TRPV5 TRPV6對結腸癌SW480細胞生物學行為的影響*

張慧 劉模榮 董輝 徐靖宇 謝睿 文國榮 劉蓮花

·基礎研究·

TRPV5 TRPV6對結腸癌SW480細胞生物學行為的影響*

張慧①劉模榮①董輝②徐靖宇①謝睿①文國榮①劉蓮花①

目的：觀察TRPV5和TRPV6蛋白表達水平對結腸癌SW480細胞內Ca2+水平及細胞增殖、凋亡、遷移等生物學行為的影響。方法：給予TRPV5、TRPV6通道激動劑1-25（OH）2D3及抑制劑CuCl2作用結腸癌SW480細胞后，采用免疫組織化學法、Western blot及實時熒光定量PCR技術檢測TRPV5、TRPV6蛋白及TRPV5、TRPV6 mRNA表達的變化。使用高速離子成像系統觀察結腸癌SW480細胞內Ca2+水平的變化；通過MTT法、TUNEL法及劃痕修復法觀察結腸癌SW480細胞增殖、凋亡及遷移的變化。結果：1-25（OH）2D3明顯上調結腸癌SW480細胞TRPV5、TRPV6 mRNA及蛋白表達水平，使結腸癌SW480細胞內Ca2+水平增加，促進結腸癌SW480細胞增殖、遷移及抑制其凋亡（P＜0.05）。CuCl2明顯下調結腸癌SW480細胞中TRPV5、TRPV6蛋白及mRNA表達，使結腸癌SW480細胞內Ca2+水平降低（P＜0.05），抑制結腸癌SW480細胞的增殖、遷移及促進細胞的凋亡（P＜0.05）。結論：結腸癌SW480細胞中TRPV5和TRPV6蛋白表達水平的變化，能通過調控細胞內Ca2+水平影響細胞的增殖、遷移和凋亡等生物學行為。

結腸癌 鈣離子通道 TRPV5 TRPV6 Ca2+

結腸癌是消化系統常見的惡性腫瘤之一，其發病機制目前尚不明確。有研究發現在肝癌、胃癌、乳腺癌等多種腫瘤的發生發展過程中均伴隨著細胞內Ca2+水平的改變［1-2］，TRPV5和TRPV6是瞬時性受體電位通道（TRP）超家族中的成員，是一種與Ca2+轉運有關的存在于細胞膜上的特定蛋白質，其功能受1-25（OH）2D3、甲狀旁腺激素（PTH）、飲食鈣、雌激素和藥物等影響的調節［3］，與腫瘤細胞增殖、凋亡、分化及侵襲密切相關［4］。通過調控細胞內的鈣信號及其相關的信號通路能夠影響腫瘤的增殖、遷移、凋亡等多種生物學行為。本研究擬應用TRPV5和TRPV6通道激動劑1-25（OH）2D3和抑制劑CuCl2作用于結腸癌SW480細胞，觀察藥物作用前后結腸癌SW480細胞TRPV5和TRPV6蛋白表達和細胞內Ca2+水平變化，以及對細胞的增殖、遷移及凋亡的影響。希望通過對鈣信號及其調控的通道的研究，為結腸癌的治療尋找新的機制及治療靶點。

1 材料與方法

1.1 材料

人結腸癌細胞株SW480細胞購自中國科學院上海生物化學研究所，并常規消化傳代保存。TRPV5、TRPV6多克隆抗體購自美國Abcam公司，GTVisionT?MIII抗鼠/兔通用型免疫組織化學檢測試劑盒購自上海基因科技有限公司，引物合成于上海生工公司。Fura-2鈣熒光染料購自美國Invitrogen公司。1-25（OH）2D3購自美國SIGMA公司，CuCl2購自上海國產分析純試劑。改良型RPMT 1640培養基和Hyclone胎牛血清購自美國Hyclone公司。凱基TUNEL細胞凋亡原位檢測試劑盒和MTT試劑盒購自南京凱基生物公司，逆轉錄試劑盒和RT-PCR擴增試劑盒購自大連TakaRa公司。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養 將結腸癌SW480細胞培養于含10%胎牛血清的改良型RPMT 1640培養基中，培養條件為5%CO2、飽和濕度、恒溫37℃，靜置培養。對細胞常規進行換液、消化、傳代。

