RP-HPLC法測(cè)定洛索洛芬鈉片的含量及有關(guān)物質(zhì)

袁浩宇，王 鵬，易 紅，俞 瑜（核工業(yè)四一六醫(yī)院，成都 610051）

RP-HPLC法測(cè)定洛索洛芬鈉片的含量及有關(guān)物質(zhì)

袁浩宇＊，王 鵬，易 紅#，俞 瑜（核工業(yè)四一六醫(yī)院，成都 610051）

目的：改進(jìn)測(cè)定洛索洛芬鈉片中主成分含量及有關(guān)物質(zhì)的方法。方法：采用反相高效液相色譜法。色譜柱為迪馬Inspire C18，流動(dòng)相為乙腈-0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0±0.1）（62∶38，V/V），流速為1.0m L/ min，柱溫為40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為221 nm，進(jìn)樣量為20μL。結(jié)果：洛索洛芬鈉峰與相鄰雜質(zhì)峰達(dá)到良好分離（分離度＞1.5）；洛索洛芬鈉檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為30.0～90.0μg/m L（r＝0.999 8）；洛索洛芬鈉檢測(cè)限為0.3μg/m L；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜1.0%；回收率為99.00%～99.87%，RSD＝0.33%（n＝9）。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速，適用于洛索洛芬鈉片的質(zhì)量控制。

反相高效液相色譜法；洛索洛芬鈉片；含量；有關(guān)物質(zhì)

洛索洛芬鈉（Loxoprofen sodium），化學(xué)名為2-[4-（2-氧代環(huán)戊烷-1-基甲基）苯基]丙酸鈉二水合物，為前列腺素（PG）合成酶抑制劑，具有解熱、鎮(zhèn)痛及抗炎作用，臨床上廣泛用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，腰痛，肩周炎，頸肩腕綜合征，急性上呼吸道炎癥，手術(shù)、外傷后及拔牙后的鎮(zhèn)痛消炎，與同類藥物相比具有起效更快、臨床效果更好、副作用更小等特點(diǎn)[1]。為了保證用藥安全、有效，筆者改進(jìn)了以反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測(cè)定洛索洛芬鈉片中主成分含量及有關(guān)物質(zhì)的方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器

1100型HPLC儀，包括紫外檢測(cè)器及ChemStation色譜工作站等（美國(guó)Agilent公司）；FE20K型酸度計(jì)（瑞士Metter-Toledo公司）；BS224S型萬(wàn)分之一電子天平（德國(guó)Sartorius公司）。

1.2 藥品與試劑

洛索洛芬鈉對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100638-200407，純度：99.0%，供含量測(cè)定用）；洛索洛芬鈉片（四川省人民醫(yī)院制劑室自制，批號(hào)：110110、110111、110112，規(guī)格：60mg）；乙腈（色譜純，美國(guó)Fisher公司）；其他試劑均為分析純，水為自制超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：迪馬Inspire C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0±0.1）（62∶38，V/V）；流速：1.0m L/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：221 nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 取樣品10片（批號(hào)：110110），精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于洛索洛芬鈉30mg），置于50m L量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5m L，置于50m L量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液 精密稱取洛索洛芬鈉對(duì)照品15 mg，置于25m L量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5m L，置于50m L量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成每1m L中含洛索洛芬鈉60.0μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 空白輔料溶液 按樣品處方精密稱取除洛索洛芬鈉外的空白輔料適量，再按“2.2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行制備，即得空白輔料溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性與專屬性試驗(yàn)

2.3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 精密量取“2.2”項(xiàng)下供試品溶液、對(duì)照品溶液和空白輔料溶液各20μL，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見圖1。結(jié)果表明，理論板數(shù)按照洛索洛芬鈉峰計(jì)算≥4 000，洛索洛芬鈉峰的保留時(shí)間約為8.1min，與相鄰雜質(zhì)峰的分離度＞1.5。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatogramsof system suitability tests

