2017年第1季度7種豬傳染病實驗室監測數據分析

2017年第1季度7種豬傳染病實驗室監測數據分析

圖1 樣品分布

2017年1～3月份，通過全國20個省市68個規模豬場的181份病料(肺臟、脾臟和淋巴結等組織)樣品和99份(糞便或腸道組織)樣品，采用PCR和RT-PCR方法對7種病毒類疾病病原如豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬瘟病毒(CSFV)、豬偽狂犬病毒(PRV)、豬圓環病毒2型(PCV2)、豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、傳染性胃腸炎病毒(TGEV)和豬輪狀病毒(PoRV)等進行檢測。

通過對檢測數據進行整理和統計分析得知，CSFV陽性檢出率(1/159)0.63%，PRRSV陽性檢出率(44/170)25.88%，PCV2陽性檢出率(36/136)26.47%，PRV陽性檢出率(8/147)5.44%，PEDV陽性檢出率(48/99)48.48%，TGEV陽性檢出率(0/93)0.00%，PoRV陽性檢出率(3/88)3.41%。其中PRRSV、PCV2、PRV、PEDV、PoRV等5種病原檢出率高，仍是危害規模豬場的主要病原。CSFV、TGEV檢出率低，說明豬場控制得較好。2017年我國規模豬場要把PRRSV、PCV2、PRV、PEDV及PoRV等5種常見病毒類疾病病原作為防控重點，但混合感染和新毒株出現是目前疫病防控的難點，建議豬場加強疫病監測，優化防疫方案，避免防疫誤區。

1 材料與方法

1.1 樣品來源及分布

樣品來源于全國20個省市，樣品包括肺臟、脾臟和淋巴結等組織以及腸道內容物和糞便，通過調查了解豬場免疫背景和臨床發病情況以及剖檢典型發病豬取組織樣品，-20℃冷凍送檢。

1.2 主要試劑和儀器

PCR和RT-PCR擴增試劑盒、飽和酚、TaqDNA聚合酶、dNTPs、EB、DEP水、TRIZOL(總RNA抽提試劑，主要成分苯酚等)、DL2000 Marker、TaKaRaRNA PCRKit(AMV) Ver.3.0均購自寶生物工程(大連)有限公司。生物安全柜、分析天平、高速離心機、迷你掌上離心機、渦旋振蕩器、PCR擴增儀、電泳儀、電泳槽、紫外凝膠成像儀、冰箱、微波爐、水浴鍋、高壓蒸汽滅菌鍋等。

1.3 引物設計與合成

根據GenBank登陸的PRRSV、CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PoRV的基因序列，用Oligo6.0軟件設計引物，由寶生物工程(大連)有限公司合成。引物序列見表1。

1.4 樣品處理及核酸提取

按檢測需求分別取肺臟、脾臟、淋巴結樣品混合，對腸內容物和糞便混合用研磨器充分研磨，利用MEM營養液進行10倍稀釋，然后利用DNA和RNA提取試劑盒進行核酸抽提。

1.5 病毒核酸檢測

1.5.1 PRRSV、CSFV、PEDV、TGEV、PoRV的擴增 分別用BIOZOL總RNA提取試劑盒(博日公司)從病毒培養液提取總RNA為模板，采用TaKaRa One Step RNA PCR Kit(AMV)試劑盒進行RT-PCR擴增，反應條件RT：50℃ 30min，94℃ 2min；PCR：(94℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 1min)×35個循環，72℃延伸7min，PCR產物經1.2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

1.5.2 PRV、PCV2的擴增 分別用天根生物科技有限公司DNA提取試劑盒，從病毒培養液提取DNA為模板，采用TaKaRa One Step DNA PCR Kit試劑盒進行PCR擴增，反應條件94℃ 2min；(94℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 1min)×35個循環，72℃延伸10min，PCR產物經1.2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

表1 用于PCR和RT-PCR反應的引物

2 結果與分析

圖2 2017年1～3月各常見病毒檢出率統計

圖3 2017年1～3月PRRSV與其他病毒混合感染變化

2.1 PCR或RT-PCR擴增結果

2.1.1 2017年第1季度(1月份、2月份、3月份)對20個省68個規模豬場送檢181份肺臟、脾臟和淋巴結等組織樣品與99份腸道內容物、糞便等組織樣品，分別進行了PRRSV、CSFV、PRV、PCV2、PEDV、TGEV、PoRV等7種病原的檢測。結果顯示，CSFV(1/159)陽性檢出率0.63%，PRRSV(44/170)陽性檢出率25.88%，PCV2(36/136)陽性檢出率26.47%，PRV(8/147)陽性檢出率5.44%，PEDV(48/99)陽性檢出率48.48%，TGEV(0/93)陽性檢出率0.00%，PoRV(3/88)陽性檢出率3.41%。7種常見感染豬的病原中PEDV、PCV2、PRRSV、PRV等4種病原檢出率明顯高于其他3種病原，其中TGEV檢出率最低(如圖2)。2.1.2 對44份檢測到PRRSV陽性樣品統計PRRSV單獨感染和PRRSV與PCV2、PRV、PEDV等病原混合感染情況。PRRSV與PCV2的混合感染檢出率40.91%，PRRSV單一檢出率為59.09%。未檢出與除PCV2其他病原的混合感染情況(如圖3)。

