高效液相色譜－蒸發光散射檢測器法測定鹽酸金剛烷胺片中鹽酸金剛烷胺含量

裴 璐，張愛兵

(河北省唐山市藥品檢驗所，河北 唐山 063000)

鹽酸金剛烷胺片主要用于治療帕金森綜合征藥物誘發的錐體外系疾病，也用于預防A型流感病毒所引起的呼吸道感染，其在紫外及可見光區均無吸收。對于鹽酸金剛烷胺片的含量測定方法，2005年版《中國藥典(二部)》采用高氯酸非水滴定法[1]，2010年版《中國藥典(二部)》采用的電位滴定法[2]，操作煩瑣，前處理樣品取樣量較大。有報道采用酸性染料比色法[3]、滴定法[4]、高效液相色譜法[5－6]、示波極譜法[7]等測定鹽酸金剛烷胺含量。筆者采用高效液相色譜－蒸發光散射檢測器法測定鹽酸金剛烷胺片的含量，快速、簡便、準確、重復性好。

1 儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜系統;Alltech 2000ES ELSD檢測器;Empower色譜工作站;Sartorius BP211D型電子天平。鹽酸金剛烷胺對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100426－200301);鹽酸金剛烷胺片(0.1 g)為市售，水為純化水，乙腈為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱:Aglient BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －水(70∶30)，流速:0.5mL/min，柱溫:30℃，進樣量:10μL;漂移管溫度:95℃，霧化氣體為空氣，載氣流速:2.5 L/min。在該色譜條件下，理論板數不低于4000。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜－蒸發光散射檢測器法色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取鹽酸金剛烷胺對照品10.12 mg，置100 mL容量瓶中，加流動相溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。取鹽酸金剛烷胺片20片，精密稱定，研細，精密稱取細粉0.08475 g(約相當于鹽酸金剛烷胺50 mg)，置50 mL容量瓶中，加流動相振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL置50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。同時配制不含主藥的陰性空白溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密量取 2.2項下的對照品貯備液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 mL，分別置 10 mL 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制得系列對照品溶液，按上述色譜條件進樣測定，以峰面積(Y)為縱坐標、質量濃度(X)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=3.736×106X －2.3496×104，r=0.9996(n=6)。結果表明，鹽酸金剛烷胺質量濃度在 40.92 ～143.22 μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10 μL，連續進樣6次，記錄色譜圖。結果峰面積的 RSD為0.7%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:精密量取同一供試品溶液10 μL，分別于0，4，8，12，16，20，24 h 時進樣測定。結果峰面積的 RSD 為 0.8%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

重復性試驗:按2.2項下方法制備供試品溶液6份，進樣測定，記錄色譜圖，按外標法計算。結果平均標示含量為99.6%，RSD 為 0.6%(n=6)。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量鹽酸金剛烷胺片細粉9份，精密加 2.26 g/L 的對照品溶液 4.0，5.0，6.0 mL，按 2.2 項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣測定。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取5批不同廠家樣品，按上述方法測定。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果(百分標示量，n=5)

3 討論

鹽酸金剛烷胺在水或乙醇中易溶[2]。經試驗，鹽酸金剛烷胺片在水中能很好溶解，但水的沸點高，對漂移管的溫度要求高，因此溶劑選擇與流動相比例一致的乙腈、水能夠有效地改善樣品霧化溫度，達到檢出率高的效果。為使測定結果準確，方法的重現性好，對被測樣品質量溶度進行選擇，分別配制 0.05，0.1，0.2 g/L 的供試品溶液進行測定。根據鹽酸金剛烷胺的峰面積及靈敏度，選擇0.1 g/L為宜。

現行質量標準[2]采用容量法測定。試驗中發現，該操作步驟煩瑣，而文中建立的高效液相色譜－蒸發光散射檢測器法簡便、快速、準確。

鹽酸金剛烷胺，分子結構中無共軛雙鍵，因而在紫外光區無吸收，最大吸收波長為195 nm，用紫外方法測定時存在基線漂移不穩、不宜檢測等缺點。蒸發光檢測器基線平穩，試驗中對霧化載氣流量和漂移管溫度進行優化，用高效液相色譜－蒸發光散射檢測器法測定鹽酸金剛烷胺的含量，獲得較好的結果。

試驗中，考察了乙腈－0.06%三氟醋酸流動相系統，基線不容易平穩，同時三氟醋酸為揮發性酸，腐蝕性強，不利于環保;以乙腈－水(70∶30)流動相時系統出峰時間快，峰面積穩定。

試驗中考察了 Aglient BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、Thermo BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、Phenomsil BDS C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)不同廠家的3根色譜柱，發現不同品牌的色譜柱峰面積穩定，重現性良好。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:538.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業出版社，2005:716.

[3]姜德長，何選林，秦旭東.鹽酸金剛烷胺片的含量測定[J].中國藥業，2006，15(15):44.

[4]涂 瓊，吳澄清，盧慶紅.雙相滴定法測定金剛烷胺合劑的含量[J].兒科藥學雜志，2004，10(4):45.

[5]修 虹，黃榕珍，付梅春.HPLC－ELSD法測定復方氨酚烷胺膠囊中鹽酸金剛烷胺及對乙酰氨基酚的含量[J].中國藥品標準，2006，7(1):23.

[6]李士敏，王 偉.液相色譜－質譜聯用法測定大鼠血漿中鹽酸金剛烷胺濃度及體內藥動學研究[J].藥物分析雜志，2007，27(1):66.

[7]宋宏春，王 偉，楊永明.示波極譜法測定鹽酸金剛烷胺及其制劑的含量[J].藥物分析雜志，1993，13(6):401.