2.3.2 專屬性試驗(yàn) 取樣品10片（批號(hào)：110110），精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于洛索洛芬鈉30mg），加20m L的0.1mol/m L鹽酸溶液，室溫放置2 h后，用0.1mol/m L氫氧化鈉溶液中和至中性，以流動(dòng)相定容至50m L，作為酸破壞溶液；精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于洛索洛芬鈉30mg），加20m L的0.1mol/m L氫氧化鈉溶液，室溫放置2 h后，用0.1mol/m L鹽酸溶液中和至中性，以流動(dòng)相定容至50m L，作為堿破壞溶液；精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于洛索洛芬鈉30mg），加3%雙氧水溶液10m L，室溫放置4 h后，以流動(dòng)相定容至50m L，作為氧化破壞溶液；精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于洛索洛芬鈉30mg），在60℃下放置5 d，以流動(dòng)相定容至50 m L，作為熱破壞溶液；精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于洛索洛芬鈉30mg），在（4 500±500）lx強(qiáng)光下照射5 d，以流動(dòng)相定容至50m L，作為光破壞溶液。取上述各破壞試驗(yàn)溶液適量，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見圖2。結(jié)果表明，雖經(jīng)破壞后各雜質(zhì)峰面積有一定增加，但洛索洛芬鈉峰與相鄰雜質(zhì)峰之間、各雜質(zhì)峰之間均能達(dá)到基線分離。

2.4 線性關(guān)系考察

圖2 專屬性試驗(yàn)高效液相色譜圖Fig 2 HPLC chromatogramsofspecificity tests

取洛索洛芬鈉對(duì)照品30mg，精密稱定，置于50m L量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為線性工作對(duì)照品貯備液。分別精密量取上述貯備液適量，用流動(dòng)相稀釋制成質(zhì)量濃度為30.0、48.0、60.0、72.0、90.0μg/m L的系列線性工作對(duì)照品溶液，分別精密量取20μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以洛索洛芬鈉峰面積（y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（x，μg/m L）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y＝50 891x+3 043.5（r＝0.999 8）。結(jié)果表明，洛索洛芬鈉檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為30.0～90.0μg/m L。

2.5 檢測(cè)限

精密稱取洛索洛芬鈉對(duì)照品適量，用流動(dòng)相制成每1m L中含0.3μg的溶液，精密量取20μL注入HPLC儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，此時(shí)信噪比約為3∶1，計(jì)算得到洛索洛芬鈉的檢測(cè)限為0.3μg/m L。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密量取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，洛索洛芬鈉峰面積的RSD＝0.74%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：110110）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，洛索洛芬鈉峰面積的RSD＝0.62%（n＝6），表明供試品溶液室溫下放置10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：110110）適量，精密稱定，分別按“2.2.1”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算洛索洛芬鈉含量。結(jié)果，洛索洛芬鈉的平均標(biāo)示百分含量為99.48%，RSD＝0.57%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn)

按樣品處方精密稱取空白輔料適量，共9份，每3份一組，分別精密加入低、中、高不同質(zhì)量的洛索洛芬鈉對(duì)照品，分別按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，并計(jì)算洛索洛芬鈉的回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Resultsof recovery tests（n＝9）

2.10 樣品含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

2.1 0.1 樣品含量測(cè)定 取3批樣品各適量，分別按“2.2”項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，采用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算洛索洛芬鈉含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Resultsof contentsand related substancesdeterm ination of samples（n＝3）

2.1 0.2 樣品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 每批樣品取10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于洛索洛芬鈉30 mg），置于100m L量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為有關(guān)物質(zhì)測(cè)定用供試品溶液；精密量取上述有關(guān)物質(zhì)測(cè)定用供試品溶液適量，加流動(dòng)相稀釋制成每1m L中含洛索洛芬鈉3μg的溶液，作為有關(guān)物質(zhì)測(cè)定用對(duì)照溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，取有關(guān)物質(zhì)測(cè)定用對(duì)照溶液20μL注入HPLC儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分峰高約為滿量程的25%；再取有關(guān)物質(zhì)測(cè)定用供試品溶液20μL注入HPLC儀，記錄色譜至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液色譜圖中如顯現(xiàn)除空白輔料峰外的雜質(zhì)峰，則各雜質(zhì)峰面積的總和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的0.5倍（0.5%）。3批樣品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果見表2。