1.2.2 觀察不同藥物對SW480細胞形態變化的影響 將對數期的結腸癌SW480細胞常規消化、傳代、計數，分別接種在3個培養皿中，培養24 h后，其中兩組分別加10-8mol/L 1-25（OH）2D3和100 μmol/L Cu?Cl2，另一組不加藥物處理作為對照組，繼續培養48 h后磷酸鹽緩沖液（PBS）漂洗，傾去上層懸浮細胞后將培養皿置于倒置顯微鏡下，觀察不同藥物對SW480細胞的形態和數量變化的影響。

1.2.3 免疫組織化學法檢測結腸癌SW480細胞中TRPV5、TRPV6的表達 將結腸癌SW480細胞常規消化傳代后接種、分組、加藥（分別加入10-8mol/L 1-25（OH）2D3和100 μmol/L CuCl2），培養箱中培養48 h，然后固定爬片、封閉，每張玻片滴加稀釋好的一抗（TRPV5：PBS=1:3 000/TRPV6：PBS=1:3 000）；以PBS代替一抗，其他步驟不變作為陰性對照，4℃孵育過夜，滴加即用型二抗、孵育、浸洗、滴加顯色劑DAB液約50 μL/片（1:50），并在光鏡下控制顯色，顯色完全后及時終止顯色；蘇木素復染5min；自來水沖洗10min，1%鹽酸酒精分化3 s；自來水水洗返藍；待玻片自然干后用中性樹膠封片。

1.2.4 RT-PCR實驗 將結腸癌SW480細胞常規消化傳代后接種、分組、加藥（同免疫組織化學法）、培養結束后收集細胞，采用Trizol提取法抽提細胞總RNA，沉淀用100 μL二乙基焦碳酸酯處理水溶解，紫外分光光度計測定總RNA濃度（OD260/OD280比值為1.8～2.0）后，按照逆轉錄試劑盒將mRNA逆轉錄為cDNA（200 ng/μL）備用。使用Bio-Rad iQ5。TRPV5的上游引物為：5'-GACAAGGAGGATGACCAGGA-3'；下游引物為：5'-AGGGAGGSSGTTGGAAGAGC-3'。TRPV6的上游引物為：5'-CCTTTGCTGCCTGTGTGA AC-3'；下游引物為：5'-GCTGGAGGATGAGGATGTG T-3'。擴增條件：預變性95℃ 30 s、95℃ 5 s、60℃ 30 s進行40個循環。采用相對定量2-ΔΔCt法計算藥物處理SW480細胞前后TRPV5及TRPV6基因表達的倍數關系。

1.2.5 Western blot檢測 將結腸癌SW480細胞常規消化傳代后接種、分組、加藥（同免疫組織化學法），培養結束后收集細胞采用RIPA提取細胞蛋白，采用二喹啉甲酸（BCA）法測定蛋白濃度。取蛋白液加入等量的上樣緩沖液后在100℃煮沸5 min，配置10%的分離膠10 mL和5%積層膠，上樣電泳結束后轉膜2 h、采用5%脫脂奶粉封閉、TBST溶液洗膜后加入一抗4℃孵育過夜（1:1 000稀釋，TRPV5/TRPV6的分子量均為83 kDa）、洗膜后再加入二抗孵育2 h，采用化學熒光法（ECL）顯色曝光、凝膠成像系統分析條帶灰度值后分析統計。

1.2.6 結腸癌SW480細胞內Ca2+測定 將結腸癌SW480細胞常規消化、計數、接種，培養箱中培養，將實驗分為正常對照組（PBS）、刺激通道組（10-8mol/L 1-25（OH）2D3）、阻斷通道組（100 μmol/L CuCl2）。用PBS液漂洗細胞3次，每次2 min，然后加入鈣的發光劑Fura-2（Fura-2：PBS=1:1 000），室溫避光孵育負載60 min，孵育結束再用PBS液漂洗3次，以充分洗去胞外留的Fura-2，然后再用PBS浸泡30 min使Fura-2去酯化，待上機測定；將準備好的細胞爬片和灌流槽放置于倒置熒光顯微鏡上，實驗開始時先用PBS液灌流結腸癌SW480細胞3 min，待條件穩定細胞適應后，開始進行檢測，先找到細胞層面，用340 nm波長的激光激發Ca2+熒光探針Fura-2發射熒光，用CCD拍攝熒光的動態變化并通過鈣熒光成像系統進行分析。

