柑橘橘絡提取物通便作用的實驗研究

王亞雯，辛中豪，蒲玲玲，高蔚娜，石塔拉，韋京豫，鄧致榮，郭長江#

(1軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所，天津 300050； 2火箭軍疾病預防控制中心，北京 100071)

柑橘橘絡提取物通便作用的實驗研究

王亞雯1*，辛中豪1*，蒲玲玲1，高蔚娜1，石塔拉1，韋京豫1，鄧致榮2#，郭長江1#

(1軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所，天津 300050；2火箭軍疾病預防控制中心，北京 100071)

目的：研究富含柑橘多糖和黃酮的橘絡提取物的潤腸通便作用。方法：依據《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003版)“通便作用檢驗方法”，將小鼠隨機分為模型對照組、陰性對照組和三劑量實驗組(低、中、高劑量組)，經口給予柑橘橘絡提取物1w后，通過測定小腸墨汁推進率、首粒便排出時間和6h內排便粒數及重量，判斷柑橘橘絡提取物對小鼠腸道蠕動和排便功能的影響。結果：與模型對照組相比，低劑量和中劑量組提高小腸墨汁推進率分別為65.29%和62.90%；3個劑量組的小鼠排首粒便時間顯著低于模型對照組，6h內排便數及重量明顯增多。結論：柑橘橘絡提取物具有良好的促進腸道蠕動功能和排便的作用，其中中劑量組效果較好。

橘絡提取物；柑橘多糖；黃酮；通便作用

便秘是臨床上常見的癥狀之一。隨著人們的工作壓力加大及不規律生活與飲食結構的變化，經加工精制的低纖維食品不斷增多，導致了腸道蠕動減弱、直腸肌肉無力等，出現便秘[1-3]。長期的便秘會促使腸道細菌產生有毒有害物質，易導致腸粘膜上皮細胞變異增生，從而誘發結直腸癌等疾病[4]。

天然柑橘橘絡富含柑橘多糖和黃酮，其中柑橘多糖來源于植物細胞壁，是一種通過α- 1，4糖苷鍵連接起來的聚半乳糖醛酸的長鏈多糖聚合物[5]，是一種純天然膳食纖維，不能被人體內消化液中的酶類所分解，部分可在大腸內被微生物發酵分解，產酸產氣，從而降低pH值，抑制腸道有害菌生長，促進有益菌增殖，增強腸道蠕動[6]。同時柑橘多糖具有強吸水性，大約吸收自身體積的2.5倍水分，使糞便變軟而易于排出，排便排毒效果快速顯著[7]。黃酮類物質具有抗氧化、抗血栓、抗腫瘤、抗菌消炎、抗病毒和排毒等多種作用，對物質代謝有調節作用[8-9]。本實驗旨在探討富含柑橘多糖和黃酮的柑橘橘絡提取物改善小鼠胃腸道功能的作用，并確定其最佳灌胃劑量。為研制基于柑橘橘絡提取物的功能性潤腸通便制劑提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

柑橘橘絡提取物，由杭州絡通生物科技有限公司提供。該提取物是以柑橘橘絡和內果皮為原料，利用低溫濃縮、萃取和膜法分離技術進行分離和提純，再經過巴氏滅菌等過程得到。成品為褐色懸濁液。經過化學測定，每100mL含柑橘多糖≥2 000mg、柑橘黃酮≥400mg、總固形物≥4 500mg。復方地芬諾酯片，由常州康普藥業制藥責任公司提供(批號：1604014)，用于急慢性功能性腹瀉及慢性腸炎，過量攝入可致便秘。

1.2 動物與分組

SPF級成年昆明小白鼠150只，雄性，體重22～25g，由軍事醫學科學院實驗動物中心提供。采用隨機數字法將實驗動物分為低、中、高劑量實驗組(0.2、0.4、0.8 mL/(25g·bw)，分別相當于人體推薦量的5、10、20倍)，同時設便秘模型對照組和陰性對照組[10]，每組15只，按0.8mL/(只·d)經口給予等量的蒸餾水，每日1次，連續7d灌胃。

1.3 方法

參考《保健食品檢驗與評價技術規范》(2003年版)中“通便功能檢驗方法”小腸運動實驗和排便實驗，具體方法如下：

1.3.1 小腸運動實驗 各實驗組按 1 mL/(只·d)經口給予受試物，空白和模型對照組給予等量的蒸餾水，每天灌胃 1 次連續給與受試物 7 d。末次給樣的當天下午，各組動物禁食不禁水16h后，對模型對照組和3個實驗組給予劑量為5mg/(kg·bw)的復方地芬諾酯溶液，灌胃量為0.2mL/(10g·bw)，陰性對照組給予等量蒸餾水。經30min后實驗組給予用柑橘橘絡受試物替代蒸餾水配置成的含2%墨汁的溶液(取印度墨水1 mL，加入49 mL蒸餾水配制成2%墨汁，灌胃劑量為0.1mL/(10g·bw)。用墨汁與灌胃液勾兌，灌胃總量保持 1 mL)，模型對照組和陰性對照組給2%墨汁灌胃。再過25 min后頸椎脫臼處死動物，立即取出自幽門至回盲部的腸管，輕將小腸平鋪拉成直線進行測量。測量小腸總長度及從幽門至墨汁前沿的推進距離，即為“墨汁推進長度”。按式(1)計算墨汁推進率(P)，并進行數據轉換(Х)后再統計分析。

