DLX2在結腸癌中的表達及其臨床意義

張 榮,喬 文

(1西安交通大學第一附屬醫院消化內科,西安 710061;2延安大學咸陽醫院消化內科;*通訊作者,E-mail:qiaowen1202@126.com)

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DLX2在結腸癌中的表達及其臨床意義

張 榮1,2,喬 文1*

(1西安交通大學第一附屬醫院消化內科,西安 710061;2延安大學咸陽醫院消化內科;*通訊作者,E-mail:qiaowen1202@126.com)

目的 探討DLX2在結腸癌組織及癌旁正常組織中的表達差異及在結腸癌中的意義。 方法 收集96例結腸癌患者的癌組織及相應癌旁正常組織,應用免疫組織化學技術檢測DLX2的表達,分析其表達與結腸癌臨床病理參數的關系。 結果 結腸癌組織中DLX2 呈陽性表達,與癌旁正常組織相比,其表達水平顯著升高(P<0.01)。DLX2的表達在結腸癌的不同TNM分期、不同分化程度和是否有淋巴結轉移之間,差異均有統計學意義(P<0.05)。 結論 DLX2的高表達可能促進結腸癌的發生發展,深入研究其功能有可能為結腸癌的診斷治療及預后提供新的靶標。

DLX2基因; 結腸癌; TNM分期

結腸癌是常見的惡性腫瘤之一,隨著社會經濟的發展,其發病率逐年上升,然而其發病機制并不明確[1]。研究顯示,基因異常是腫瘤發生的關鍵所在,一直以來都是腫瘤分子機制研究的熱點。因此,尋找結腸癌相關基因對其診治具有重要意義。distal-less 同源盒基因2(distal-less homeobox 2,DLX2)是同源盒基因亞家族DLX基因家族成員之一,近年研究表明,其異常表達與多種血液系統腫瘤及實體腫瘤的進程密切相關[2-5]。然而,DLX2與結腸癌的關系并不清楚。我們應用免疫組織化學的方法,檢測DLX2基因在結腸癌及相鄰的正常癌旁組織中的表達特征,分析其表達與結腸癌患者臨床病理因素的關系,為結腸癌的分子診斷及靶向治療提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 組織標本 研究所需標本來自2013-01～2015-12延安大學咸陽醫院確診為原發性結腸癌96例患者行手術切除的結腸癌及相應癌旁正常組織。所有標本均經病理確診,并采用4%中性甲醛固定和石蠟包埋。所有患者術前均未接受過化療、放療或生物制劑等治療?；颊吖?6例,年齡32-83歲,平均年齡(48.5±11.2)歲,其中男性65例,女性31例;高分化癌30例,中分化35例,低分化31例;臨床分期中,Ⅰ期6例,Ⅱ期45例,Ⅲ期24例,Ⅳ期21例;55例病人有淋巴結轉移。

1.1.2 主要試劑 鼠抗人的DLX2單克隆抗體購自美國Abcam公司,SP免疫組化試劑盒購自美國Zymed Lab公司,HRP標記羊抗鼠IgG抗體購自美國Gibco公司,APES防脫片膠購自北京中杉公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學檢測 采用SP法,按試劑盒說明書操作步驟進行。將包埋好的標本進行5 μm的連續切片;脫蠟水化;然后加入3%的H2O2,室溫下放置10 min;再將切片放置于檸檬酸緩沖液(10 mmol/L,pH 6.0)中,微波加熱以修復抗原(95 ℃,10 min);冷卻至室溫后加入山羊血清封閉30 min;加入鼠抗人DLX2多克隆抗體(1 ∶150),保濕盒中過夜(4 ℃);復溫(37 ℃,1 h),PBS振洗 3次(5 min/次);加入生物素標記的二抗 (1 ∶2 000),放置于保濕盒中,置于37 ℃,30 min,PBS振洗 3次(5 min/次);加入反應液,放置于保濕盒中,置于37 ℃,1 h,PBS振洗 3次(5 min/次);加入DAB試劑后根據觀察控制顯色時間,用蒸餾水沖洗(15 min);蘇木精復染(1 min),蒸餾水沖洗后脫水透明,用中性樹膠封片后備用。

1.2.2 染色評分 由兩位高年資病理醫師進行染色評分,評分醫師對患者的臨床以及病理資料均不知情。評分時隨機抽選5個視野,根據每個視野中染色陽性細胞所占細胞總數的百分比以及染色的深淺進行評分。陽性細胞百分比如果≤1%細胞染色為0分;1%-25 %細胞染色為1分; 26%-50 %細胞染色為2分; 51%-75 %細胞染色為3分;76%-100 %細胞染色為4分。染色強度評分標準為:細胞無著色為0分;弱染色(淡黃色)為1分;中等強度染色(棕黃色)為2分;強染色(棕褐色)為3分。將兩個分數相加作為最終評分,最終評分如果大于3分則判定為陽性。

1.3 統計學分析

采用SPSS20.0統計學軟件(SPSS,Chicago,Illinois)進行分析。樣本間計數資料的比較采用χ2檢驗進行。若P<0.05則被認為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 DLX2在結腸癌組織中顯著高表達

對結腸癌和癌旁正常結腸組織標本進行免疫組織化學分析,結果顯示,DLX2主要表達在細胞核中,而結腸癌組織中DLX2的表達水平顯著增高(見圖1)。統計結果顯示,結腸癌組織中DLX2陽性表達的增高與癌旁正常結腸組織相比具有統計學差異(P<0.01,見表1)。

