哲里木科左中旗植被區甘草遺傳多樣性的ISSR分析

2017-06-28 15:54:12布日額陳香梅

臨床醫藥文獻雜志(電子版) 2017年16期

布日額，陳香梅

（內蒙古民族大學蒙醫藥學院，內蒙古通遼 028041）

·基礎研究·

哲里木科左中旗植被區甘草遺傳多樣性的ISSR分析

布日額，陳香梅

（內蒙古民族大學蒙醫藥學院，內蒙古通遼 028041）

本文對哲里木植被區科左中旗具有代表性的6個區域的甘草遺傳多樣性進行研究，分析遺傳變異程度，得出結論哲里木植被區科左中旗甘草遺傳特征明顯，環境較為穩定。

哲里木；甘草；遺傳多樣性；ISSR

甘草為我國所產的大宗藥材，是我國應用最為廣泛的一種藥用植物。在我國集中分布于三北地區，而內蒙古是主要產區之一。近年來，已有運用RFLP，RAPD，ISSR等分子標記方法對不同產地甘草的遺傳多樣性研究的報道[1]。本試驗從哲里木植被區科爾沁左翼中旗具有代表性的6個區域采取野生甘草作為樣本，采用ISSR分子標記技術進行遺傳多樣性分析。采集的所有樣本均由內蒙古民族大學布日額教授給予鑒定。

1 材料與儀器

1.1 材料

采自內蒙古通遼市科爾沁左翼中旗6個區域，8份甘草單株樣本，選取新鮮無損害的葉片，分別對應編號，放入硅膠劑中干燥保存（表1）。

表1 采集甘草實驗材料

1.2 試劑和儀器

1.2.1 儀器

PCR擴增儀PCR-2720，JY-122型電泳儀，JY-SPC水平電泳槽，紫外凝膠成像系統（Tanon-4200），紫外分光光度計（200 C型），DK-SD型電熱恒溫水槽，內吐C-16B離心機。

1.2.2 試劑

分子量Marker、TaqDNA聚合酶、溴化乙錠，購自北京賽百盛基因技術有限公司。

2 方法與結果

2.1 DNA提取

采用多糖多酚植物DNA提取試劑盒（OMEGA生物技術有限責任公司）進行DNA提取。

2.2 ISSR-PCR反應條件建立及引物篩選

ISSR擴增反應條件：25 μL的反應體系12.5 μL PCR MasterMix（含3mmol·L-1MgCl2，100 mmol·L-1KCl，0.1U TaqDNA聚合酶，20 mmol·L-1Tris-HCl，500 mmol·L-1dNTP），2 μL引物，1 μL模板DNA，加雙蒸水至 25 μL。

根據相關文獻報道，由加拿大University of British Columbia，UBC Primer Set #9（Microsatellite），設計公布的引物No.801～900中選取38條引物，由上海生工生物工程技術有限公司合成。對采集的8個甘草樣品進行預試驗，得到15條重復性好、擴增條帶清晰的引物，其序列和退火溫度見表2。