(1)

1.3.2 排便實驗 動物給受試物方法同小腸運動實驗，連續灌胃7d后，末次給樣的當天下午，各組動物禁食不禁水。16h后，模型對照組和3個實驗組給予劑量為10mg/(kg·bw)的復方地芬諾酯溶液，灌胃量為0.2mL/(10g·bw)，陰性對照組給予等量蒸餾水。30min后實驗組給予含相應受試物的2%洋紅溶液(取洋紅粉末1g，加入49mL二級蒸餾水配制成2%洋紅溶液，灌胃劑量為0.1mL/(10g·bw)。用洋紅溶液與灌胃液勾兌成混合液，小鼠灌胃總量保持1mL，模型對照組和陰性對照組給予2%洋紅，同時開始計時。從灌胃洋紅開始，觀察記錄每只動物首次排紅便所需時間、6h排便粒數并稱重。實驗中動物單籠喂養，正常飲水進食。

1.3.3 統計學處理 采用SPSS 20.0進行方差分析及兩兩t檢驗。若實驗數據方差不齊，則改用秩和檢驗統計分析。P<0.05，表示差別有統計學意義。

2 結果

2.1 柑橘橘絡提取物對小鼠體重的影響

從表1、表2結果可知，2個實驗前后各劑量組小鼠的體重與陰性對照組及模型對照組相比，均不存在統計學差異(P>0.05)，表明柑橘橘絡提取物對小鼠體重無明顯影響。

表1 小鼠小腸運動實驗前后體重比較

注：各劑量組與陰性對照組和模型對照組比較，P>0.05。

表2 小鼠排便實驗前后體重比較

注：各劑量組與陰性對照組和模型對照組比較，P>0.05。

2.2 柑橘橘絡提取物對小鼠小腸運動的影響

由表3結果可知，與陰性對照組相比，便秘模型對照組小鼠的墨汁推進率明顯降低(P<0.05)，表示成功建立便秘模型。與模型對照組相比，低劑量組和中劑量組提高小腸墨汁推進率分別為65.29%和62.90%(P<0.05)，經數據轉換及統計分析，5倍、10倍劑量組與便秘模型對照組的差異有顯著性(P<0.05)，其中10倍劑量組的轉換值X高于5倍組，以上結果表明，柑橘橘絡提取物對小鼠的小腸運動具有促進作用。

表3 柑橘橘絡提取物對小鼠小腸運動的影響

注：aP<0.05，表示各組墨汁推進率與便秘模型對照組比較有顯著性差異；bP<0.05，表示各組墨汁推進率轉換值Х與便秘模型對照組比較有顯著性差異。

2.3 柑橘橘絡提取物對小鼠排便時間、排便頻率和排便量的影響

由表4結果可知，與陰性對照組相比，便秘模型對照組小鼠首便時間明顯延長(P<0.01)，而糞便的粒數及重量極顯著低于陰性對照組(P<0.01)。與模型對照組相比，5倍、10倍劑量組首便時間極顯著性縮短(P<0.01)，20倍組也具有統計學意義(P<0.05)；與模型對照組相比，5倍、10倍組的糞便粒數有極顯著性意義(P<0.01)，20倍組的明顯增多(P<0.05)；各劑量組糞便重量均大于便秘模型對照組，并有極顯著性差異(P<0.01)。以上結果表明，3個劑量組柑橘橘絡提取物能明顯縮短便秘小鼠的首便時間，并增加其所排便數量及重量，能夠增強腸道蠕動，促進排便。

表4 受試物對小鼠排便時間、排便頻率和排便量的影響

注：其他各組的首便時間與便秘模型對照組的相比，*P<0.05、**P<0.01；其他各組的糞便粒數與便秘模型對照組的相比，ΔP<0.05、ΔΔP<0.01；其他各組的糞便重量與便秘模型對照組的相比，#P<0.05、##P<0.01。

3 討論

本研究結果顯示，柑橘橘絡提取物具有較好的潤腸通便作用，尤其是在低、中劑量水平。柑橘橘絡提取物的主要組成部分是柑橘多糖，其富含鼠李半乳糖醛酸聚糖和半乳糖醛酸聚糖等結構元素，具有高持水和高粘度的特性[11]，可以軟化糞便增大體積，促進腸道蠕動，易于排便；另外，有研究顯示多糖可明顯增加腸道有益菌的含量，提高益生菌的生存能力，改善腸道菌群內環境，有效的預防結腸癌[12-13]。一些黃酮類物質也被證實具有調節腸道菌群和抑制腫瘤生長的作用[14-15]。雖然柑橘橘絡提取物富含柑橘多糖和黃酮類物質，但是否也具有改善腸道菌群、預防結腸癌的作用尚有待于進一步研究證實。值得注意的是，柑橘橘絡提取物在小腸運動和排便實驗中均未表現出明顯的劑量依賴作用，尤其是20倍劑量組在小腸運動實驗中未見明顯效果。可能的原因之一是一些黃酮類提取物在高劑量水平上可能對腸道蠕動功能具有一定抑制作用[16]，因此，柑橘橘絡提取物適宜的服用劑量尚需進一步探討。此外，其次本次實驗選擇小鼠作為實驗對象，初步得出了有效的結果，但如需應用于便秘人群，尚應開展必要的人群觀察試驗，并對提取物中的有效成分開展進一步研究。

