RP-HPLC法測定穿心蓮片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量

馬紀偉

（南陽醫學高等專科學校，河南 南陽 473058）

RP-HPLC法測定穿心蓮片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量

馬紀偉

（南陽醫學高等專科學校，河南 南陽 473058）

目的 測定穿心蓮片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量。方法利用RP-HPLC法，采用Diamonsil（鉆石）C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，流動相為甲醇-水（55∶45），流速：1.0 mL/min，檢測波長：225 nm（穿心蓮內酯）、254 nm（脫水穿心蓮內酯）。結果 穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯分別在0.31～2.38 μg和0.29～2.51 μg范圍內線性關系良好，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的平均回收率分別為100.53%和99.98%，RSD分別為2.06%和2.45%。結論 RP-HPLC法測定穿心蓮片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量，方法簡便，樣品處理簡便易行，可作為穿心蓮片的質量控制方法。

穿心蓮片；穿心蓮內酯；脫水穿心蓮內酯；RP-HPLC法

穿心蓮片是由穿心蓮干浸膏加適量輔料壓制而成的中藥片劑，具有清熱解毒、涼血消腫的功效，臨床上用于感冒發熱、咽喉腫痛、口舌生瘡[1]。穿心蓮的主要有效成分為穿心蓮內酯及脫水穿心蓮內酯等[2]，為了有效控制產品質量，保證臨床用藥安全，筆者用RP-HPLC法測定穿心蓮片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量，結果證明該方法簡便易行，現介紹如下。

1 儀器與藥品

1.1 儀器

日本島津LC－10AD高效液相色譜儀；島津SPD－10A紫外檢測器；浙江大學智能信息研究所N2000雙通道色譜工作站。

1.2 藥品

穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）；穿心蓮片（廣西濟民制藥廠，批號為160301、160302、160401）；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil（鉆石）C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（55：45）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：225 nm（穿心蓮內酯）、254 nm（脫水穿心蓮內酯）。

2.2 樣品溶液制備

取穿心蓮片樣品20片，除去包衣，精密稱定，研細，精密稱取0.2 g，置于50 mL量瓶中，加入甲醇50 mL，冷浸1小時，超聲處理30分鐘，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液即得。

2.3 對照品溶液制備

精密稱取穿心蓮內酯對照品11.35 mg、脫水穿心蓮內酯對照品12.32 mg，分別置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，濃度分別為113.5 μg/mL、123.2 μg/mL。

2.4 陰性對照實驗

取輔料適量，按2.3的方法制備陰性樣品。精密吸取陰性溶液10 μL并測定，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯分離良好，陰性樣品在穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯對照品于相同保留時間未見有吸收峰，說明無干擾。見圖1。

圖1 穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯RP-HPLC色譜圖

2.5 線性關系

取上述兩種對照品溶液，分別精密吸取4 μL、6 μL、8 μL、10 μL、12 μL、14 μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積。以對照品進樣量（μg）為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結果表明，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的進樣量與其色譜峰面積均呈良好的線性關系。回歸方程：穿心蓮內酯：Y= 6 702.0X+15.08，R=0.999 9，線性范圍：0.31～2.38 μg；脫水穿心蓮內酯：Y=4 941.29X－14.97，R=0.999 7，線性范圍：0.29～2.51 μg。

2.6 精密度實驗

精密吸取對照品溶液10 μL，連續進樣5次，記錄峰面積。結果穿心蓮內酯平均峰面積為1 722 548，RSD=0.52%；脫水穿心蓮內酯平均峰面積為1 202 541，RSD=0.56%。

2.7 重復性實驗

取同一批號樣品5份，按樣品測定方法測定，結果樣品中穿心蓮內酯的平均含量為22.48 mg/片，RSD為0.48%；脫水穿心蓮內酯為20.09 mg/片，RSD為0.51%。

2.8 穩定性實驗

取同一樣品溶液10 μL，分別放置2小時、4小時、6小時、8小時、14小時、24小時測定色譜峰面積。結果穿心蓮內酯平均峰面積為2 022 152，RSD=0.36%；脫水穿心蓮內酯平均峰面積為1 748 511，RSD=0.41%。可知樣品溶液在24小時內穩定。

2.9 加樣回收實驗

精密量取已知含量樣品5份，精密加入對照品適量，按樣品溶液制備方法制備，取樣品溶液和對照品溶液10 μL，分別進樣，測定峰面積，計算回收率。結果平均回收率穿心蓮內酯為100.53%，RSD=2.06%；脫水穿心蓮內酯為99.98%，RSD=2.45%，具體見表1。

2.10 樣品測定

按2.2樣品溶液的制備方法，測定3批樣品的含量，結果見表2。

3 討論

表1 穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯回收率實驗

表2 穿心蓮片成分含量測定

3.1 流動相的選擇

本實驗比較了甲醇-水（60∶40）、甲醇-水（55∶45）、甲醇-水（50∶50）等流動相，經實驗摸索，最終確定流動相組成為甲醇-水（55∶45）分離效果最好。

3.2 柱溫的選擇

曾考察25℃、28℃、30℃、35℃等不同柱溫對測定結果的影響，結果表明，30℃時各色譜峰之間分離度好、峰形銳、出峰時間適宜，故選擇30℃為測定柱溫。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[M].北京：化學工業出版社，2015.

[2]唐芳，向大雄，李煥德.RP-HPLC法測定穿心蓮及其制劑中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量[J].藥物分析雜志，2000，20（6）：421.

G424.31

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1671-1246（2017）12-0150-02