酒精性肝損傷模型大鼠肝功能動(dòng)態(tài)變化及烏藥的干預(yù)作用

譚明明 王軍偉 丁慧珍 季夢漂 樓招歡

酒精性肝損傷模型大鼠肝功能動(dòng)態(tài)變化及烏藥的干預(yù)作用

譚明明1王軍偉1丁慧珍1季夢漂1樓招歡2

目的觀察酒精性肝損傷模型大鼠肝功能動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及烏藥對(duì)酒精性肝損傷的干預(yù)作用。方法將33只SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組和烏藥干預(yù)組，各11只，各組大鼠分別于實(shí)驗(yàn)第14、21、33天眼眶靜脈叢取血，測定血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平。結(jié)果模型組大鼠14、21、33天的ALT水平分別為（70.8±8.5）U/L、（74.8±10.0）U/L、（86.5±19.3）U/L；AST水平變化不顯著，分別為（185.9±24.5）U/L、（175.1±15.5）U/L和（177.9±42.7）U/ L。模型組21、33天的ALT、AST與空白對(duì)照組[ALT：（58.4±13.0）U/L、（50.1±6.1）U/L；AST：（175.1± 15.5）U/L、（137.7±20.7）U/L]比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）；與模型組比較，烏藥干預(yù)組第21、33天ALT分別為（62.6±9.6）U/L和（65.8±12.6）U/L，AST分別為（142.6±25.0）U/L和（138.7± 18.2）U/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論酒精性肝損傷模型大鼠肝損傷嚴(yán)重程度隨著造模時(shí)間延長逐漸加重；烏藥對(duì)酒精引起的模型大鼠肝損傷有保護(hù)作用。

大鼠；酒精性；肝損傷；烏藥

酒精是導(dǎo)致肝損傷的主要原因之一，建立理想的動(dòng)物模型來研究酒精性肝病的發(fā)病機(jī)制及藥物防治方法很有必要。目前國內(nèi)外應(yīng)用大鼠建立急、慢性酒精性肝損傷模型來觀察各類藥物的療效，但由于使用實(shí)驗(yàn)大鼠的年齡、體質(zhì)量、給予的酒精劑量、頻率不同，以及采血的部位和時(shí)點(diǎn)不一致，導(dǎo)致不同研究發(fā)表的結(jié)果差異較大。為探索酒精性肝損傷大鼠肝功能變化規(guī)律，指導(dǎo)今后更好地研究保肝藥物療效，本文對(duì)實(shí)驗(yàn)中不同時(shí)點(diǎn)肝酶進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，同時(shí)觀察烏藥對(duì)不同時(shí)點(diǎn)酒精性肝損傷的干預(yù)作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物健康雄性SD大鼠，7周齡，體質(zhì)量（180～220）g，33只，購自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：0016074，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（浙）2014-0001。

1.2 藥物及儀器烏藥由浙江紅石梁集團(tuán)天臺(tái)山烏藥生物工程有限公司提供，參考文獻(xiàn)[1]方法得醇提取物。紅星二鍋頭酒（酒精度52%），2.0L/瓶，北京紅星股份有限公司。與雙蒸水按一定體積比例稀釋，酒精體積分?jǐn)?shù)為50%。TBA-40FR全自動(dòng)生化儀，日本東芝醫(yī)療系統(tǒng)株式會(huì)社。ALT試劑盒（批號(hào)20140611），AST試劑盒（批號(hào)20140709），寧波美康生物科技股份有限公司提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組將SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、烏藥干預(yù)組，每組11只。環(huán)境溫度18～20℃，濕度70%左右。所有大鼠均給予基礎(chǔ)飼料，自由采食飲水。

2.2 造模給藥參考文獻(xiàn)[2]進(jìn)行造模。空白對(duì)照組大鼠以等體積的蒸餾水灌胃，其余兩組大鼠均給予濃度為50%（V/V）的白酒灌胃，每天1次，灌胃容積1.2mL/100g，連續(xù)33天；自造模第l天起，烏藥干預(yù)組灌胃給予烏藥醇提物4g/kg，每天1次，灌胃容積為1mL/100g體質(zhì)量，連續(xù)33天。

2.3 檢測指標(biāo)各組大鼠在第14、21天及末次給藥并禁食12h后眼眶靜脈叢取血，測定血清血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬門氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartatea minotransferase，AST）水平。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS16軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s） 表示，采用單因素方差分析，兩組間比較方差齊性用LSD方法檢驗(yàn)，方差不齊用Dunnett檢驗(yàn)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組大鼠血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）水平比較空白對(duì)照組大鼠在14、21及33天ALT水平呈逐漸下降趨勢；模型組大鼠14、21及33天ALT水平呈逐漸上升趨勢；與空白對(duì)照組比較，造模21、33天后，模型組大鼠ALT活性顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，給藥第21、33天，烏藥干預(yù)組大鼠血清ALT水平明顯降低（P＜0.05）。見表1。

表1 各組酒精性肝損傷大鼠血清ALT水平比較（U/L，x±s）

3.2 各組大鼠天冬門氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平比較與空白對(duì)照組大鼠比較，造模21、33天后，模型組大鼠AST水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，給藥第21、33天，烏藥干預(yù)組大鼠血清ALT水平明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）。見表2。

