大腸癌組織中Galectin-3與MMP-2的表達及臨床意義

季偉濤 王曉磊 展鵬遠

大腸癌組織中Galectin-3與MMP-2的表達及臨床意義

季偉濤 王曉磊 展鵬遠

目的探討大腸癌組織中Galectin-3與MMP-2的表達水平及臨床意義。方法收集60例結腸癌組織標本及28例癌旁正常腸黏膜組織標本，同時收集大腸腺瘤標本31例。采用免疫組化(SP)法測定標本中的Galectin-3、MMP-2的表達水平，分析兩組的相關性。結果大腸癌、大腸腺瘤中的Galectin-3、MMP-2陽性表達水平明顯高于正常大腸黏膜(P＜0.05)，大腸癌組織Galectin-3、MMP-2陽性表達水平明顯高于大腸腺瘤(P＜0.05)。低分化、有淋巴結轉移、浸潤程度達肌層或漿膜層的大腸癌組織表達水平明顯高于中高分化、無淋巴結轉移、浸潤未超肌層者(P＜0.05)。兩者呈正相關。結論大腸癌組織中存在MMP-2、Galectin-3表達升高，兩者高表達與大腸癌的浸潤、轉移、分化有關，故MMP-2、Galectin-3的測定可能為判斷大腸癌的進展有一定的臨床意義。

大腸癌；Galectin-3；MMP-2

大腸癌是目前常見的一種惡性腫瘤。浸潤和轉移是其重要特性之一，也是某些實體腫瘤不能治愈的原因。基質金屬蛋白酶(MMP-2)對細胞外基質有降解作用，這一作用利于腫瘤血管的形成，因此其參與了腫瘤的浸潤和轉移過程[1-2]。β-半乳糖苷結合蛋白-3(Galectins-3)屬凝集素家族的重要成員之一，它可作為MMP-2的底物，故被認為在腫瘤浸潤和轉移中同樣發揮著重要作用[3]。本研究通過對大腸癌組織中的Galectin-3和MMP-2表達水平進行測定，探討兩者在大腸癌發生和進展中的作用。

1 材料和方法

1.1 材料收集2015-01—2016-11在河南大學第一附屬醫院外科行手術切除術治療的患者60例，均經手術病理確診。共收集60例大腸癌標本及癌旁正常黏膜組織28例作為對照，同時選擇同期行外科手術切除的大腸腺瘤標本31例。排除標準：術前行放化療治療者；其他部位的惡性腫瘤者；伴有免疫性疾病者。60例患者中男31例，女29例，年齡30～74歲，中位年齡54.8歲；原發病灶部位：結腸23例，直腸37例；分化程度：低分化16例，中高分化44例；浸潤程度：達肌層或漿膜層43例，未超肌層17例；伴有淋巴結及遠處轉移34例。

1.2 方法采用免疫組化(SP)法測定標本中的Galectin-3、MMP-2的表達水平，兔抗人Galectin-3多克隆抗體、兔抗人MMP-2多克隆抗體均由上海領成生物技術有限公司提供；免疫組化MaxVision試劑盒羊抗鼠/兔由上海將來實業股份有限公司提供。取3μm石蠟切片，脫蠟至水，以3%過氧化氫室溫孵育10 min，消除內源性過氧化物酶活性，蒸餾水沖洗，磷酸緩沖鹽溶液(PBS)浸泡5 min，微波爐加熱檸檬酸鈉緩沖液(0.01 mmol/L)至沸騰后，取標本切片置入其中，抗原熱修復15 min，室溫下靜置4 min，磷酸緩沖鹽溶液沖洗5 min，共沖洗3次。滴加Ⅰ抗50μL(Galectin-3 1∶80工作液，MMP-2 1∶80工作液)，置于4℃冰箱過夜。磷酸緩沖鹽溶液沖洗5 min，共沖洗3次。滴加Ⅱ抗(快捷型酶標羊抗鼠、兔IgG聚合物)，室溫孵育15 min。磷酸緩沖鹽溶液沖洗5 min，共沖洗3次。DAB顯色5 min，終止顯色，蒸餾水沖洗。蘇木素復染，透明、封片，于高倍鏡下觀察。

