高效液相色譜法測定不同產地珠子參中人參皂苷Re的含量

許銀鳳　蔡葦

摘要：目的建立高效液相色譜法測定珠子參中人參皂苷Re含量的方法。方法

選用XTerra MS C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以0.05%磷酸-乙腈（55.45）為流動相，流速1.0ml/min，柱溫30℃，檢測波長為203nm。結果 在0.992-11.904μg范圍內，人參皂苷Re呈良好的線性關系，r=0.9999。得平均回收率為96.41%，RSD=1.59%（n=6）。不同產地珠子參中人參皂苷Re的含量不同，其中麗江產的含量最高，德欽產的次之。結論本法準確、分離度高，可用于珠子參中人參皂苷Re的含量測定。

關鍵詞：珠子參；人參皂苷Re；高效液相色譜法

中圖分類號：R284 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2017）03-0075-02

珠子參，別名珠兒參、野三七、鈕子七、疙瘩七等。為五加科植物人參屬珠子參Panax japonicus C.A.May.vat.major（Burk.）C.Y.Wu et K.M.Feng或羽葉三七PanaxjaponicusC.A.May.vat.bipinnatifidus（Burk.）C.Y.Wu et K.M.Feng的干燥根莖。味苦、甘，微寒。歸肝、肺、胃經。具有補肺，養陰，活絡，止血之功。用于氣陰兩虛，煩熱口渴，虛勞咳嗽，跌打損傷，關節疼痛，咳血，吐血，外傷出血。在云南民間代三七使用。主產云南、四川、陜西等地。具有較高的藥用價值。傳統習用珠子參根莖中的膨大節，而對其細小的節間少用或限用，而對于地上部分更是棄之不用，而同科同屬的人參、三七等藥材早已充分利用地上部分并建立相應質量標準。為了充分利用植物資源，本文選取珠子參地下部分和地上部分中均含有人參皂苷Re這一成分，對不同產地的珠子參地上部分及地下部分進行定量分析比較。目前，用高效液相色譜法測定珠子參中人參皂苷Re的文獻報道不多，本文建立了相應的測定方法，為進一步開發利用植物資源提供了理論依據及實際指導意義。

1儀器與試藥

1.1儀器 LC-2010A日本島津高效液相色譜儀，LCsolution工作站；FA2004N電子天平（上海精密科學儀器有限公司，精度0.1 mg）。

1.2試藥 人參皂苷Re對照品（批號：110754-201324，含量測定用）購于中國藥品生物制品檢定所。珠子參藥材由云南省藥物研究所制藥廠提供，采收于云南德欽、大姚、麗江。經云南省藥物所究所天然藥物資源研究中心高麗正高級工程師鑒定為五加科植物人參屬珠子參Panax japonicusC.A.May.vat.major（Burk.）C.Y.Wu et KM.Feng或羽葉三七Panax japonicus C.A.May.vat.bipinnatifidus（Burk.）c.Y.Wu et K.M.Feng的干燥根莖。甲醇、乙睛為色譜純（美國Fisher公司），其他試劑均為分析純。水為超純水（18.21）Pa），0.45微米濾膜（安捷倫公司），磷酸及其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件 Waters XTerra MS C18（4.6 mm x250mm，5 tun）；流動相為0.05%磷酸：乙腈=體積比55：45；流速1.0 mlVmin，柱溫30℃，檢測波長為203 nm；進樣量為10μL；理論塔板數按人參皂苷Re計算應不低于6000（見圖1）。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Re對照品0.01984 g，置于10 mL容量瓶中加甲醇稀釋至刻度，得濃度為1.984 mg/m1的人參皂苷Re對照品儲備液，備用。使用前過0.45 μm的微孔濾膜。

2.3供試品溶液的制備 取藥材粉末約1 g，精密稱定，加25 mL水飽和的正丁醇使充分溶解，水浴回流1.5 h。濾過提取液，濾液蒸干，殘渣加適量的甲醇溶解，并轉移至10 mL容量瓶中搖勻，定容，用0.45 nm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.4線性關系的考察 精密吸取“2.2”項下對照品溶液1、4、8、12、16μl按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，以進樣量（μg）為橫坐標X，峰面積（A）為縱坐標Y，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=1E+06X+16376，r=0.9999，（n=6）。結果表明，人參皂苷Re在0.992-11.9041.Lg范圍內呈良好的線性關系。

2.5精密度試驗 精密吸取同一濃度的人參皂苷Re對照品溶液10μL，重復進樣6次，分別測定峰面積值，得峰面積平均值為6562712，RSD=0.36%（n=6），精密度良好。

2.6重現性試驗 取同一批藥材5份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別測定人參皂苷Re的含量。結果樣品平均含量為1.3475%，RSD為0.3660%（n=6）。結果表明該方法重現性良好。

2.7穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別于制備后的0、2、4、6、8、12 h依法測定其含量，結果人參皂苷Re的平均含量為1.3220%，RSD=1.6451%（n=6）。表明該溶液在12 h內基本穩定。

2.8加樣回收率試驗 取6份已知含量的同一批藥材各約0.1 g，精密稱定，分別加入一定量的人參皂苷Re對照品溶液，按“2.3”項下制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件測定。得平均加樣回收率為96.41%，RSD=1.59%（n=6）。說明該方法準確可靠。見表1。

2.9樣品測定 取珠子參樣品按“2.3”項下方法制備供試品溶液，依照“2.1”色譜條件進行測定，結果見表2。

3討論

3.1流動相的選擇 參照各參考文獻對人參皂苷Re的高效液相測定，對流動相水、0.1%磷酸溶液、0.05%磷酸溶液、乙腈組合進行優選，并對其比例進行調整，結果0.05%磷酸：乙腈=55：45能很好的將其分離。

3.2提取方法的篩選 筆者對本試驗的樣品提取方法進行了單因素考察，分別就提取回流時間、提取方法、提取溶劑進行了篩選，結果發現回流時間1h和1.5h所得人參皂苷Re含量相差不大，但對于前面的雜質峰回流時間越長峰越小，故最終選擇了1.5h的回流時間；提取方法方面考察了冷浸法、熱回流法、超聲+回流法，結果熱回流法人參皂苷Re含量明顯高于其他兩種方式；其次，還分別考察了以甲醇、95%乙醇、75%乙醇、水飽和的正丁醇、三氯甲烷為提取溶劑的人參皂苷Re的含量測定，75%乙醇溶液的提取率最高，但其分離度差，雜質峰較多，水飽和的正丁醇提取率次之，但分離度較好，故選用水飽和的正丁醇做溶媒。故最終將回流時間定為1.5h，提取方法為熱回流法，提取溶劑為水飽和的正丁醇。

3.4產地及不同藥用部位的對比 通過測定各個產地珠子參藥材中的人參皂苷Re的含量，結果顯示，無論是根莖中的節和節間，還是地上部分與地下部分之間的含量差異都很小。從各產地情況看，麗江產的含量最高，德欽次之，另外兩個產地石林與楚雄的相差不大。這可能與各地的氣候、溫度及生長環境等有關。其次，但在實際生活中，人們習慣用其膨大的節間，而對其細長的節間是限用或不用。就人參皂苷Re的含量來看，其節及節間相差不大，可以充分利用其節間入藥，以擴大藥用部位及有效利用自然資源。

人參皂苷Re是珠子參的有效成分之一，且在珠子參的地上及地下部分均含有。采用高效液相色譜法對該成分進行了測定，方法簡單、準確，對擴大藥用部位，合理開發藥用植物資源提供了理論依據及實際指導意義。

（收稿日期：2016-11-28）