3 討論

洛索洛芬鈉是第一個(gè)丙酸類前體型非甾體抗炎藥，由日本三共株式會(huì)社首研，是目前日本銷量第一的非甾體抗炎藥。其經(jīng)消化道吸收后迅速轉(zhuǎn)化為trans-OH活性代謝物，通過(guò)抑制PG的生物合成而發(fā)揮作用，可明顯減少胃腸道不良反應(yīng)，且其鎮(zhèn)痛效果比酮洛芬、吲哚美辛、萘普生強(qiáng)10～20倍。因此，該藥具有較大的市場(chǎng)潛力。除了片劑，國(guó)內(nèi)還曾見該藥其他劑型如凝膠劑、貼劑等的研究。當(dāng)前已有關(guān)于該藥含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定、溶出度測(cè)定、生物利用度研究等方面的文獻(xiàn)報(bào)道。《日本藥局方》（第15版）[2-3]收錄了洛索洛芬鈉原料藥和洛索洛芬鈉片，采用液相色譜法（LC）對(duì)洛索洛芬鈉的含量進(jìn)行測(cè)定，采用薄層色譜法（TLC）對(duì)洛索洛芬鈉的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。此次筆者對(duì)自制的洛索洛芬鈉片的含量及有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定進(jìn)行了深入研究和改進(jìn)，意在更全面地控制該制劑的質(zhì)量。

以往文獻(xiàn)報(bào)道的測(cè)定洛索洛芬鈉含量的方法主要有紫外分光光度法[4]、HPLC法[5-6]和LC-質(zhì)譜聯(lián)用法（LCMS）[7]，測(cè)定洛索洛芬鈉有關(guān)物質(zhì)的方法主要有RPHPLC法[8]。筆者在參考《日本藥局方》（第15版）[主要色譜條件：流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（60∶40∶0.1∶0.1，V/V/V/V），波長(zhǎng)222 nm，柱溫40℃]和原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[9]的基礎(chǔ)上，改進(jìn)了測(cè)定洛索洛芬鈉含量及有關(guān)物質(zhì)的RP-HPLC法。其中，經(jīng)200～400 nm全波長(zhǎng)范圍內(nèi)的紫外掃描考察，將測(cè)定波長(zhǎng)調(diào)整為221 nm；同時(shí)，考慮到洛索洛芬鈉呈弱堿性，流動(dòng)相pH值和三乙胺濃度對(duì)其峰形和保留時(shí)間影響較大，通過(guò)對(duì)流動(dòng)相不同組成、不同pH值、不同三乙胺濃度進(jìn)行篩查，發(fā)現(xiàn)采用乙腈-0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0±0.1）（62∶38，V/V）作為流動(dòng)相時(shí)，洛索洛芬鈉的保留時(shí)間合適，且與其他相鄰雜質(zhì)峰的分離度符合要求，故確定將該流動(dòng)相用于其含量及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定。

綜上所述，本方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速，適用于洛索洛芬鈉片的質(zhì)量控制。

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（編輯：周 箐）

Determination of Contentsand Related Substances in Loxoprofen Sodium Tabletsby RP-HPLC

YUAN Haoyu，WANG Peng，YIHong，YU Yu（No.416 Hospital of Nuclear Industry，Chengdu 610051）

OBJECTIVE：To improve the determ ination method for the contents of main components and related substances in Loxoprofen sodium tablets.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The determ ination was performed on Inspire C18column w ith mobile phase consisted of acetonitile-0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate（containing 0.2%triethylamine，phosphoric acid adjusted to 3.0±0.1，62∶38，V/V）at the flow rate of 1.0 m L/m in.The column temperature was 40℃，and the detection wavelength was set at 221 nm.The sample size was 20μL.RESULTS：The peak of loxoprofen sodium was well separated w ith the peak of its related substances（R＞1.5）.The linear range of loxoprofen sodium ranged 30.0-90.0μg/m L（r＝0.999 8）.The detection lim it of loxoprofen was 0.3μg/m L.RSDs of precision，stability and repeatability tests were＜1.0%.The average recovery rates ranged 99.00%-99.87%（RSD＝0.33%，n＝9）.CONCLUSIONS：Thismethod is accurate，simple，rapid and suitable for the quality control of Loxoprofen sodium tablets.

RP-HPLC；Loxoprofen sodium tablets；Content；Related substances

R927

A

1001-0408（2017）15-2127-04

2016-05-31

2017-04-06）

＊副主任藥師，碩士。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。E-mail：yhy416@ 126.com

#通信作者：副主任藥師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。E-mail：yihon g0517@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.15.31