1.2.7 MTT比色法 對SW480細胞進行常規消化、計數、種板，按2×104個細胞/孔接種于96孔板中，每孔加入細胞懸液200 μL；邊緣孔用無菌PBS填充；5%CO2、37℃孵育靜置培養；24 h后待細胞穩定貼壁，同時設置對照組（加細胞及培養液）、空白孔（只加培養基）、溶劑對照組（加入乙醇使其終濃度為0.1%）及藥物實驗組，分別加入1-25（OH）2D3用0.1%乙醇溶解的相應培養液，使其終濃度分別為10-9、10-8、10-7、10-6mol/L；CuCl2的濃度為1.0、10、100、200 μmol/L，每組設5個平行孔，經孵育后在酶聯免疫檢測儀上測定波長OD490nm對應OD值，有效實驗重復3次。結果分析統計：細胞生長抑制率（%）=（對照組吸光值-實驗組吸光值）/對照組吸光值×100%；細胞生長增殖率（%）=（實驗組吸光值-對照組吸光值）/對照組吸光值×100%。

1.2.8 細胞遷移實驗 在12孔板背面用消毒的直尺和Marker筆間隔0.5 cm劃線，一般劃4～5條，用于標記；制備單層細胞，待細胞長到80%～90%劃痕：用200 μL滅菌槍頭在貼壁的單層細胞上呈“一”字劃痕；于劃痕后0、24、48 h，在倒置顯微鏡下觀察劃痕寬度并照相，再次拍照前棄去培養基，用PBS清洗3次后在倒置顯微鏡下尋找到原位置拍照對比。細胞遷移能力計算的公式：遷移指數（%）=（初始劃痕寬度-愈合后劃痕寬度）/初始劃痕寬度×100%。

1.2.9 TUNEL法檢測細胞凋亡 將結腸癌SW480組織進行常規消化、計數、爬片、分組、加藥（同免疫組織化學法），培養48 h后，固定、0.1%Triton X-100通透、滴加封閉液封閉，然后浸洗；制作陽性片（按凱基TUNEL細胞凋亡原位檢測試劑盒說明書），TUNEL染色中凋亡率的統計分析，陽性結果判定：以細胞核染成棕色或棕褐色者為陽性細胞，在高倍鏡下任意選5個視野，每個視野下計數200個細胞（細胞總數），并按公式計算出結腸癌SW480細胞凋亡指數（apopto?sis index，AI）=陽性細胞數/細胞總數×100%。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 免疫組織化學法檢測1-25（OH）2D3和CuCl2作用前后結腸癌SW480細胞TRPV5和TRPV6蛋白的表達變化

免疫組織化學法測定結果顯示TRPV5、TRPV6的表達定位主要在細胞膜及胞漿中（棕黃色區域），激動劑1-25（OH）2D3組TRPV5、TRPV6的陽性表達明顯增強，而抑制劑CuCl2組TRPV5、TRPV6陽性表達明顯減弱，組間比較差異具有統計學意義（P＜0.05，圖1）。

圖1 免疫組織化學法測定各組結腸癌SW480細胞TRPV5和TRPV6蛋白的表達Figure 1 Protein expression levels of TRPV5 and TRPV6 in SW480 colon cancer cells by immunocytochemistry

2.2 Western blot檢測1-25（OH）2D3和CuCl2作用前后結腸癌SW480細胞TRPV5和TRPV6蛋白的表達變化

Western blot檢測結果顯示TRPV5、TRPV6均為單一目的條帶（分子量為83 kDa），1-25（OH）2D3刺激結腸癌SW480后TRPV5、TRPV6蛋白的表達明顯上調，相反CuCl2作用后TRPV5、TRPV6的蛋白表達明顯下調，組間比較差異具有統計學意義（P＜0.05，圖2）。

圖2 Western blot測定各組結腸癌SW480細胞TRPV5和TRPV6蛋白的表達Figure 2 Protein expression levels of TRPV5 and TRPV6 in SW480 colon cancer cells by Western blot analysis

2.3 1-25（OH）2D3和CuCl2作用前后結腸癌SW480細胞TRPV5和TRPV6 mRNA水平的表達變化

RT-PCR的方法檢測顯示1-25（OH）2D3刺激結腸癌SW480后TRPV5、TRPV6的mRNA表達明顯上調，相反CuCl2作用后TRPV5、TRPV6的mRNA表達水平卻明顯下調，組間比較差異具有統計學意義（P＜0.05，表1）。

