanongda Experimental Veterinary Drug Co．，LTD．，Guangzhou，Guangdong，China 510642； 2．Guangdong Province Modern Pig Data EngineeringTechnology Research Center，Guangzhou，Guangdong，China 510642）

Objective To improve the TLC identification of Rheum Palmatum and Radix Angelicae Sinensis of Daqili San．M ethods Silica gel H with sodium carboxymethylcellulose as adhesive was used as stationary phase，with normal hexane－ethyl acetate－formic acid（30∶10∶0．5）as developing solvent to separate 5 constituents of Rheum Palmatum in TLC．Hexane－ethyl acetate（4∶1）was used as expansion agents in TLC of Radix Angelicae Sinensis．Results The chromatographic picture was clear，distinct，easy to identify and no interference after improvement．Conclusion The improvement of TLC identification of Rheum Palmatum and Radix Angelicae Sinensis in Daqili San is more adaptable and controllable，it can reach the quality control requirements，which is worthy of promotion．

Daqili San；Rheum Palmatum；Radix Angelicae Sinensis；TLC；quality standard

R284．1

A

1006－4931(2017)14－0007－03

2017－01－29；

2017－02－14)

10．3969／j．issn．1006－4931．2017．14．003

2015年廣東省廣州市天河區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目[201508YG066]。

溫馨（1989－），女，碩士研究生，主要從事新獸藥開發(fā)工作，（電子信箱）171034171＠qq．com。

△通訊作者：武力（1970－），男，博士研究生，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事新獸藥開發(fā)工作，（電子信箱）1187131629＠qq．com。