春蘭“龍字”的離體快繁技術研究

馮兆光，李小東，徐 兵

(青州市花卉高科技博覽園管理委員會，山東 青州 262500)

春蘭(Cymbidium goeringii)是國蘭種類最豐富多彩的一個種，也是栽培過程中繁殖最困難的一個種之一，其香味最佳，但繁殖系數很低，最多1年2～3倍，通過組織培養方法能快速滿足生產需要，在短時間內提供大量種苗。目前蘭花組織培養在如大花蕙蘭、蝴蝶蘭、雜交蘭等工廠化生產技術已經非常成熟，但國蘭由于價格昂貴、易褐化、再生過程難度高，難以實現工廠化快繁[1]。本研究以春蘭荷型水仙的典型代表“龍字”為研究材料，研究國蘭通過組織培養獲得再生苗的方法，以期為實現國蘭的工廠化生產提供參考。

1 材料與方法

1.1 取材及消毒

供試材料為春蘭“龍字”的側芽，取材前先室內養護3～4個月，澆水時避免澆到新芽上。待芽長到3～4 cm時取下，用洗衣粉水輕輕洗凈表面，在超凈工作臺內用75%酒精浸泡30 s，再用0.1%的升汞浸泡8～10 min，然后用無菌水洗5次，每次5 min，剝掉外層葉片后，接種到誘導培養基中。

1.2 供試培養基及培養條件

（1）誘導培養基:

1#MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+AC0.2g/L；

2#MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L。

（2）龍根增殖培養基:

3#MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L；

4#1/2 MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L；

5#MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L；

6#1/2 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L。

（3）芽分化培養基:

分化培養基篩選采用3因素4水平的L16(43)正交設計（表1），每個處理接種4瓶，每瓶接種10塊龍根，重復3次。

表1 供試因素及水平

（4）生根培養基:

23#1/2 MS+NAA0.5mg/L+AC0.5g/L；24#1/2MS+NA A0.5mg/L+AC1g/L+香蕉泥 50g/L；25#B5+BA 2 mg/L+NAA 0.3 mg/L+AC 1 g/L+香蕉泥50 g/L。

上述培養基pH 5.8，瓊脂6 g/L，蔗糖30 g/L，于121℃殺菌 20 min。

（5）培養條件:培養溫度 26±1℃，光照 14 h/d，光源由LED燈提供，光照強度1500 Lx。

2 結果與分析

2.1 龍根誘導培養

誘導培養20 d后，部分芽體仍無生長痕跡，一段時間后逐漸褐化死亡，30 d后少數芽體逐漸變綠頂端或周圍逐漸生長出較細的龍根，說明誘導成功。誘導培養基中需添加少許活性炭能有效防止褐化，添加BA和NAA激素濃度越高龍根生長量越多。誘導率最高的培養基是2#MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L，產生龍根多，生長快（表2）。

表2 叢生芽誘導結果

2.2 龍根增殖培養

表3 芽增殖培養結果

將誘導獲得的根狀莖轉接到增殖培養基，60 d轉接一次，最高增殖倍數為6倍。無機鹽含量的增加和激素濃度的增加均能提高龍根增殖倍數，提高BA濃度能使龍根分叉較多從而提高增殖倍數，提高NAA濃度能使龍根伸長、變粗，BA/NAA比值較小的情況下龍根細長，所生長的芽不壯，對比之下最適宜龍根增殖的培養基為4#1/2MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC 0.5 g/L（表3）。

2.3 龍根分化研究

選取2～3 cm粗壯的龍根，接種到分化培養基中，每瓶接種10塊龍根。暗培養7 d后，正常光照培養。正常情況20 d后形成粗壯的芽點，40 d左右形成芽，120 d左右芽苗可生長到5 cm以上，BA/NAA比例越大分化越快，單用BA或NAA時分化較慢，分化芽數量少，添加AC可減輕褐化，但會降低芽苗分化率，并且苗瘦弱。綜合考慮芽誘導率和苗生長情況確定18#培養基最佳即MS（NH4NO3 0.4 g/L）+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L，龍根幾乎不增殖，苗壯，直立生長（表4）。

2.4 生根培養

選取5 cm以上小苗接種到生根培養基中，20 d后開始生根，24#培養基生根最快，但30 d后23#、24#培養基中部分小苗停止生長，從頂端或根部生長龍根。60 d后生根率最高的是25#培養基，生長側芽，不存在龍根生長現象。經篩選最佳生根培養基為25#B5+BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+AC 1.0 g/L+香蕉泥50 g/L。

表4 芽分化培養結果

表5 生根培養結果

2.5 組培苗移栽

組培苗生長到90 d以上、苗高10 cm以上時及時練苗，在散射光下培養20 d左右后，此時可開蓋移栽。洗凈根部殘留的培養基，用濕潤的苔蘚包裹移栽到穴盤中。把握好干透澆透的澆水原則，20 d內光照控制在5000 lx以下，成活率90%以上。

3 討論

近年來，春蘭由于花香、清雅、價格合適，比較受消費者歡迎，國蘭組培成為花卉種苗公司的發展目標[2]，尤其是具有代表性的春蘭品種:龍字、大富貴、綠云、宋梅等頗受歡迎。由于春蘭組培過程中易褐化、再生難度大，因此盡快獲得成熟的組培技術成為研究重點。大量生產中可以借鑒洋蘭組培技術添加防褐化的VC、pvp等抗氧化劑，添加有機物質如蘋果汁、椰汁中增加分化出芽率[3]。

與其他研究者使用的生根培養基不同，本研究使用BA與NAA混合，達到了使苗側芽生長同時生根的雙重目的。

［1］李洪林，楊波.春蘭根狀莖離體培養與快速繁殖（簡報）.亞熱帶植物科學［J］，2012，41（4）:67-68.

［2］牛田，張林，王厚新等.春蘭‘金荷鼎’雜交后代離體快繁的研究.農學學報［J］，2013（3）:44-46.

［3］孫芳，李承秀，張林等.春蘭名品雜交后代快繁與分化研究.中國農學通報［J］，2012，28（10）:189-193.