綜上所述，本研究結果提示柑橘橘絡提取物具有較好的通便作用，為研發富含柑橘橘絡提取物的保健食品提供了科學依據，也為長期便秘的人群提供可行性參考。◇

[1]Roma E，Adamidis D，Nikolara R，et al.Diet and chronic constipation in children：the role of fiber[J]. J Pediatr Gastroenterol Nutr，1999，28(2)：169-174.

[2]Rao S S，et al.Functional Anorectal Disorders[J]. Gastroenterology，2016，150(6)：1430-1442.

[3]Van O L，Crowell M D，Drossman D A，et al.Biopsychosocial aspects of functional gastrointestinal disorders[J]. Gastroenterology，2016，150(6)：1355-1367.

[4]Pare P，Ferrazzi S，Thompson W G，et al.An epidemiological survey of constipation in canada：definitions，rates，demographics，and predictors of health care seeking[J]. Am J Gastroenterol，2001，96(11)：3130-7.

[5]Willats W G，et al.Pectin：cell biology and prospects for functional analysis[J]. Plant Mol Biol，2001，47(1-2)：9-27.

[6]Dongowski G，Lorenz A.Dongowski G，Lorenz A.Intestinal steroids in rats are influenced by the structural parameters of pectin.J Nutr Biochem 15，196-205[J]. Journal of Nutritional Biochemistry，2004，15(4)：196-205.

[7]Eliaz I，Hotchkiss A T，Fishman M L，et al.The effect of modified citrus pectin on urinary excretion of toxic elements[J]. Phytother Res，2006，20(10)：859-864.

[8]Tripoli E，et al.Citrus flavonoids：Molecular structure，biological activity and nutritional properties：A review[J]. Food Chem，2007，104(2)：466-479.

[9]陳嘉景，彭昭欣，石梅艷，等.柑橘中類黃酮的組成與代謝研究進展[J]. 園藝學報，2016，43(2)：384-400.

[10]黃覺非，劉晉，唐振闖，等.小麥戊聚糖潤腸通便功能的實驗研究[J]. 食品研究與開發，2012，33(8)：20-22.

[11]胡艷，張文林，周志欽.柑橘果膠的生物學功能及其在生物醫學中的應用[J/OL]. 果樹學報，2016.

[12]Lopes da Silva，J.A.，Rao M.A.Pectins：structure，functionality and uses[M]// A.M.Stephen，G.O.Phillips，P.A.Williams，Eds.Food Polysaccharides and Their Applications.USA：Taylor & Francis，2006：353-411.

[13]Odun-Ayo F，Mellem J，Reddy L.Improving the survival of probiotic in simulated conditions and azoxymethane-induced colon tumour bearing mice using modified citrus pectin-alginate microencapsulation[J]. African J Trad Complemen Altern Med，2016，13(2).

[14]Ankolekar C，et al.Inhibitory potential of tea polyphenolics and influence of extraction time against Helicobacter pylori and lack of inhibition of beneficial lactic acid bacteria[J]. Med Food，2011，14(11)：1321-1329.

[15]楊楠，賈曉斌，張振海，等.黃酮類化合物抗腫瘤活性及機制研究進展[J]. 中國中藥雜志，2015(40)：373-381.

[16]張博男，張靜怡，儲金秀，等.滿山紅總黃酮對腸平滑肌收縮功能影響[J]. 遼寧中醫藥大學學報，2015(17)：33-35.

(責任編輯 李婷婷)

Experimental Study on Facilitating Bowel Movement by Citrus Net Extract

WANG Ya-wen1，XIN Zhong-hao1，PU Ling-ling1，GAO Wei-na1，SHI Ta-la1，WEI Jing-yu1，DENG Zhi-rong2，GUO Chang-jiang1

(1Institute of Health and Environmental Medicine，Tianjin 300050，China；2Centers for Disease Control and Prevention，Rocket Forces，Beijing 100071，China)

citrus net extract；pectin flavonoids；facilitating bowel movement

軍隊科技重大項目(項目編號：AWS16J004)。

*共同第一作者:王亞雯(1992— )，女，碩士，研究方向：營養與食品衛生學；辛中豪(1990— )，男，碩士，研究方向：營養與食品衛生學。

#共同通信作者：郭長江(1963— )，男，博士，研究員，研究方向：營養與食品衛生學；鄧致榮(1962— )，男，隊長，研究方向：軍事預防醫學。