2.4 1-25（OH）2D3和CuCl2作用前后結腸癌SW480細胞內Ca2+濃度的變化

在Ca2+熒光探針（Fura-2）的標記下，結腸癌SW480細胞內Ca2+顯示為綠色熒光，隨著細胞內Ca2+濃度的上升，胞內結合態染料濃度升高，其在340 nm左右的吸收峰增強。用1-25（OH）2D3（10-8mol/L）作用結腸癌SW480細胞后，細胞內Ca2+熒光強度較對照組表達增加。用 CuCl2（100 μmol/L）作用結腸癌SW480細胞后，細胞內Ca2+熒光強度較對照組表達降低，兩者比較差異具有統計學意義（P＜0.05，圖3）。腸癌SW480細胞形態變化的影響。未經藥物作用的SW480細胞融合成單層，細胞為梭形、三角形或者多邊形，并可見處于分裂相的細胞（圖4A）。經1-25（OH）2D3作用后，SW480細胞融合致密成單層，細胞間連接緊密，邊界清楚，胞漿豐富，并可見多個處于分裂相的細胞（圖4B）。經CuCl2作用后，細胞逐漸皺縮變長、細胞間隙增大、分裂相細胞數目減少，有部分細胞失去原貼壁形態（圖4C）。

表1 TRPV5、TRPV6mRNA在結腸癌SW480細胞中的表達 （x±s）Table 1 Expression levels of TRPV5 and TRPV6 mRNA in SW480 colon cancer cell in terms of mean±SD

圖3 1-25(OH)2D3、CuCl2對結腸癌SW480細胞內Ca2+水平的影響（F340 nm×400）Figure 3 Intracellular Ca2+in SW480 colon cancer cells treated with 1-25(OH)2D3and CuCl2(F340nm×400)

2.5 1-25（OH）2D3和CuCl2對結腸癌SW480細胞生長的影響

2.5.1 1-25（OH）2D3和CuCl2作用前后細胞形態的變化 在倒置顯微鏡下觀察不同藥物作用48 h后對結

圖4 1-25(OH)2D3、CuCl2作用48 h后結腸癌SW480細胞形態（×200）Figure 4 Effect of 48 h treatment of 1-25(OH)2D3and CuCl2on SW480 colon cancer cell morphology

2.5.2 1-25（OH）2D3和CuCl2對結腸癌SW480細胞增殖的影響 MTT結果證實不同濃度的1-25（OH）2D3和CuCl2分別刺激結腸癌SW480細胞24、48和72 h后，1-25（OH）2D3對SW480細胞有促增殖作用，而Cu?Cl2則對SW480細胞的增殖具有抑制作用，且呈時間劑量依賴性，10-8mol/L的1-25（OH）2D3和100 μmol/L CuCl2在刺激SW480細胞72 h后對增殖的影響最明顯，組間比較差異具有統計學意義（P＜0.05，表2，3）。

表2 1-25(OH)2D3對結腸癌SW480細胞生長增殖的影響（OD490/增殖率）（n≥3，x±s）Table 2 Effect of 1-25(OH)2D3on the proliferation of SW480 colon cancer cells(OD490/proliferation rate,n＞3)in terms of mean±SD

表3 CuCl2對結腸癌SW480細胞生長增殖的影響（OD490/抑制率）（n≥3±s）Table 3 Effect of CuCl2on the proliferation of SW480 colon cancer cells(OD490/inhibiting rate,n＞3)in terms of mean±SD

表3 CuCl2對結腸癌SW480細胞生長增殖的影響（OD490/抑制率）（n≥3±s）Table 3 Effect of CuCl2on the proliferation of SW480 colon cancer cells(OD490/inhibiting rate,n＞3)in terms of mean±SD

*:Versus control group,P＜0.05

Group(mol/L)Control 1 10 100 200 24 h 48 h 72 h OD4900.455±0.019 0.429±0.021*0.412±0.002*0.358±0.018*0.325±0.042*Inhibiting rate(%)0 5.79 9.45 21.32 28.57 OD4900.627±0.021 0.573±0.017*0.548±0.007*0.372±0.024*0.349±0.006*Inhibiting rate(%)0 8.47 12.41 40.54 44.22 OD4900.731±0.016 0.684±0.022*0.624±0.021*0.426±0.021*0.398±0.002*Inhibiting rate(%)0 10.34 14.56 41.67 45.51

