成鵝大腸桿菌病原的分離與鑒定

程亞

摘 要：目的對一群疑似大腸桿菌病的成年鵝進行病原的分離與鑒定，為該病的防治提供依據。方法挑取疑似死于大腸桿菌病成年鵝的心血、肝臟，接種于麥康凱瓊脂培養基，37℃下培養24h，制備抹片、革蘭氏染色鏡檢、生化試驗及藥敏試驗。結果在上述試驗中分離到1株革蘭氏陰性小桿菌，該菌的生化試驗結果與大腸桿菌一致。選擇藥敏試驗中敏感的藥物環丙沙星給病成鵝注射，連用3天，得到了有效治療，病鵝逐步恢復健康。結論該群病死鵝的發病原因為致病性大腸桿菌感染。

關鍵詞：大腸桿菌；分離；鑒定；生化試驗；藥敏試驗

2016年12月，安徽休寧某養殖戶飼養的1000只140日齡成鵝相繼出現精神沉郁、采食量下降、排白色稀糞、消瘦等癥狀，發病幾天后出現死亡。剖檢病死鵝，觀察到心包膜增厚，心包內充滿大量淡黃色液體，肝臟表面覆蓋有淺黃色的纖維性滲出物，腸道出血。本試驗主要是為了查明該群鵝的發病原因，特對其進行細菌的分離鑒定，并通過藥敏試驗確定敏感藥物，為該群病鵝的防治提供依據。

一、材料與方法

1.材料

（1）病料來源。安徽休寧某養殖戶送檢的疑似感染大腸桿菌病死成年鵝3只。

（2）培養基。蔗糖、乳糖、麥芽糖、葡萄糖半固體發酵管，蛋白胨水，葡萄糖蛋白胨水，麥康凱瓊脂培養基，營養瓊脂培養基，伊紅美藍瓊脂培養基。

2.方法

（1）細菌的分離培養。無菌采取病死鵝的心血、肝臟，用接種環劃線接種于麥康凱瓊脂培養基中，37℃下培養24h。然后挑取單個紅色的典型菌落接種到伊紅美藍瓊脂平板上，37℃培養24h，進行革蘭氏染色鏡檢，最后從伊紅美藍瓊脂平板上挑取紫黑色帶金屬光澤的單個典型菌落，接種到營養瓊脂平板上，37℃培養24 h，獲得純培養物，置4℃冰箱備用。

（2）細菌抹片制備及革蘭氏染色鏡檢。從麥康凱瓊脂培養基上挑取單個粉紅色的菌落，制備抹片、革蘭氏染色鏡檢。

（3）細菌的生化試驗。主要進行了糖類分解試驗、吲哚試驗、甲基紅（MR）試驗及VP試驗

（4）細菌藥物敏感試驗。K-B紙片擴散法：將被檢細菌用滅菌的涂布棒均勻涂布于營養瓊脂平板上，用無菌鑷子將各種抗菌藥物圓紙片，分別貼于培養基表面，37℃培養18～24h，根據藥物紙片周圍有無抑菌圈及其直徑大小，來判斷該菌對各種藥物的敏感程度。

二、結果與分析

1.病死鵝的病理剖檢變化

心包膜增厚，心包內充滿大量淡黃色液體，肝臟表面覆蓋有淺黃色的纖維性滲出物，腸道出血。

2.細菌的分離培養結果

從上述病死鵝的心血、肝臟中分離到1株細菌，該菌在營養瓊脂平板上37 ℃培養24 h后，形成中等大小，圓形微凸起，表面光滑濕潤，淺灰白色半透明菌落；在麥康凱培養基上形成中等大小，表面光滑濕潤的粉紅色菌落；在伊紅美藍瓊脂平板上形成深紫黑色、光滑、濕潤、帶有金屬光澤的圓形菌落。

3.革蘭氏染色鏡檢結果

該分離菌經革蘭氏染色，在油鏡下均可見散在的紅色、中等大小、兩端鈍圓的無芽胞短直桿菌。多單個散在，個別成雙排列，革蘭氏陰性，符合大腸桿菌的形態特征。

4.細菌的生化試驗結果

該菌能發酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖產酸產氣，MR試驗呈陽性，VP試驗呈陰性， 吲哚試驗呈陽性。

5.體外藥物敏感試驗結果

見表1。

由表1可知：該細菌的耐藥譜較廣。

三、討論與小結

1.該株大腸桿菌的確定及特性分析

通過對送檢的疑似大腸桿菌病死鵝進行細菌的分離培養及生化試驗鑒定，其生化試驗結果與大腸桿菌一致，因此，引起成鵝死亡的病原為致病性大腸桿菌。

2.該株大腸桿菌的耐藥性分析

從藥敏試驗結果可看出：該株大腸桿菌對紅霉素、頭孢拉定和妥布霉素等10多種抗菌藥物均不敏感；對先鋒噻肟、頭孢哌酮、環丙沙星等8種抗菌藥物敏感。建議養殖戶使用環丙沙星作為治療該病首選藥進行治療。

大腸桿菌耐藥性不僅僅是反復用藥的結果，而且是大腸桿菌在不利環境中增強生存能力的自身防衛系統的重要組成部分，這也是大腸桿菌容易產生耐藥性的本身原因。大腸桿菌耐藥性由藥物誘發作用所引起：一是有病亂投藥。二是長期濫用藥，這是誘發大腸桿菌產生耐藥性的主要原因。由于抗生素的大量使用，細菌的耐藥性越來越強，耐藥菌株出現的也越來越多，不少耐藥菌株不僅能耐受 1 種或少數幾種抗生素，而且能夠耐受多種抗生素，由此而造成的危害十分嚴重。三是小劑量用藥，不僅未達到殺菌的目的，反而逐步誘發。四是聯合用藥，這也是加快大腸桿菌產生耐藥性的另一個原因[11]。

因此，科學合理地用藥是減少細菌產生耐藥性的最有效的方法。所以，應盡量提高對疾病診斷的準確率，減少不必要的用藥，并嚴格用藥劑量和療程。

3.該病的治療和綜合防治

該鵝群中一旦發生本病應立即隔離治療。本病的治療應選擇在疾病發生的早期，因大腸桿菌病發生的后期使用抗菌素往往療效不理想。該成年鵝群飲水時，上午水中添加環丙沙星粉，下午水中添加電解多維和葡萄糖粉以增加機體抵抗力，連用3-5天。同時保持鵝舍清潔干凈，糞便及時清除，堆積發酵進行無害化處理；鵝舍及活動場地每天用消毒藥進行噴霧消毒1次，連用3天。經此治療方案處理后，除了少數成鵝由于病程時間較長體況較弱治療無效死亡外，其他病鵝都得到了有效治療，逐步恢復健康。

4.結論

從上述試驗結果可知：該群病死鵝的病原為致病性大腸桿菌，使用藥敏試驗中篩選出的敏感藥物環丙沙星，連用3天，病鵝都得到了有效治療，逐步恢復健康。