碼蛋方式的改變對X期雞胚體外發育的影響

索南才仁

摘要：在種蛋大頭開1.5 cm × 1.0 cm橢圓形口的情況下，就翻蛋和碼蛋方式對X期雞胚體外發育的影響進行了研究。從試驗結果來看，①9日齡的存活率兩組分別達73%和80%，表明0日齡種蛋在大頭開孔后，0～8日齡小頭向上翻蛋進行孵化是較為合適的。8日齡時碼蛋方式的轉變，即小頭向上轉變為大頭向上，使雞胚出現快速死亡，12日齡時兩組雞胚全部死亡。②對比6～9日齡的存活率，大頭向上碼蛋組從6日齡到9日齡存活率下降了7%，而橫放碼蛋組的存活率沒有下降，因此，在8日齡碼蛋方式發生改變后，兩組存活率的下降并不明顯（P>0.05），但至12日齡時兩組雞胚均全部死亡。試驗結果表明，8日齡時，碼蛋方式由小頭向上轉變為大頭向上或橫放會加快雞胚的死亡，尤其是轉變為大頭向上。

關鍵詞：翻蛋次數；置蛋方式；孵化率

中圖分類號：S831 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2017）05-0010-02

禽類胚胎是發育生物學研究的良好實驗材料，利用體外培養技術可以滿足對各個發育階段的胚胎進行操作的需要，而且便于觀察。然而雞胚體外培養的孵化率并不高，特別是剛產下的X期的胚胎。郝志明等[1]采用抽蛋清的方法對X期雞胚體外培養的影響因素進行了研究，發現抽取1 mL蛋清后，3日齡雞胚的孵化率達到81.3%，而X期雞胚的孵化率僅為31.3%。為了進一步探究造成X期雞胚體外培養孵化率下降的主要原因，本試驗就翻蛋和碼蛋方式對X期雞胚體外培養的影響進行了研究，以期提高X期雞胚體外培養的孵化率，促進雞胚生物工程技術的發展。

1 試驗方法

1.1 試驗設計

試驗一：在雞蛋大頭頂端開1.5 cm×1.0 cm橢圓形口的情況下，翻蛋和碼蛋方式按下述方法進行： 0～8日齡小頭向上翻蛋，8～12日齡大頭向上不翻蛋，12日齡以后大頭向上翻蛋（一組）或大頭向上不翻蛋（二組），以研究12日齡后翻蛋對X期雞胚體外發育的影響。

試驗二：在雞蛋大頭頂端開1.5 cm×1.0 cm橢圓形口的情況下，翻蛋和碼蛋方式按下述方法進行：0～8日齡小頭向上翻蛋，8～12日齡大頭向上（一組）或橫放（二組）不翻蛋，12日齡后大頭向上（一組）或橫放（二組）翻蛋，以研究8日齡后碼蛋方式對X期雞胚體外發育的影響。

1.2 方法

操作全過程在超凈工作臺上進行。試驗前，擦凈超凈工作臺，將所有器械和試劑置于超凈工作臺上，紫外線照射30 min以上進行消毒。用塑料飲料瓶剪切封口蓋，封口蓋的大小較蛋殼開口大2 mm，形狀同蛋殼開口。剪好的封口蓋需置于盛有75%乙醇的平皿中浸泡30 min，并分散置于鋪有硫酸紙的超凈工作臺上，紫外線照射消毒并晾干。種蛋則用酒精棉球擦拭消毒，確保整個蛋殼表面均被擦拭并晾干。用鉛筆在種蛋的大頭畫1.5 cm×1.0 cm橢圓，然后用手術刀片沿所畫線的外沿在蛋殼上刻出劃痕，除去劃痕內的蛋殼和蛋殼膜，切口應盡量平滑，除去蛋殼膜時應用鑷子小心向切口處夾取，不得破壞切口外的蛋殼膜。開口種蛋用預制好的塑料封口蓋蓋好，再用封口膠粘合封閉，確保封閉嚴實，無外漏。封好后開口向下放置20 min，檢查是否有漏出蛋清的現象，如有需進行修補。

