HPLC測(cè)定消炎利膽沖劑中黃芩苷的含量

白梓靜　高鵬

摘要：建立高效液相色譜法測(cè)定消炎利膽沖劑中黃芩苷含量的方法。色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C₁₈（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為0.2%磷酸溶液-甲醇（52：48），流速1.0mL·min^-1，檢測(cè)波長(zhǎng)276nm，柱溫28℃。黃芩苷在0.476～476μg·mL^-1范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系呈良好，其平均回收率為101.9%，RSD為1.31%。本法準(zhǔn)確、易于操作，重現(xiàn)性與穩(wěn)定性較好，可用于消炎利膽制劑中主要有效成分黃芩苷的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：消炎利膽沖劑；黃芩苷；HPLC

中圖分類號(hào)：O 657 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1671-0460（2017）01-0177-03

消炎利膽沖劑主要是由黃芩、白芍、厚樸、金錢草、五味子等18味中藥提取加工成的復(fù)方制劑，具有消炎利膽，活血行氣止痛，排石的作用。方中主藥一黃芩的主要有效成分為黃芩苷。本文用高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷含量，專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便快速，適用于對(duì)該制劑進(jìn)行質(zhì)量控制。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑、儀器

色譜甲醇、0.2%自制磷酸溶液、二次蒸餾水；

Agilent1200高效液相色譜儀；離心機(jī)；UVmini-1240紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；超聲清洗機(jī)。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C₁₈（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.2%磷酸溶液-甲醇（52：48）；柱溫：28℃；流速：1.0mL·min^-1；進(jìn)樣量：20μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：276nm。

1.3 對(duì)照品與供試品

黃芩苷對(duì)照品（購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，112426-201510）

消炎利膽沖劑（延安市中醫(yī)醫(yī)院制劑室，批準(zhǔn)文號(hào)：陜藥管制字[2001]第3674號(hào)）

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

取消炎利膽沖劑一小袋置于研缽中研成粉末狀，精密稱定，混勻，取細(xì)粉約0.5g，加甲醇置于50mL量瓶中，超聲處理30min，自然放冷至室溫，用0.45μm的微孔膜過(guò)濾取得的上清液，即得供試品溶液。另取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每mL黃芩苷對(duì)照品溶液中含有0.476mg的黃芩苷對(duì)照品溶液。按醫(yī)院處方工藝制備不含黃芩的供試品，做成陰性對(duì)照品溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 流動(dòng)相的選擇

測(cè)定黃芩苷時(shí)分別選擇0.2%磷酸-甲醇，冰醋酸-水-甲醇，0.1%的冰乙酸溶液與甲醇，0.1%的磷酸溶液與甲醇，乙腈0.2%磷酸，最終根據(jù)理論塔板數(shù)和峰形選擇了0.2%的磷酸溶液與甲醇（52：48）作為其流動(dòng)相。

2.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

通過(guò)參考諸多文獻(xiàn)，經(jīng)掃描發(fā)現(xiàn)黃芩苷對(duì)照品的最大吸收波長(zhǎng)為276nm，最終將其確定為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 待測(cè)樣品提取方法的選擇

本文分別考察了加熱回流和超聲2種方法，結(jié)果顯示超聲相對(duì)于加熱回流提取效果更好，更簡(jiǎn)便可行，因此，選取了30min的超聲作為提取方法。

2.3 HPLC色譜圖

HPLC色譜圖見(jiàn)圖1-3。

2.4 驗(yàn)證的特性指標(biāo)測(cè)試數(shù)據(jù)及結(jié)果

2.4.1 線性范圍

精密量取黃芩苷對(duì)照品溶液適量，分別配制成濃度為0.000476、0.0476、0.0952、0.238、0.476mg·mL^-1的溶液作為對(duì)照品溶液，用進(jìn)樣針吸取20μL的上述不同濃度的對(duì)照品溶液進(jìn)樣。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，色譜儀中的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的回歸方程為y=50727x+25.326，r=0.9996（n=5）。說(shuō)明黃芩苷在0.476-476μg·mL^-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一供試品溶液（20150326）粉末6份，按1.4項(xiàng)下制備供試品溶液，在相同色譜條件下于0，2，4，8和24h重復(fù)進(jìn)樣，結(jié)果測(cè)得黃芩苷平均峰面積為1357.6，RSD為0.89%，表明在上述2.1實(shí)驗(yàn)條件下，24h以內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定性較好。

2.4.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取消炎利膽沖劑同一批次的（20150822）粉末6份，按1.4項(xiàng)下制備供試品溶液，精密量取20μL進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果黃芩苷的平均含量為2.63mg·g²⁺，黃芩苷的RSD為0.96%，表明重復(fù)性良好。

2.4.4 精密度實(shí)驗(yàn)

取同一批供試品溶液（20151108）粉末6份，按1.4項(xiàng)下制備供試品溶液，精密量取20μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，平均峰面積為1378.9，RSD為0.93%，表明本系統(tǒng)精密度良好。

2.4.5 陰性對(duì)照品實(shí)驗(yàn)

將原制劑中的中藥黃芩去除，再依據(jù)醫(yī)院關(guān)于此制劑的制備工藝及處方比例制成空白樣品，按1.4實(shí)驗(yàn)方法項(xiàng)下的方法操作該空白樣品，制備成陰性對(duì)照液。用進(jìn)樣針吸取20μL的陰性對(duì)照液，進(jìn)樣后測(cè)定，結(jié)果表明基本無(wú)干擾。

2.4.6 回收率實(shí)驗(yàn)

取同一批次消炎利膽沖劑樣品6份，研缽研細(xì)，每份仍稱取約0.5g，置于容量瓶中，分別加入3種稀釋后不同濃度的黃芩苷對(duì)照品溶液，然后按照樣品溶液制備方法操作，用進(jìn)樣針吸取20μL溶液進(jìn)樣，測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1，黃芩苷的平均回收率為101.9%，RSD1.31%。

2.4.7 樣品含量測(cè)定

按上述含量測(cè)定方法測(cè)定該院消炎利膽沖劑中黃芩苷的含量，結(jié)果見(jiàn)下表2。

4 結(jié)束語(yǔ)

本文采用高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷含量，其明顯優(yōu)勢(shì)在于操作非常簡(jiǎn)便、專屬性較強(qiáng)，適用于該院的消炎利膽沖劑在生產(chǎn)中的質(zhì)量管理控制。