2.5.3 1-25（OH）2D3和CuCl2對結腸癌SW480細胞凋亡的影響 經TUNEL法檢測凋亡細胞，在光學顯微鏡下觀察，凋亡細胞體積縮小，核固縮，邊界清楚，細胞質淡染，染色質呈特異的棕黃色著染。正常培養組可見少量凋亡細胞；1-25（OH）2D3作用組可見到極少量的凋亡細胞，CuCl2作用組可見到大量的凋亡細胞，組間比較差異具有統計學意義（P＜0.05，表4）。

表4 1-25(OH)2D3、CuCl2作用結腸癌SW480細胞48 h后細胞凋亡率的比較 （±s）Table 4 Comparison of SW480 colon cancer cell apoptosis induced by 1-25(OH)2D3and CuCl2for 48 h in terms of mean±SD

表4 1-25(OH)2D3、CuCl2作用結腸癌SW480細胞48 h后細胞凋亡率的比較 （±s）Table 4 Comparison of SW480 colon cancer cell apoptosis induced by 1-25(OH)2D3and CuCl2for 48 h in terms of mean±SD

*:Versus control group,P＜0.05;#:versus 1-25(OH)2D3group,P＜0.05

Group Control 1-25(OH)2D3CuCl2n10 10 10 Positive cells 6.333±1.528 2.667±0.577*50.667±2.512*#AI(%)3.16 1.33 25.33

2.6 1-25（OH）2D3和CuCl2對結腸癌SW480細胞遷移能力的影響

劃痕實驗結果顯示，初始時所有組的劃痕寬度基本上相等。經1-25（OH）2D3和CuCl2分別作用24、48 h后，1-25（OH）2D3對結腸癌SW480細胞遷移有明顯的促進作用，而CuCl2對結腸癌SW480細胞遷移有抑制作用，組間比較差異具有統計學意義（P＜0.05，圖5，6）。

圖5 結腸癌SW480細胞劃痕實驗Figure 5 Migration of SW480 colon cancer cell during scratch test

圖6 結腸癌SW480細胞劃痕實驗（標尺：500 μm）Figure 6 Migration of SW480 colon cancer cell scratch test(bar:500 μm)

3 討論

TRPV5和TRPV6是TRP超家族中目前唯一已知的兩種Ca2+高選擇性通道，其主要負責Ca2+由細胞外向細胞內的主動跨膜運輸，在機體內參與多項生理活動的調節，包括肌肉收縮、遞質釋放、細胞增殖、遷移及細胞凋亡等［5］。TRPV6是在腸上皮中表達的鈣通道蛋白，主要位于結腸吸收表面的頂膜中，是一種可以調節腸鈣吸收的速度和程度的蛋白質，其功能受1-25（OH）2D3通過VDR信號通路的調節。TRPV5主要表達于腎小管上皮細胞，在結腸組織中僅有少量表達。這可能與TRPV5和TRPV6蛋白結構的不同有關［6］。有研究發現，TRPV6在前列腺癌中的表達水平隨惡性程度及轉移程度的加深而增加，敲除TRPV6可抑制前列腺癌細胞增殖，認為可能與其能促進鈣內流，激活NFAT有關［7］。在結腸癌發生發展過程中，TRPV6在正常結腸組織、潰瘍性結腸炎、結腸腺瘤及結腸腺癌中表達逐漸增加［8-9］。TRPV6在Ⅰ期結腸癌中的表達為66%，在Ⅱ期結腸癌中的表達為17%，在Ⅲ、Ⅳ期結腸癌中卻幾乎無表達，認為TRPV6表達增高主要發生在結腸癌早期，而這種伴隨結腸黏膜增生的TRPV6異常高表達可通過高鈣飲食來減弱甚至逆轉［6］。SOR-C13（一種TRPV6的抑制劑）被臨床用來治療胰腺癌并取得一定療效［10］。上述研究表明TRPV6表達與腫瘤細胞的增殖和凋亡密切相關，但具體機制仍有待進一步研究。

本研究發現TRPV5、TRPV6在結腸癌SW480細胞中表達于胞膜及胞漿。1-25（OH）2D3（10-8mol/L）能上調TRPV5和TRPV6 mRNA及蛋白的表達，而與之相反，CuCl2（100 μmol/L）則下調TRPV5和TRPV6 mRNA及蛋白表達，組間相比較差異具有統計學意義（P＜0.05）。經高速離子成像系統測定發現，1-25（OH）2D3通過增加結腸癌SW480細胞TRPV5和TRPV6通道的表達，促使細胞外Ca2+經鈣通道進入細胞內，增加了細胞內Ca2+水平；而CuCl2作用則與之相反。可能與1-25（OH）2D3和CuCl2影響了TRPV5、TRPV6的活性有關。

