APE、VEGF在宮頸癌組織中的表達及其與MVD的關系

曾憲瑞

APE、VEGF在宮頸癌組織中的表達及其與MVD的關系

曾憲瑞

目的探討宮頸癌組織中脫嘌呤/脫嘧啶核酸內切酶(APE)、血管內皮生長因子(VEGF)的表達及其與微血管密度(MVD)的關系。方法50份宮頸癌術后未經放化療治療的腫瘤石蠟組織標本設為宮頸癌組, 50份宮頸上皮內瘤變組織蠟塊設為宮頸上皮內瘤變組, 50份子宮肌瘤行子宮切除宮頸正常組織臘塊設為對照組, 采用免疫組織化學方法對三組APE、VEGF、MVD指標進行檢測并對比。結果APE在宮頸癌組織中, 與組織分化、臨床分期有關, 差異具有統計學意義 (P＜0.05)；與病理類型無關, 差異無統計學意義(P＞0.05)。在宮頸癌組織中, APE與VEGF呈正相關性(r=0.796, P＜0.01), APE與MVD呈正相關性(r=0.606, P＜0.01), VEGF與MVD呈正相關性(r=0.651, P＜0.01)。結論APE在誘導VEGF表達中有參與, 并對腫瘤血管生成有促進作用, VEGF、APE均可作為對宮頸癌預后進行監測的指標, 也可用于癌前病變的評估。

脫嘌呤/脫嘧啶核酸內切酶；血管內皮生長因子；宮頸癌組織；微血管密度

APE屬多功能蛋白范疇, 其異常表達、功能的改變同神經系統退行性疾病、腫瘤等病理過程關聯密切。VEGF為最為重要的一個對腫瘤血管生成發揮刺激作用的生長因子［1-3］。本文經免疫組織化學方法對正常組織、宮頸癌組織等處的VEGF、APE表達進行檢測, 分析其與MVD的關系, 為宮頸癌預后的監測提供準確參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年2月本院宮頸癌術后未經放化療治療的腫瘤石蠟組織標本設為宮頸癌組, 其中高分化7份,中分化20份, 低分化23份；依據2000年國際婦產科聯盟制定的相關標準分級, 0期6份, Ⅰ期18份, ≥ Ⅱ期26份。病理類型：腺癌16例, 鱗癌34例。另選取50份宮頸上皮內瘤變組織蠟塊設為宮頸上皮內瘤變組, 50份子宮肌瘤行子宮切除宮頸正常組織臘塊設為對照組。均經常規切片處理,厚度為4 μm, 均經病檢和HE染色確診。

1.2 方法 準備鼠抗人APE單克隆抗體, 以1∶50作為工作濃度；準備Pv-6000試劑盒、鼠抗人CD34單克隆抗體、VEGF單克隆抗體。實驗步驟嚴格根據說明書要求開展。

1.3 觀察指標及評定標準 依據Mark Kelley實驗室標準對APE染色結果進行評估, VEGF在細胞質和(或)細胞膜內有棕褐色、棕色、淺黃色顆粒沉著, 可定義為陽性細胞。分析經監測所得的陽性細胞比例, 并依據具體的著色強度, 對免疫組織化學半定量計分標準進行綜合制定。①陽性細胞計分標準：0分：陽性細胞＜1%；1分：陽性細胞占1%～10%；2分：陽性細胞占11%～50%；3分：陽性細胞占51～80%；4分：陽性細胞＞80%。②著色強度計分標準：1分：著色強度為弱；2分：著色強度中等；3分：著色較強。上述兩分值相加, 獲取最終評估結果, 1分：可按(-)計, 2～3分：可按(+)計；4～5分：可按(++)計；6～7分, 可按(+++)計。低表達組：(-)和(+)；高表達組：(++)和(+++)。被CD34抗體染成孤立的呈黃棕色顯示的內皮細胞簇團或內皮細胞, 與鄰近腫瘤細胞、微血管及其他結締組織只要分開, 即可作為新微血管；結構只要不相連, 可將分支結構看作一個血管。依據Weidne報道法行MVD計數。

1.4 統計學方法 采用S P S S 13.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差表示, 采用t檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。相關性檢驗采用S p e a r m a n相關分析。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 A P E、V E G F、M V D同病理類型的關系 APE在宮頸癌組織中, 與組織分化、臨床分期有關, 差異具有統計學意義(P＜0.05)；與病理類型無關, 差異無統計學意義(P＞0.05)。相較于高、中分化宮頸癌, APE在低分化宮頸癌中有更高表達；相較0期及Ⅰ期, ≥Ⅱ期有更高表達；比較差異均具有統計學意義 (P＜0.05)。VEGF及MVD計數與組織分化、臨床分期無關, 差異均無統計學意義(P＞0.05)；病理類型腺癌VEGF及MVD計數高于鱗癌, 差異均具有統計學意義 (P＜0.05)。見表1。

