分光光度法測定板藍根顆粒中水楊酸的含量

李夢瑤，申婧翔

（長治學院 化學系，山西 長治 046011）

分光光度法測定板藍根顆粒中水楊酸的含量

李夢瑤，申婧翔

（長治學院 化學系，山西 長治 046011）

采用可見分光光度法，在pH=2.4與硫酸鐵銨做顯色劑的條件下，水楊酸與Fe3+生成的紫紅色絡合物在λ=526 nm處有最大吸收，并對實驗條件進行優化。標準曲線法得線性方程為：A=0.0052c+0.0312，R2=0.9927，吸光度與濃度呈良好的線性關系。板藍根中水楊酸的含量為1.36×10-5g/mL，平均回收率為92.18%。

水楊酸；板藍根；分光光度法

1 引言

板藍根作為中國傳統中藥，具有清熱、解毒、涼血、利咽之功效，常用于治療細菌感染性疾病和病毒性疾病，尤其在抗病毒方面療效確切，是清熱解毒類中藥的代表藥物。研究表明，板藍根的有機酸成分能夠清除體內的過氧自由基和內毒素，從而避免了發燒、發熱現象，保護機體不受高燒高熱的傷害。水楊酸是板藍根有機酸的主要成分之一，目前已經從板藍根中得到分離和確認[1]。

目前對于游離水楊酸的測定，常用的方法有高效液相色譜法[2-3]、電化學方法[4]、紫外分光光度法[5-6]等。但對于可見分光光度法的研究較少，僅限于標準曲線的繪制。文章采用了可見分光光度法，用硫酸鐵銨溶液作顯色劑來測定游離水楊酸的含量。該方法不僅可以消除濕度、溫度等環境對測定結果的影響，而且具有快捷、準確、重現性好等優點[7]。

2 實驗部分

U-2910型紫外分光光度計，日立；PHS-3BW型pH計，上海般特儀器有限公司；旋轉蒸發儀，艾卡（廣州）儀器有限公司。

板藍根顆粒，廣州白云山和記黃埔中藥有限公司；濃鹽酸（分析純），永飛化學試劑有限公司；濃硫酸（分析純），天津市凱通化學試劑有限公司；無水乙醇（分析純），天津市凱通化學試劑有限公司；冰乙酸（分析純），天津市大茂化學試劑廠；水楊酸（分析純），天津市大茂化學試劑廠；硫酸鐵銨（分析純），天津市凱通化學試劑有限公司；氫氧化鈉（分析純），天津市凱通化學試劑有限公司；酒石酸（分析純），天津市大茂化學試劑廠。

3 結果與討論

3.1 實驗條件的優化

3.1.1 最大吸收波長的確定

分別準確量取0.01 mol/L的水楊酸標準溶液1.50 mL和0.01 mol/L的硫酸鐵銨標準溶液3.75 mL于50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，以硫酸鐵銨標準溶液作為參比液，測定其在400～800 nm的吸光度，得吸收曲線，如圖1所示。由圖1可知：該絡合物的最大吸收波長為526nm。

3.1.2 pH條件的確定

取0.01 mol/L的水楊酸標準溶液1.50 mL、0.01 mol/L的硫酸鐵銨標準溶液3.75 mL于50 mL容量瓶中，并用配制的pH值分別為1.5、2.0、2.4、3.2、3.6、4.0、4.5的CH2COOH-CH2COONa緩沖溶液稀釋到刻度，以硫酸鐵銨溶液作為參比液，測其吸光度，并做出吸光度隨pH變化的曲線A-pH，如圖2所示。

絡合物的組成隨pH值的變化較大，尤其是當pH值過大時，稀硫酸鐵銨溶液會遭到嚴重的水解，因此會影響到吸光度的測定。由圖2可知：當pH值在2.0～2.4時吸光度較大，并且在pH是2.4時達到最大值，為最佳pH測定值。

圖1 水楊酸鐵絡合物的吸收曲線

圖2 A-pH曲線

3.1.3 絡合物配比的確定

采用了摩爾系列法確定顯色劑用量從而測定絡合物的絡合比。取0.01mol/L的水楊酸溶液（SA）和0.01mol/L的硫酸鐵銨溶液共6 mL，分別按體積比為 0.20、0.33、0.50、0.71、1.00、1.40、1.60、2.0 0、3.00、5.00量取，稀釋且定容至50 mL容量瓶中，用硫酸鐵銨溶液作為參比液，測定其吸光度。繪制A～[n（SA）：n（NH4Fe（SO4）2）]曲線，如圖3所示。

圖3 吸光度隨摩爾比變化曲線

由圖3可知：當n（SA）：n（NH4Fe（SO4）2）是2時，該體系會有最大吸光度，其絡合物的穩定絡合比為2；當n（SA）：n（NH4Fe（SO4）2）小于2時，A隨著物質的量比的增大相應的增大，由朗伯比爾定律可以知道，體系中的絡合物的濃度在這個過程中逐漸增大；當n（SA）：n（NH4Fe（SO4）2）大于2時，吸光度隨之減小，也就是絡合物的濃度在減少。所以取其絡合比為2。

