八角茴香的抑菌實驗

任孟瑤

摘要： 為了研究八角茴香的抑菌效果。用95%酒精和無菌水提取出八角茴香的抑菌活性物質，配置好培養基后將大腸桿菌菌液涂布，利用濾紙片擴散法研究這種中藥的抑菌效果。95%酒精提取或無菌水提取的這種中藥具有抑菌效果，從抑菌圈的大小能反應出八角茴香的抑菌能力大小不同。利用95%酒精提取的效果優于無菌水提取。

關鍵詞：八角茴香； 大腸桿菌； 紙片擴散法； 抑菌效果

Bacteriostatic test of star anise and Chinese prickly ash

Abstract： in order to study the antibacterial effect of Illicium verum. The antibacterial active substances of Illicium verum were extracted with 95% alcohol and sterile water. After the medium was laid， the Escherichia coli liquid was coated， and the bacteriostatic effect of the Chinese medicine was studied by filter paper diffusion method. 95% alcohol extraction or aseptic water extraction of this kind of Chinese medicine has bacteriostatic effect， from the size of the bacteriostatic ring can reflect the antibacterial ability of star anise is different in size. The result of 95% alcohol extraction is better than that of aseptic water extraction.

Key words： star anise； Escherichia coli； disk diffusion method； bacteriostatic effect

八角茴香的抑菌實驗

1.前言

越來越多的化學農藥在使用過程中對環境的破壞，已經引起人們的關注。有很多植物是抑菌活性物質的天然寶庫，產生的代謝產物高出40萬種 [1～4]。從植物的代謝物中提取或者人工開發出來的新型抑菌殺蟲藥物，漸漸成為現代的藥物熱點之一[5]。

八角茴香（Illicium verum Hook.f.）即大茴香，屬木蘭常綠喬木，形狀很特殊，果實有五個角，呈五角星的形狀，成熟后表現為棕紅色[6]。是我國特產的中藥，可以刺激神經，具有殺菌止痛，防流感的作用[7]。

2.材料

2.1菌種

大腸桿菌（Eseherichia coli），由山西大同大學生物系微生物實驗室提供。

2.2中藥提取物

市場購買的八角茴香。

2.3試劑藥品

牛肉膏，蛋白胨，NaCl，95%酒精，0.1 mol/l NaOH溶液，無菌水。

2.4儀器

全自動數顯立式高壓蒸汽滅菌鍋（上海博訊醫療生物儀器股份有限公司）、電子分析天平（賽多利斯科學儀器有限公司）、數顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）、全溫振蕩培養箱（常州市金壇晨陽電子儀器廠）、生化培養箱（武漢博爾斯科學儀器設備有限公司）。

3.實驗方法

3.1中藥提取液的制備

取市場購買的八角茴香的果實，洗凈自然晾干，搗碎，稱取10 g，2份。使用95%酒精提取，在兩份材料中分別加入100 ml 95%乙醇試劑和無菌水。選用60℃水浴2 h提取3次，過濾并合并濾液，八角母液濃度為0.1 g/ml，移到錐形瓶中，最后密封在冰箱中4℃冷藏備用[8]。

3.2提取液梯度制備

取若干15 ml試管。設95%酒精提取的八角為A組；無菌水提取的八角為B組。各設置10%、20%、30%的濃度梯度并設有空白對照。每組4個試管。

3.3紙片擴散法的抑菌測定

3.3.1菌種活化培養和菌懸液制備

實驗前一天將大腸桿菌富集培養，置于全溫震蕩培養箱中37℃，150 r/min下培養過夜。用生理鹽水調整菌液濃度。

3.3.2濾紙片制備

將濾紙片剪成6 mm的圓片狀，并進行滅菌。

3.3.3平板涂布

分配置液體、固體培養基滅菌，別取3～4滴菌懸液滴加于滅菌后的固體培養基表面，涂抹均勻。

取濾紙片分別放入A、B組試管中浸泡后取出來，每個皿上做4個重復，然后放在恒溫培養箱中，設置溫度為37℃。培養一天后，取實驗效果好的培養皿測定抑菌圈大小。

4.結果與分析

4.1抑菌圈的測定結果

測量2組實驗得到的抑菌圈大小，同一培養皿內4個抑菌圈取平均值，整理數據如表2。由抑菌圈直徑的大小得到敏感度表3。（20 mm以上極敏，15-20 mm高敏，10-14 mm中敏，10 mm以下低敏，0 mm不敏[9]）。

Table 2 diameter of the average inhibitory circle in the four experiments of A， B

Table 3 sensitivity of four groups of experiments： A， B

由表2可知，八角茴香的提取物濃度越高，抑菌效果越強。

5.討論

最終的結果發現，菌體培養一段時間后分別加入這種中藥的浸提液繼續培養，八角茴香用95%酒精提取的方法要優于用無菌水。

實驗表明，八角茴香提取物的抑菌效果較好。但是一般其成分極其復雜，介于實驗室和器材的局限性，并且八角茴香的產地、生長環境、品種質量和提取物的提取工藝方法等因素有許多的不同之處，這些都會對實驗結果產生一些影響。對于提取液中什么成分對什么菌種的抑制效果和抑菌得機理還需要進一步研究和探討。

參考文獻：

[1] 李金培， 張玉珍. 植物源農藥的利用[J]. 世界農業， 1998， （12）： 28-30.

[2] 張雁冰， 艾國民， 王克讓， 等. 馬桑葉提取物的殺蟲殺菌活性初步研究[J]. 河南農業科學， 2006， （01）： 60-63.

[3] 孟慶杰， 王光全. 植物激素及其在農業生產中的應用[J]. 河南農業科學， 2006， （04）： 9-12.

[4] 杜華， 王玲， 孫炳劍， 等. 防治植物病害的生物農藥研究開發進展[J]. 河南農業科學， 2004， （09）： 39-42.

[5] 周紅晞. 高等植物源農藥[J]. 農藥譯叢， 1994， （02）： 1-6.

[6] 林祁. 八角屬植物的分類學訂正[J]. 植物分類學報， 2000， （02）： 167-181.

[7] 靳士英， 婁海容. 八角茴香與達菲[J]. 現代醫院， 2006， （03）：6-9..

[8] 孟昭禮， 吳獻忠， 高慶霄， 等. 銀杏提取液對四種植物病原菌的抑菌作用[J]. 植物病理學報， 1995， （04）： 357-360.

[9] WS/T 125-1999， 紙片法抗菌藥物敏感試驗標準[s].