圖1 結腸癌及癌旁正常組織中DLX2的表達 (×200)Figure 1 Expression of DLX2 in colon cancer and matched adjacent non-tumor tissues (×200)

表1 DLX2在結腸癌及癌旁正常組織中的表達

Table 1 DLX2 expression in colon cancer and matched adjacent non-tumor tissues

分組nDLX2表達陽性陰性χ2P結腸癌組織96712556.5540.000癌旁正常組織961977

2.2 DLX2表達與結腸癌臨床病理指標的相關性分析

統計結果顯示,DLX2的高表達與結腸癌的分化程度關系密切,分化程度越低,DLX2表達的陽性率越高(P<0.05)。DLX2在TNMⅢ期和Ⅳ期的結腸癌的陽性表達率顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期的結腸癌(P<0.05);有淋巴結轉移的結腸癌組織中DLX2的陽性表達率顯著高于不伴轉移的結腸癌組織標本(P<0.05);而DLX2的表達在不同年齡及不同性別的結腸癌組織中沒有明顯差異(P>0.05,見表2)。

3 討論

結腸癌是我國乃至世界范圍內發病率和死亡率均很高的惡性腫瘤[6],在我國位于消化系統腫瘤發病率的第三位。而且隨著人民的飲食習慣和飲食結構的改變,我國結腸癌的發病率和死亡率均逐年上升,且患病人群有年輕化的趨勢。CEA、CA199等傳統腫瘤標志物敏感性較差,在早期結腸癌患者中陽性率低,不利于早期篩查。目前,結腸癌的診斷主要依賴腸鏡及腹部CT 等方法,大多數患者發現時已處于腫瘤晚期,失去了最佳的治療時機,因此尋找特異的關鍵分子及治療靶點對結腸癌的早期診斷、預后判斷、新藥開發和臨床治療具有重要意義。

表2 DLX2的表達與結腸癌臨床病理特征的相關性分析

Table 2 Relationship of the immunohistochemical expression of DLX2 with clinicopathological parameters in colon cancer

臨床病理參數nDLX2陽性陰性χ2P性別0.2850.594 男654718 女31247年齡0.1730.678 <50歲34268 ≥50歲624517分化程度 高30282 中352694.169*0.041* 低31171411.676*0.001*TNM分期4.8360.028 Ⅰ-Ⅱ513318 Ⅲ-Ⅳ45387淋巴結轉移6.2360.012 無412516 有55469

*表示與高分化比較

同源盒基因(homeobox gene,Hox)是在果蠅體內發現的基因,其不僅參與胚胎時期消化道的發育,而且與消化系統腫瘤的發生、發展及預后密切相關[7-10]。distal-less 同源盒(distal-less homeobox,DLX)基因家族是同源盒基因家族的亞家族,DLX2是DLX家族中的一員,其在腫瘤中的研究仍處于起始階段,近年來研究發現其異常表達與急性髓性白血病、淋巴瘤、卵巢癌、乳腺癌、胃癌的進程密切相關,能促進腫瘤的增殖和轉移[2-5,11-13]。但關于DLX2與結腸癌的關系并不明確,僅有的一項關于DLX2在結腸癌中表達的研究顯示,DLX-2在結腸癌組織中呈現一種多樣化的表達特征,即相比正常組織DLX2出現表達上調、相似或下調等不同情況[14],那么DLX2在結腸癌中是什么樣的表達模式就值得關注,而明確DLX2在結腸癌中的表達特征是深入研究其在結腸癌中的作用及機制的基礎。

本研究采用免疫組織化學染色觀察結腸癌組織及癌旁組織DLX2的表達。結果顯示無論在癌組織或者癌旁組織,DLX2主要表達在細胞核中。96例結腸癌組織中,有71 例呈 DLX2陽性高表達,而相應癌旁正常組織呈顯著低表達甚至表達缺失,其統計學具有顯著差異。分析結腸癌患者臨床病理參數和DLX2的表達關系,結果表明,DLX2的高表達在不同性別和不同年齡的患者中差異無統計學意義,但與結腸癌的惡性程度有密切關系,即TNM分期越高的結腸癌組織中DLX2陽性表達率越高,并且DLX2的陽性高表達還與淋巴轉移情況密切相關。DLX2可能成為一種結腸癌患者新的監測指標,以輔助臨床的診斷治療以及隨訪。

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Expression and clinical significance of distal-less homeobox 2 in colon cancer

ZHANG Rong1,2,QIAO Wen1*

(1DepartmentofGastroenterology,FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,Xi’an710061,China;2DepartmentofGastroenterology,XianyangHospitalofYan’anUniversity;*Correspondingauthor,E-mail:qiaowen1202@126.com)

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of Distal-less homeobox 2 (DLX2) protein in colon cancer.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expression of DLX2 protein in 96 colon cancer tissues and adjacent non-tumor tissues.Statistical analysis was used to evaluate the relationship between the clinicopathological parameters and the expression of DLX2.ResultsThe DLX2 expression was significantly higher in colon cancer tissues than that of the corresponding non-tumor tissues(P<0.01).The up-regulation of DLX2 was significantly related with TNM stage,differentiation grade and lymph node metastasis(P<0.05).ConclusionThe results suggest that higher expression of DLX2 may promote the carcinogenesis and progression of colon cancer.Further study on the function of DLX2 may provide a new strategy for the diagnosis,treatment and prognosis of colon cancer.

distal-less homeobox 2(DLX2)； colon cancer； TNM stage

張榮,女,1980-09生,學士,主治醫師,E-mail:zhangrzt@126.com

2017-01-10

R735.35

A

1007-6611(2017)04-0362-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.04.013