按照試驗分組的設計方案，將開過口的種蛋放置于孵化器托盤中。

孵化條件：孵化溫度為37.80 ℃，濕度為60%～65%。出雛溫度為37.00 ℃，濕度為70%～75%。翻蛋為自動翻蛋，每2 h一次，翻蛋角度為±45°。孵化期間，每日早、晚觀察孵化器2次，并記錄孵化器溫度、濕度和翻蛋次數。孵化18 d時落盤，21 d時觀察出雛情況[2]。分別在孵化的第3、6、9、12、15和18天進行照蛋，觀察胚胎的心臟、胎膜、血管、胚體等，以此來判斷雞胚的存活以及胚胎的發育情況。死亡雞胚及時打開，觀察死胚的發育情況。試驗數據用百分數表示，并用t檢驗對組間的差異進行顯著性分析。

2 結果及分析

2.1 12日齡后翻蛋對X期胚胎體外發育的影響

本試驗的目的是想確定12日齡后翻蛋對X期雞胚體外發育有無影響，但從表1來看，12日齡后雞胚已全部死亡，因此試驗設計沒有達到預想的效果。但從9日齡的存活率來看，兩組的存活率分別達73%和80%，表明0日齡種蛋在大頭開1.5 cm×1.0 cm橢圓形孔后，0～8日齡小頭向上翻蛋進行孵化是較為合適的[3]。但8日齡碼蛋方式的轉變，即小頭向上轉變為大頭向上使雞胚出現快速死亡，至12日齡時，兩組雞胚均全部死亡。

2.2 8日齡后碼蛋方式對X期雞胚體外發育的影響

由表2可見，9日齡存活率方面，大頭向上碼蛋組和橫放碼蛋組的存活率分別為73%和93%，兩組之間具有明顯的差異（P<0.05），但從6～9日齡的存活率來看，大頭向上碼蛋組6～9日齡存活率下降了7個百分點，而橫放碼蛋組的存活率沒有下降，因此，在8日齡碼蛋方式發生改變后，兩組存活率的下降并不明顯（P>0.05）。但12日齡時雞胚仍全部死亡[4]。

3 雞胚死亡主要原因分析

研究結果表明，雞蛋開口及抽取蛋清會對雞胚的體外發育產生重要的影響。從本試驗結果可以看出，雞蛋開孔對雞胚的發育有很大影響。通過對死亡雞胚的解剖發現，死亡雞胚常常出現胎膜與蛋殼膜的粘連、胎膜與蛋殼內膜的分離以及雞胚發育遲緩。蛋殼開孔后若翻蛋，可引起胎膜與蛋殼膜的粘連以及胎膜與蛋殼內膜的分離，胎膜與蛋殼膜的粘連可破壞胎膜，引起出血和胚胎的死亡；而胎膜與蛋殼內膜的分離則影響雞胚營養物質的吸收，從而影響雞胚的正常生長發育。若不進行翻蛋，則會影響雞胚的運動、血液循環和生長發育，甚至粘連，引起雞胚死亡。

4 結論

8日齡時，碼蛋方式由小頭向上轉變為大頭向上或橫放會加快雞胚的死亡，尤其轉變為大頭向上時雞胚更易死亡。

參考文獻：

[1] 郝志明，馬文芝，祁茂銅，等.空氣對X期雞胚原殼發育的影響[J].西北農業學報，2005，14（5）：45-48.

[2] 楊 寧.現代養雞生產[M].北京：北京農業大學出版社，1994.125-126.

[3] 郝志明，馬文芝，祁茂銅，等. 雞胚原殼體外培養研究[J].西北農林科技大學學報（自然科學版），2005，33（9）：28-31.

[4] ANDACHT T，HU W，IVARIE R. Rapid and improvement method for windowing eggs accessing the stage Ⅹ chicken embryo[J].Molecular Reproduction and Development，2004，69：31-34.