2.1.3 對36份PCV2抗原陽性樣品統計PCV2與PRRSV、CSFV、PRV、PEDV等病原混合感染情況，PCV2單獨感染和PCV2與PRRSV、PRV、PEDV等混合感染情況。其中PCV2單一檢出率占50.00%，PCV2與PRRSV混合感染檢出率為50.00%(如圖4)。

圖4 2017年1～3月PCV2與其他病毒混合感染變化

圖5 1季度CSFV、PRRSV、PRV、PCV2四種病毒檢出率動態變化

圖6 PEDV、TGEV、PoRV三種病毒檢出率動態變化

圖7 2017年1～3月與2016年1～3月病原陽性檢出率對比

2.1.4 2017年送檢樣品中CSFV在第1、2、3月份檢出率分別為0.00%、0.00%、1.64%，檢出率均較低。PRRSV在第1、2、3月份檢出率分別為58.00%、14.81%、10.61%，檢出率較高，1、2、3月份呈明顯下降趨勢。PRV在第1、2、3月份的檢出率分別為4.08%、4.55%、7.41%。PCV2在第1、2、3月份檢出率分別為37.84%、15.38%、26.67%，檢出率最高為1月份，其次為3月份。檢出率的動態變化如圖5。

2.1.5 2017年1季度送檢腸道內容物和糞便中PEDV在第1、2、3月份的檢出率分別為22.86%、87.10%、39.39%，檢出率均較高，尤其2月份檢出率明顯高于1、3月份。TGEV在第1、2、3月份的檢出率均為0.00%。PoRV在第1、2、3月份的檢出率分別為6.25%、0.00%、3.57%，顯著低于PEDV(如圖6)。

2.1.6 比較2016年1～3月份與2017年1～3月份7種病原檢出率的變化顯示，2016年1～3月份CSFV檢出率0.87%，2017年1～3月份0.63%略有下降。PRRSV檢出率由2016年1～3月份的28.57%下降2017年1～3月份的25.88%。PCV2檢出率由2016年1～3月的34.82%下降至26.47%。PRV的檢出率由2016年1～3月份的13.64%下降為5.44%。PEDV檢出率由46.07%上升至48.48%。TGEV檢出率由2016年同期的4.88%下降到0.00%。PoRV檢出率由2016年同期0.00%上升到3.41%(如圖7)。

3 討論

3.1 2017年1～3月份通過對68個規模豬場的181份肺臟、脾臟和淋巴結等組織樣品和99份糞便或腸道組織，采用PCR和RT-PCR方法對常見7種病毒類疾病病原檢測和數據統計分析得知，CSFV陽性檢出率(1/159)0.63%，PRRSV陽性檢出率(44/170)25.88%，PCV2陽性檢出率(36/136)26.47%，PRV陽性檢出率(8/147)5.44%，PEDV陽性檢出率(48/99)48.48%，TGEV陽性檢出率(0/93)0.00%，PoRV陽性檢出率(3/88)3.41%。其中PRRSV、PCV2、PRV、PEDV、PoRV等5種病原檢出率高，仍是危害規模豬場的主要病原。CSFV、TGEV兩種病原檢出率低，說明豬場控制得較好。

3.2 2017年1季度病原檢測數據顯示，雖然藍耳病(PRRS)和圓環病毒2型 (PCV2)病原陽性檢出率相比上年同期有所下降，但與其他幾種疾病病原檢出率相比依然較高。在病原混合感染方面，1季度只檢測到藍耳病(PRRS)和圓環病毒2型(PCV2)的混合感染，兩者相互作用可使豬場保育和生長豬呼吸道疾病加重，生長豬死淘率高。豬場要重視這兩種病毒的危害，科學地使用藍耳病弱毒活疫苗與圓環病毒2型滅活苗聯合免疫。

3.3 2017年1月份對保育豬慢性消瘦和呼吸道病嚴重病例PRRSV、PCV2檢出率高，保育豬均勻度差，死淘率高；2月份對新生仔豬暴發腹瀉病例PEDV檢出率高，造成哺乳仔豬成活率低，損失嚴重。可見冬春季節交替，氣溫下降和晝夜溫差大等環境因素，加上一些豬場由于春節期間管理松懈導致豬體抗病能力下降容易感染PRRSV、PCV2、PEDV等病原。所以1季度加強豬場保溫和強化免疫等措施是預防病毒類傳染病發生的關鍵。■