高效液相色譜法測定吡羅昔康注射液的有關物質及含量

李倩

摘要：目的 建立HPLC法測定吡羅昔康注射液含量及有關物質方法。方法 色譜柱：Inertsil ODS-SP（4.6 mm×250mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.5%冰乙酸溶液（60∶40）；流速1.0 ml/min；檢測波長338 nm；柱溫30 ℃。結果 吡羅昔康在2.04～51.10 μg/ml范圍內呈良好線性關系Y=553235X-234531（r=0.9994），平均回收率為100.20%，RSD 1.3%。結論 本法方便、簡單、準確，適于吡羅昔康注射液含量測定，而吡羅昔康注射液有關物質測定建議采用藥典所用方法。

關鍵詞：HPLC；吡羅昔康注射液；含量測定；有關物質

中圖分類號：R927.2 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1959（2017）14-0190-02

吡羅昔康（piroxican）是一種非甾體類抗炎藥物，具有較好的解熱、鎮痛、抗炎療效，主要用于緩解類風濕、風濕性關節炎及軟組織病變的疼痛和腫脹等，在國內應用廣泛[1-3]。查閱近年來藥典發現，吡羅昔康注射劑含量測定已由最初的非水滴定衍生到目前的高效液相檢測，且2015年藥典中也把有關物質進一步引入到其藥物質量控制當中[4]。目前可查文獻中吡羅昔康有關物質及含量測定方法[5-6]與藥典均有所差異，本文由此出發，考察其中報道較多的一種方法測定吡羅昔康注射劑有關物質及含量，并與藥典法進行比較。

1資料與方法

1.1儀器與試藥

日本島津 LC-2010CHT型高效液相色譜儀；瑞士梅特勒XS205DU型電子天平；甲醇、乙腈由霍尼韋爾貿易（上海）有限公司提供，為色譜醇；二甲替甲酰胺、冰乙酸、磷酸二氫鉀均為分析純；吡羅昔康對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：151017，含量：98.4%）；吡羅昔康注射液（無錫華裕制藥有限公司，規格為 2 ml∶20 mg）。

1.2方法

1.2.1高效液相色譜法

1.2.1.1色譜條件 色譜柱選擇Inertsil ODS-SP（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：甲醇-0.5%冰乙酸溶液（60∶40），檢測波長338 nm，進樣量10 μl，流速1.0 ml/min，柱溫30 ℃[5]。

1.2.1.2溶液的制備 ①供試品溶液的制備：精密移取吡羅昔康注射液4 ml于100 ml的容量瓶中，加入2 ml二甲替甲酰胺溶解并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取5 ml于25 ml容量瓶中，加入甲醇稀釋并定容，取適量溶液經微孔濾膜（0.45 μm）過濾，取續濾液待用。②對照品溶液的制備：采用十萬分之一天平稱取吡羅昔康對照品10.22 mg于100 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。

1.2.1.3方法學考察 ①精密度試驗：在“1.2.1.1”項色譜條件下，對照品溶液過0.45 μm濾膜后重復進樣6次，10 μl/次，分別測定峰面積，并計算6組數據所得的相對標準偏差RSD，結果為1.4%<2.0%，符合藥典規定[7]，提示本組方法精密度良好。②重復性試驗：選擇同批號吡羅昔康注射劑，根據供試品“1.2.1.2①”項操作制備供試品溶液，采用“1.2.1.1”項色譜條件，進樣10 μl，采集6份樣品的色譜圖，計算溶液的相對標準偏差RSD=1.6%（<2.0%），符合標準規定[7]，提示本組方法具有較好的重復性。③穩定性試驗：于2 h、4 h、8 h、12 h取供試品溶液，采用相同色譜條件，進樣10 μl，根據測得的色譜峰面積，供試品組RSD=1.7%<2.0%，提示供試品溶液在12 h內較為穩定。④回收率考察：精密移取“1.2.1.2①”項供試液2 ml于10 ml容量瓶中，保存至3個錐形瓶內，依次加吡羅昔康對照品溶液1 ml、2 ml和3 ml，加甲醇定容至刻度，過0.45 μm微孔濾膜后取續濾液，進樣10 μl，對峰面積進行測定，得到回收率分別為：100.22%、100.18%和100.20%，平均100.20%，RSD 1.3%，與藥典標準相符[7]。

1.2.1.4線性關系的考察 采用移液管精密移取“1.2.1.2②”下對照品溶液0.20 ml、0.50 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml于10 ml容量瓶中，使用甲醇稀釋至刻度，澄清后，采用0.45 μm微孔濾膜過濾，得到系列標準溶液。結合對應色譜條件，進樣10 μl，測定樣品色譜峰面積，以峰面積和濃度為坐標，建立標準曲線，得到方程為Y=553235X-234531（r=0.9994），提示吡羅昔康濃度在2.04～51.10 μg/ml范圍內與峰面積存在良好的線性關系。

1.2.2樣品中吡羅昔康有關物質及含量測定 結合“1.2.1.1”項色譜條件，進樣10 μl，分別測定吡羅昔康對照品溶液與3批吡羅昔康注射劑含量。記錄色譜圖至吡羅昔康峰保留時間的3倍，調節檢測靈敏度，使對照溶液所得色譜圖中吡羅昔康的峰高為滿量程的20%～25%，通過自身對照法計算雜質含量。

2結果

結果顯示，采用本法測定吡羅昔康注射劑中吡羅昔康含量與藥典法比較，差異無統計學意義（P>0.05），而測定的有關物質含量經比較，藥典法要高于本方法，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

3討論

經方法學考察顯示，本文所用高效液相法測定吡羅昔康含量的方法準確性高、精密度好、重現性和相關性均符合相關要求，且本法與藥典方法比較可知，兩組所測主成分含量差異無統計學意義（P>0.05），可見HPLC法測定吡羅昔康注射液主成分含量可行。但就有關物質來說，本法所測有關物質含量明顯低于藥典方法，由分析可知，藥典考察體系以乙腈-0. 05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調節pH值至3.0）（35∶65）為流動相，檢測波長為230 nm，與本文所用流動相甲醇-0.5%冰乙酸溶液（60∶40）、檢測波長差異338 nm存在較大差異，而吡羅昔康相關物質中包含氯乙酸乙酯、2-氨基吡啶、糖精鈉等，均在230nm有一定吸收而338 nm吸收較弱，可能是導致本文所測有關物質含量偏低原因。

綜上所述，本文所用高效液相法可考慮用于吡羅昔康注射液的主成分含量分析的備選方法，而對于其相關物質測定，建議采用2015版藥典中推薦的測定方式。

參考文獻：

[1]陳敬蘇，薛薇.吡羅昔康注射液的有關物質及含量分析[J].中國醫藥指南，2016（4）：46.

[2]李玲，姜燕，陳乃江.高效液相色譜法測定吡羅昔康片的有關物質[J].海峽藥學，2016，28（9）：55-56.

[3]張宏祥，劉燕.高效液相色譜法測定吡羅昔康片的含量[J].現代科學儀器，2011（2）：104-105.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].北京：化學工業出版社，2015：471.

[5]劉洪海.HPLC測定吡羅昔康注射液含量及有關物質[J].中國現代應用藥學，2015，32（9）：1125-1127.

[6]李存金，郭飛宇.反相高效液相色譜法測定吡羅昔康膠囊中吡羅昔康含量[J].中國藥業，2010，19（23）：36-37.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（四部）[S].北京：化學工業出版社，2015：374-377.

編輯/王海靜