3.1.3 顯色時間的確定

取0.01 mol/L的稀硫酸鐵銨標準溶液3.75 mL、0.01 mol/LSA標準溶液1.50 mL定容于50 mL容量瓶中，放置不同的時間后測定其吸光度隨時間的變化關系，如圖4所示。

圖4 A-t曲線

由圖4可知：當放置時間在5～60 min內吸光度比較穩定，但在測定過程中，40 min后會發現溶液開始稍微顯渾濁，這可能是稀硫酸鐵銨水解所導致。由此可知，該絡合反應最佳顯色時間為5min。

3.2 標準曲線的繪制

精確量取0.01 mol/L的3.75 mL稀硫酸鐵標準溶液和不同體積的水楊酸（SA）標準溶液于50 mL容量瓶中，用pH=2.4的緩沖溶液將其定容配制成不同濃度的SA-NH4Fe（SO4）2溶液。以稀硫酸鐵銨溶液作參比液，分別測定每組溶液的吸光度，并繪制標準曲線。如圖5所示。線性方程為：A=0.0052c+0.0312，R2=0.9927，線性關系良好。

圖5 A-c標準曲線

3.3 精密度試驗

精確量取0.01vmol/L水楊酸標準溶液1.00 mL、0.05%酒石酸溶液1.00 mL和0.01 mol/L的硫酸鐵銨標準溶液1.00 mL于50 mL容量瓶中，然后用pH為2.4的緩沖溶液稀釋至刻度搖勻，每隔5 s測其吸光度值，共測定9次，所得數據如表1所示，求出其相對標準偏差RSD為0.59%。由RSD可以知道精密度良好。

表1 精密度測定數據

3.4 樣品測定

準確稱取板藍根粗粉4.0203 g，用50 mL70%乙醇超聲提取兩次，每次30 min，將兩次的提取液合并，并減壓濃縮到稀膏狀，再用70%乙醇分次洗滌后定容到50 mL容量瓶中，用0.45 um微孔濾膜濾過，得板藍根待測液。量取10.00 mL于50 mL容量瓶中，加入3.75 mL0.01 mol/L的硫酸鐵銨，用pH為2.4的緩沖溶液稀釋至刻度搖勻并測其吸光度。所得數據如表2所示。

由表2可知：板藍根待測液中水楊酸含量為1.36×10-5g/mL。

表2 水楊酸含量測定結果

3.5 回收率實驗

在4個50 mL的容量瓶中各自加入板藍根待測液2.00 mL，并標序，按表3加入0.01 mol/L水楊酸標準溶液（SA），然后加入0.01 mol/L的稀硫酸鐵銨標準溶液3.75mL，稀釋至刻度并測吸光度。測定結果如表3所示。由表3可知：平均回收率為92.18%，RSD為7.92%。

表3 回收率測定結果

4 結論

結果表明，測定該絡合物的吸光度的最佳條件為：吸收波長為526 nm，pH值為2.4，顯色時間為5 min，絡合比為2。在最佳條件下測系列水楊酸標準溶液的吸光度，得標準曲線方程為 A=0.0052c+0.0312，R2=0.9927。精密度測定中，RSD為0.59%。回收率測定中，平均回收率為92.18%，RSD為7.92%。求得板藍根中水楊酸含量為1.36×10-5g/mL。該方法不僅快捷和準確而且重現性好，可獲得滿意結果。

［1］施峰，安益強，賈曉斌，等.不同產地板藍根藥材中水楊酸量的比較［J］.中草藥，2009，40（2）：271-275.

［2］年四輝，李藍，劉麗敏，等.HPLC法測定板藍根及其制劑中水楊酸苯甲酸的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（21）：92-95.

［3］陳新善，孔愛英.HPLC法測定阿司匹林腸溶片中游離水楊酸含量［J］.中醫藥事，2003，17（8）：505-507.

［4］羅紅梅，廖鈁，譚寶玉，等.水楊酸在多壁碳納米管修飾電極上的電化學行為及其測定［J］.分析科學學報，2009，29（6）：665-668.

［5］李娟.紫外分光光度法測定ASP腸溶片中游離水楊酸含量［J］.現代醫藥衛生，2010，26（15）：2267-2268.

［6］陳理，栗家言，胡紅.紫外分光光度法測定水楊酸滴耳液中水楊酸的含量［J］.現代醫藥衛生，2008，24（6）：916-917.

［7］張金磊.稀硫酸鐵銨分光光度法測定水楊酸的含量［J］.廣州化工，2011，39（22）：70-72．

（責任編輯 王璟琳）

O655

A

1673-2014（2017）02-0014-03

2016—12—10

李夢瑤（1989— ），女，山西長治人，助理實驗師，主要從事碳量子點及熒光小分子探針性能研究。