補體的制備及其經典激活途徑在實驗教學中的應用

滕麗娟

廣西中醫藥大學賽恩斯新醫藥學院 廣西壯族自治區南寧市 530222

補體的制備及其經典激活途徑在實驗教學中的應用

滕麗娟

廣西中醫藥大學賽恩斯新醫藥學院 廣西壯族自治區南寧市 530222

目的：探討如何制備新鮮豚鼠血清作為補體的方法及補體經典激活途徑在實驗教學中的應用。方法：對豚鼠進行心臟采血，血液放放置37℃水浴箱30min析出血清，收集帶有少量紅細胞的血清離心，取上清液從而獲得含有大量補體的豚鼠血清。顆粒抗原（2%綿陽紅細胞）與相應抗體(溶血素）特異結合產生的免疫復合物可激活補體的經典途徑從而使綿羊紅細胞細胞溶解。綿羊紅細胞溶血實驗檢測了補體被激活后產生的溶血作用。結果：同時具備有抗原，相應抗體，補體的試管發生綿羊紅細胞溶血現象。結果顯示陽性。結論：豚鼠血清做補體的制作方法簡單，快速。血清含補體成分高，補體活性強。用于實驗制作成本低，實驗效果顯著，可大量使用于相關高校的免疫學基礎實驗教學。

補體；血清制備；溶血實驗；實驗教學

補體（complement,C)系統是廣泛存在于人和脊椎動物新鮮血清、組織液和細胞膜表面具有多種調控機制的蛋白酶促反應系統，由30余種可溶性蛋白和膜結合蛋白組成，激活后具有多種生物功能。生理情況下，血清中的補體成分多以無活性的酶前體形式存在。只有當激活物存在時，補體各成分才可依次被激活形成一系列級酶促反應，最終出現溶細胞等效應。目前研究發現補體激活的主要途徑有：經典途徑，凝集素途徑和旁路途徑。本文通過對豚鼠進行心臟采血，離心血液取血清作為補體，應用補體激活的經典途徑方式驗證補體激活后的溶血作用。實驗包括實驗動物的選擇，動物如何抽血，血清分離和溶血實驗操作等進行探討。

1 主要試劑與器材

1.1 抗原，抗體，補體

2%綿羊紅細胞(2%SRBC)、溶血素、豚鼠血清（自制）。

1.2 試劑與器材

生理鹽水、試管、離心機、試管架、注射器、無菌培養皿、吸管等。

2 實驗方法

2.1 補體的制備

2.1.1 動物的選擇

研究發現豚鼠血清補體含量都高于其他動物，而且豚鼠體型較小，性格溫順比較容易控制。因此本實驗選擇豚鼠做為實驗動物。

2.1.2 心臟采血

需兩人協作，一人將豚鼠固定仰臥。采血者用左手在胸骨左側觸摸到心臟跳動最快，最有節湊的地方。確定好部位后用碘伏消毒，用針頭刺入心臟。泵血后應迅速取血，以防豚鼠掙扎針頭脫落。如果針頭已刺入心臟還沒有泵血出來時，可將針頭慢慢退出一點即可。失敗時應拔出重新操作，切記針頭在胸腔內擺動，以防損傷心臟和肺致動物死亡。一般一只豚鼠可采血10ml。

2.1.3 分離血清

采到的血液不能抗凝，置于無菌75mm培養皿中蓋好。室溫靜置或置于37℃環境中促凝。待析出血清后收集血清放入離心管進行離心（一般離心3000r/ min,15min)，收集上清液。所得到上清液即為含有大量補體的血清。

2.2 溶血實驗檢測補體激活的生物作用

此實驗是醫學基礎學科必須掌握的基礎技能之一，是臨床上測定人體血清總補體活性，了解機體的免疫水平的一個驗證方法。闡明了某些疾病的發病機理，并作為有關疾病的診斷和觀察病情變化的一項重要指標。作為醫學生掌握這項實驗技術是非常有必要的。我們實驗使用的顆粒抗原是新鮮2%綿羊紅細胞，抗體溶血素做1:50稀釋，新鮮豚鼠血清做補體按1:15稀釋，生理鹽水做平衡對照。按照表1的要求添加試劑。

表1

3 實驗結果

本實驗是利用對比，排除的驗證方法。發現只有同時存有綿陽紅細胞，抗綿羊紅細胞抗體（溶血素），補體的情況下才出現紅細胞溶解現象。驗證了只有抗原（綿羊紅細胞）與相應抗體（溶血素）特異結合形成抗原抗體復合物（免疫復合物），才能激活補體的經典途徑而使綿羊紅細胞溶解，發生溶血現象。即只有第一管發生溶血，結果顯陽性。其它管均不符合激活補體經典途徑的條件而無法發生溶血。

4 實驗結論

本實驗為綜合性實驗，涉及學生要自己選擇動物，自己抽血取血清，自己通過實驗驗證結果。實驗中使用到一些簡單又常用的儀器設備，充分體現了學生的基礎實驗操作的綜合能力。有利于培養學生動手能力，思考能力。另外，豚鼠血清做補體的制作方法簡單，快速。血清含補體成分高，補體活性強用于實驗制作成本低，實驗效果顯著，可大量使用于相關高校的免疫學基礎實驗教學。

[1]郭立軍,王晶,甚元英,等.三種免疫血清制備方法的比較[J].大理學院學報,2004,3(05):7-8.

[2]梁瑩.山羊紅細胞在補體溶血試驗中的應用[J].咸寧醫學院學報,1996,10(03)140.

滕麗娟（1983-），女，壯族，廣西壯族自治區南寧市人。大學本科學歷。助教職稱。主要研究《微生物與免疫學》的實驗教學與實驗方法改進的方向，特別是醫學類三本院校的基礎醫學實驗教學改革和實驗改進工作，尋求出更適合醫學學生的實驗教學方案。