隨著TRPV5和TRPV6表達的變化及細胞內Ca2+水平的改變，結腸癌SW480細胞增殖、遷移、凋亡等生物學行為也受到相應的影響。本研究通過MTT、劃痕法、TUNEL法研究發現，1-25（OH）2D3能促進結腸癌SW480細胞增殖和遷移，抑制結腸癌SW480細胞的凋亡（P＜0.05）；而CuCl2則抑制結腸癌SW480細胞增殖和遷移（P＜0.05），促進結腸癌SW480細胞的凋亡（P＜0.05）。1-25（OH）2D3和CuCl2分別在濃度10-8mol/L和100 μmol/L作用48 h較明顯，表現出一定的時間劑量依賴性。提示TRPV5、TRPV6可通過控制Ca2+的內流，來調節結腸癌SW480細胞的增殖、遷移、凋亡等生物學行為［11］，其機制可能與下調p-AKT/GSK3信號通路有關［12］。

本實驗僅通過改變TRPV5、TRPV6功能狀態觀察其對結腸癌SW480細胞生物學行為的影響，但TRPV5、TRPV6對結腸癌SW480細胞增殖、遷移、凋亡的確切機制尚不明確，其可能通過調控Ca2+影響細胞周期，或者與相關調節基因表達有關。TRPV5、TRPV6之間有無競爭性或協同性，以及在正常組織細胞與腫瘤細胞、離體細胞與機體組織細胞之間作用有無差異，尚需進一步研究。

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（2017-02-03收稿）

（2017-06-24修回）

Effect of TRPV5 and TRPV6 channels on the biological behaviors of SW480 colon cancer cell line

Hui ZHANG1,Morong LIU1,Hui DONG2,Jingyu XU1,Rui XIE1,Guorong WEN1,Lianhua LIU1

Morong LIU;E-mail:zylmr@163.com
1Department of Gastroenterology,Affiliated Hospital,Zunyi Medical College,Zunyi 563003,China;2Division of Gastroenterology,Department of Medicine,University of California,San Diego,School of Medicine,San Diego 92103,USA
This work was supported by Guizhou International Science and Technology Cooperation Program(No.G(2014)7014)

Objective:To investigate the role of TRPV5 and TRPV6 in intracellular calcium regulation and biological behaviors of SW480 colon cancer cells.Methods:qRT-PCR,Western blot,and immunocytochemistry were applied to determine the mRNA and protein expression levels of TRPV5 and TRPV6 in SW480 colon cancer cell line upon treatment with TRPV5 and TRPV6 agonist,1-25(OH)2D3,and inhibitor,CuCl2.The change of intracellular Ca2+level was examined with a confocal laser scanning microscope.Scratch test,MTT,and TUNEL assays were used to analyze the cell migration,proliferation,and apoptosis,respectively.Results:As an agonist of TRPV5 and TRPV6,1-25(OH)2D3significantly up-regulated the mRNA and protein expression levels of TRPV5 and TRPV6 in SW480 cell lines.On the other hand,CuCl2,being an inhibitor of TRPV5 and TRPV6,effectively down-regulated the TRPV5 and TRPV6 mRNA and protein expression levels(P＜0.05).The intracellular calcium concentration in SW480 cell line significantly increased upon treatment with 1-25(OH)2D3,and significantly decreased with CuCl2treatment(P＜0.05).1-25(OH)2D3promoted cell proliferation and migration,and inhibited apoptosis of SW480 cell in a time-and dose-dependent manner(P＜0.05).However,CuCl2significantly repressed cell proliferation and migration and induced apoptosis(P＜0.05).Conclusion:TRPV5 and TRPV6 can affect the biological behaviors of colon cancer SW480 cells by regulating intracellular Ca2+level.

colon cancer,calcium channel,TRPV5,TRPV6,Ca2+

10.3969/j.issn.1000-8179.2017.12.114

①遵義醫學院附屬醫院消化內科（貴州省遵義市563003）；②美國加利福尼亞大學醫學院胃腸科

*本文課題受貴州省國際科技合作計劃項目［編號：黔科合G字（2014）7014號］資助

劉模榮 zylmr@163.com

張慧 專業方向為早期結腸癌臨床及基礎研究。

E-mail：zhanghui1892@foxmail.com