表2 各組酒精性肝損傷大鼠血清AST水平比較（U/L，x±s）

4 討論

ALT主要存在于肝細(xì)胞漿中，AST存在于肝細(xì)胞漿和線粒體內(nèi)。正常時(shí)ALT和AST主要存在于細(xì)胞內(nèi)，而血清ALT、AST水平很低。當(dāng)肝細(xì)胞受到損傷后，細(xì)胞變性、壞死，細(xì)胞膜的通透性增加或細(xì)胞膜破碎，肝細(xì)胞ALT和AST就會(huì)被釋放到血液中，使血清ALT、AST水平增加。任何原因引起的肝細(xì)胞損害均可引起血清ALT、AST水平升高，ALT、AST水平是反映肝細(xì)胞損傷最敏感指標(biāo)之一[3]。

本研究通過灌胃給予濃度為50%（v/v）的白酒，每日1次，灌胃容積1.2mL/100g，連續(xù)33天，與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠ALT、AST水平逐漸升高，提示飲酒時(shí)間越久，肝損傷越嚴(yán)重。由于本課題組曾在既往預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，按照同樣的劑量造模，延長觀察時(shí)間將有不少大鼠發(fā)生死亡，存活大鼠雖然肝臟病理損害仍在加重，但血清轉(zhuǎn)氨酶水平反而下降，故將本研究的終點(diǎn)定在33天，33天為肝損傷及藥物保護(hù)作用觀察最為理想的時(shí)點(diǎn)。

烏藥化學(xué)成分復(fù)雜，含豐富的呋喃倍半萜及其內(nèi)酯、黃酮、揮發(fā)油、異喹啉生物堿等成分，具有抗病毒、抑菌、抗腫瘤、調(diào)節(jié)消化、興奮心肌、改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能、抗炎鎮(zhèn)痛、防治糖尿病腎病、調(diào)節(jié)凝血功能等藥理作用。文獻(xiàn)[4]報(bào)道，該藥有降低轉(zhuǎn)氨酶的作用。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)烏藥醇提物干預(yù)后，造模21天及33天模型大鼠的ALT及AST水平均有顯著下降，提示烏藥對(duì)模型大鼠因酒精引起的肝損傷，有一定的保護(hù)作用。

［1］Wang JW，Chen XY，Hu PY，et al.Effects of linderae radix extracts on a rat model of alcoholic liver injury［J］.Experimental and Therapeutic Medicine，2016，11（6）：2185-2192.

［2］趙初環(huán)，盧中秋，李惠萍，等.大鼠酒精性肝病模型的建立［J］.浙江臨床醫(yī)學(xué)，2007，9（4）：435-436.

［3］黃俊杰，王彩冰，黃麗娟，等.bFGF對(duì)慢性酒精中毒大鼠血清GPT、GOT活性的影響［J］.中國當(dāng)代醫(yī)藥，2010，17（27）：7-8.

［4］譚明明，張泓，王軍偉.烏藥對(duì)急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制初探［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，50（12）：1773-1780.

（收稿：2016-11-19修回：2016-12-10）

Dynamic Changes of Liver Function in Rat Alcoholic Liver Disease and the Intervention of Combined Spicebush Root in the Changes

TAN Mingming1,WANG Junwei1,DING Huizhen1,JI Mengpiao1,LOU Zhaohuan2.
1 Department of Emergency Medicine,Tiantai People's Hospital,Tiantai(317200),China;2 Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou(310053),China

ObjectiveTo observe the changes of liver function of rats with alcoholic liver disease and the intervention effect of combined spicebush root on the changes.MethodsThirty-three SD rats were randomly divided into three groups（n=11）:control group,model group,and treatment group.Except for control group,the rat model of alcoholic liver disease was established.On experimental day 14,21,and 33 the blood samples were drawn from rats＇orbital vein to detect alanine aminotransferase（ALT）and aspartate transaminase（AST）for evaluation of liver function.ResultsIn model group,ALT on day 14,21,and 33 were 70.8±8.5U/L,74.8±10.0U/L,86.5±19.3U/L, respectively,and AST on day 14,21,and 33 remained fast stable:185.9±24.5U/L,175.1±15.5U/L,and 177.9± 42.7U/L.The ALT and AST on day 21 and 33 in model group were significantly higher than those in control group（ALT:58.4±13.0U/L and 50.1±6.1U/L;AST:175.1±15.5U/L and 137.7±20.7U/L;P＜0.01 or P＜0.05）.The ALT and AST on day 21 and 33 in treatment group（ALT:62.6±9.6U/L and 65.8±12.6U/L;AST:142.6±25.0U/L and 138.7±18.2U/L）were significantly decreased compared with model group（P＜0.01 or P＜0.05）.ConclusionThe severity of live dysfunction increases with the days of molding and combined spicebush root can reverse the dysfunction in certain degree.

rats;alcoholic;liver injury;combined spicebush root

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生平臺(tái)計(jì)劃（No.2015DTA021）；國家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目（No.81503328）；浙江省科技廳公益性技術(shù)應(yīng)用研究計(jì)劃（No.2016C33184）；浙江省臺(tái)州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.2014A33339）。

1浙江省天臺(tái)縣人民醫(yī)院急診醫(yī)學(xué)科（天臺(tái)317200）；2浙江中醫(yī)藥大學(xué)（杭州310053）

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