不同濃度氨基酸對(duì)仔豬原代肝細(xì)胞尿素循環(huán)的影響

張夢(mèng)媛，莊 魯，萬(wàn)小娟，束 剛，王麗娜，朱曉彤，高 萍，王松波，江青艷

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510642)

不同濃度氨基酸對(duì)仔豬原代肝細(xì)胞尿素循環(huán)的影響

張夢(mèng)媛?，莊 魯?，萬(wàn)小娟，束 剛，王麗娜，朱曉彤，高 萍，王松波，江青艷

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510642)

【目的】研究不同濃度的氨基酸對(duì)仔豬原代肝細(xì)胞尿素循環(huán)的影響及其機(jī)理。【方法】5日齡仔豬門靜脈灌流后從中分離純化出肝細(xì)胞并進(jìn)行培養(yǎng)，在培養(yǎng)基中添加不同濃度的氨基酸(分別為豬血液中氨基酸生理濃度的1、2和4倍)，24 h后收集上清和細(xì)胞。用比色法檢測(cè)上清中尿素、底物氨和細(xì)胞中氨的濃度以及谷氨酰胺酶(Glutaminase, GLS)和谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase, GS)的活性，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)細(xì)胞中氨甲酰磷酸合成酶1(Carbamyl phosphate synthetase 1, CPS1)、精氨基琥珀酸合成酶(Argininosuccinate synthetase, ASS)、精氨琥珀酸裂解酶(Argininosuccinate lyase, ASL)、鳥氨酸氨甲酰轉(zhuǎn)移酶(Omithine transcarbamylase, OTC)和精氨酸酶(Arginase, ARG)等尿素循環(huán)相關(guān)酶基因mRNA的表達(dá)。【結(jié)果】4倍氨基酸組顯著提高了仔豬原代肝細(xì)胞培養(yǎng)上清中氨和尿素的濃度，增強(qiáng)了細(xì)胞中GLS的活性。熒光定量PCR結(jié)果表明，4倍氨基酸組顯著提高了細(xì)胞中CPS1、ASS和ASL等基因mRNA的表達(dá)。1.0和2.0 mmol·L–1的NH4Cl顯著促進(jìn)細(xì)胞尿素的合成。【結(jié)論】在仔豬原代肝細(xì)胞中，高濃度氨基酸可以通過(guò)提高GLS的活性等途徑加速氨的積累，促進(jìn)CPS1、ASS、ASL等尿素循環(huán)相關(guān)酶基因mRNA的表達(dá)，從而促進(jìn)尿素的生成。

仔豬；原代肝細(xì)胞；氨基酸；尿素循環(huán)；氨；基因表達(dá)；酶活性

尿素循環(huán)本質(zhì)上是一個(gè)將神經(jīng)毒素氨轉(zhuǎn)化為水溶性尿素的過(guò)程，是精氨酸、鳥氨酸和瓜氨酸的內(nèi)源性生產(chǎn)的唯一來(lái)源，也是清除蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)造成的廢氮的主要機(jī)制[1]，從而避免高氨血癥的發(fā)生。……