表1 A P E、V E G F、M V D同病理類型的關系 ［n(%)

表1 A P E、V E G F、M V D同病理類型的關系 ［n(%)

注：與高、中分化比較,aP＜0.05；與0、Ⅰ期比較,bP＜0.05；與鱗癌比較,cP＜0.05

臨床病理特征例數A P E高表達V E G F高表達M V D計數組織分化高73(42.9)4(57.1)33.6±4.1中2017(85.0)13(65.0)41.5±6.7低2323(100.0)a16(69.6)44.5±6.1臨床分期064(66.7)3(50.0)31.9±9.1Ⅰ1813(72.2)11(61.1)42.5±5.7≥Ⅱ2626(100.0)b19(73.1)45.9±6.2病理類型鱗癌3429(85.3)19(55.9)33.5±6.7腺癌1614(87.5) 14(87.5)c46.8±8.3c

2.2 A P E與V E G F在宮頸癌組織中的表達同M V D的關系 在宮頸癌組織中, APE與VEGF呈正相關性(r=0.796, P＜0.01), APE與MVD呈正相關性(r=0.606, P＜0.01), VEGF與MVD呈正相關性(r=0.651, P＜0.01)。

2.3 A P E、V E G F及M V D在不同組織中的表達 經測定, APE陽性產物呈細顆粒狀顯示, 呈棕褐或棕黃色, 以在胞核定位為主, 間質也存在一定表達的情況。宮頸癌組織中, 呈高表達43份, 占86%；呈低表達7份, 占14%。VEGF陽性表達經觀察為棕黃色顆粒, 以在胞質定位為主, 胞膜也存在一定表達的情況；CD34陽性產物于血管內皮細胞質定位。APE和VEGF陽性表達率在對照組、宮頸上皮內瘤變組、宮頸癌組組織中呈依次遞增趨勢。宮頸癌組陽性表達率高于宮頸上皮內瘤變組和對照組, 差異均具有統計學意義 (P＜0.05)；宮頸上皮內瘤變組陽性表達率高于對照組, 差異具有統計學意義 (P＜0.05)。宮頸癌組MVD計數高于宮頸上皮內瘤變組和對照組, 差異均具有統計學意義 (P＜0.05) ；宮頸上皮內瘤變組MVD計數高于對照組, 差異具有統計學意義 (P＜0.05)。見表2。

表2 A P E、V E G F及M V D在不同組織中的表達 ［n(%)

表2 A P E、V E G F及M V D在不同組織中的表達 ［n(%)

注：與對照組比較,aP＜0.05；與宮頸上皮內瘤變組比較,bP＜0.05

組別例數A P E高表達V E G F高表達M V D計數對照組503(6.0)04.9±1.1宮頸上皮內瘤變組5016(32.0)a12(24.0)a19.4±6.2a宮頸癌組5043(86.0)ab33(66.0)ab41.4±2.8ab

3 討論

APE同細胞的損傷修復、增殖均具一定相關性, 在腫瘤病程中所起作用顯著。其在機體內的表達具器官和組織特異性, 因分化程度和功能存在區別, 共包括胞核表達、胞質表達、核質共表達3種形式, 主要功能定位同胞核存在密切關聯［4-6］。有研究示［7,8］, 在前列腺癌、肺癌等諸多腫瘤類型中, APE均可過表達和(或)擴增表達。本次研究中, APE陽性表達率在對照組、宮頸上皮內瘤變組、宮頸癌組組織中呈依次遞增趨勢。宮頸癌中有最高表達, 且分化程度越低, 表達率越高, 表明此指標同病程發展關聯密切, 可作為腫瘤惡性程度鑒別的標志［9-11］。

另外, VEGF可對血管內皮細胞的增殖和分裂加以刺激,促某些基因在內皮細胞的表達改變, 使微血管通透性增加,進而為腫瘤血管的轉移、浸潤提供有利條件［12-15］。通過對MVD值測量, 可對腫瘤血管生成程度評價, 正確反映腫瘤的侵襲性及惡性程度, 本次研究顯示, VEGF在腺癌中有較高表達, MVD也高于鱗癌, MVD計數與VEGF的表達呈正相關, 表明VEGF經對腫瘤血管生成途徑誘導, 在宮頸癌病程中參與。

綜上所述, APE在誘導VEGF表達中有參與, 并對腫瘤血管生成有促進作用, VEGF、APE均可作為對宮頸癌預后進行監測的指標, 也可用于癌前病變評估。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.14.015

2017-05-19］

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