1.3 SP結果評定Galectin-3、MMP-2蛋白主要表達于胞質，胞質內可觀察到棕黃色或棕褐色顆粒，可判斷為陽性細胞。以染色強度和陽性細胞所占百分比來評定。在400倍視野下，每張切片上任選4個視野進行觀察，根據切片中平均陽性比及染色程度進行計分，最低0分，最高3分。無著色為0分，淡黃色為1分，黃或深黃色為2分，褐或棕褐色為3分；無陽性細胞0分，陽性細胞比低于25%為1分，25%～75%之間為2分，超75%為3分。將兩項積分相加后總分進行分級，0分為陰性(－)，1～2分為弱陽性(＋)，3～4分為(＋＋)，5～6分為(＋＋＋)。

1.4 統計學方法采用SPSS 21.0統計學軟件進行數據分析，采用秩和檢驗和Spearman等級相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 大腸癌、大腸腺瘤、正常大腸黏膜中的Galectin-3、MMP-2表達情況(表1)大腸癌、大腸腺瘤中的Galectin-3、MMP-2陽性表達水平明顯高于正常大腸黏膜(P＜0.05)，大腸癌組織Galectin-3、MMP-2陽性表達水平明顯高于大腸腺瘤(P＜0.05)。

2.2 不同臨床特征結腸癌組織的Galectin-3、MMP-2陽性表達水平情況(表2～3)Galectin-3、MMP-2陽性表達水平在性別、年齡、腫瘤位置上差異無統計學意義(P＞0.05)，低分化、有淋巴結轉移、浸潤程度達肌層或漿膜層的大腸癌組織表達水平明顯高于中高分化、無淋巴結轉移、浸潤未超肌層者(P＜0.05)。

表1 大腸癌、大腸腺瘤、正常大腸黏膜中的Ga lectin-3、MMP-2表達情況(n)

表2 不同臨床特征結腸癌組織的Galectin-3陽性表達水平情況(n)

表3 不同臨床特征結腸癌組織的MMP-2陽性表達水平情況(n)

2.3 大腸癌組織中Galectin-3、MMP-2表達的關系Pearman等級相關分析顯示，大腸癌組織中Galectin-3表達與MMP-2表達呈正相關(r＝0.723，P＝0.001，表4)。

表4 大腸癌組織中Galectin-3、MMP-2表達的關系(n)

3 討論

浸潤和轉移是導致惡性腫瘤患者死亡的主要原因。腫瘤組織及其間質基底膜可防御腫瘤細胞浸潤和擴散，基底膜的完整性被破壞為惡性腫瘤侵襲創造了條件[4]。正常情況下，基底膜主要成分為Ⅳ型膠原，而MMP-2是MMPs家族的重要成員，可通過降解Ⅳ、Ⅴ型膠原和層黏連蛋白來破壞基底膜的完整性[5]。武雪亮等[6]研究證實，MMP-2可引起患者免疫反應，促進腫瘤血管形成，為腫瘤的轉移提供了條件，故MMP-2參與了惡性腫瘤的侵襲和轉移過程。有研究表明，MMP-2的表達水平與肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤遠處轉移、分化程度、組織學分型等密切相關[7-8]，本研究結果與之相符，提示MMP-2的高表達在大腸癌的發生和進展中起著重要作用，且與癌細胞的浸潤和轉移呈正相關。

Galectin-3作為MMP-2的底物，現有研究表明，Galectin-3可能參與了腫瘤的浸潤和轉移，另外Galectin-3具有糖親和性、參與炎癥細胞的游走及延緩細胞凋亡等作用[9-10]，故腫瘤組織中Galectin-3高表達可促進細胞聚集和提高內皮細胞的親和性，這為腫瘤轉移提供了可能。

本研究結果顯示，大腸癌組織中Galectin-3表達明顯高于正常大腸黏膜和大腸腺瘤，且與腫瘤的分化程度、浸潤深度、是否轉移有關，其表達水平與MMP-2呈正相關，說明隨著大腸癌病情的進展，Galectin-3隨之增強，進而影響大腸癌侵襲能力，促進了腫瘤的分化和淋巴結轉移，使患者的預后不良。

綜上所述，大腸癌組織中存在MMP-2、Galectin-3表達升高，兩者高表達與大腸癌的浸潤、轉移、分化有關，故MMP-2、Galectin-3的測定可能為判斷大腸癌的進展有一定的臨床意義。

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2017-03-13)

1005-619X(2017)08-0852-03

10.13517/j.cnki.ccm.2017.08.030

475001河南大學第一附屬醫院外科