A型產氣莢膜梭菌噬菌體裂解酶Cp51的原核表達及活性檢測

呂夢娜，龍航宇，王麗梅，唐 陶，陳冰冰，林瑞慶

(華南農業大學 獸醫學院/廣東省動物源性人獸共患病預防與控制重點實驗室，廣東 廣州510642)

A型產氣莢膜梭菌噬菌體裂解酶Cp51的原核表達及活性檢測

呂夢娜，龍航宇，王麗梅，唐 陶，陳冰冰，林瑞慶

(華南農業大學 獸醫學院/廣東省動物源性人獸共患病預防與控制重點實驗室，廣東 廣州510642)

【目的】原核表達A型產氣莢膜梭菌噬菌體裂解酶Cp51并研究其對A型產氣莢膜梭菌Clostridium perfringens的體外抗菌活性。 【方法】合成噬菌體裂解酶Cp51基因，并構建了pET-32a-Cp51原核表達載體，轉化到大腸埃希菌Escherichia coli BL21(DE3)，經終濃度為0.5 mmol·L–1的IPTG誘導以及鎳柱純化后，獲得了可溶性的Cp51重組蛋白；用比濁法檢測Cp51重組蛋白的殺菌活性。 【結果】噬菌體裂解酶Cp51重組蛋白能夠有效降低7株A型產氣莢膜梭菌的濁度，裂解酶質量濃度在5 μg·mL–1以上、作用30 min對A型產氣莢膜梭菌的殺菌率可達到99.99%以上，而對其他種類細菌無殺菌效果。 【結論】A型產氣莢膜梭菌噬菌體裂解酶Cp51重組蛋白對

A型產氣莢膜梭菌有較強的體外殺菌活性和特異性，研究結果為后續裂解酶Cp51的臨床應用奠定基礎。

產氣莢膜梭菌；噬菌體；裂解酶；蛋白表達；殺菌活性

產氣莢膜梭菌Clostridium perfringens又名魏氏梭菌C. welchii，是一種重要的人畜共患病原菌[1]。產氣莢膜梭菌為兩端鈍圓厭氧性菌，呈粗桿狀，單個或成對存在，是一種能產芽孢的革蘭陽性菌，在人和動物的腸道內普遍存在，也廣泛分布于污水、土壤等自然環境中。根據產氣莢膜梭菌產生的4種主要外毒素，可將產氣莢膜梭菌分為A、B、C、D和E 型，其中A型產氣莢膜梭菌是引發人類氣性壞疽及家禽壞死性腸炎的主要病原[2]。……