紫外-可見分光光度法測定牛筋草總黃酮的含量

胡曉鷗

（浙江省湖州市南潯區(qū)中西醫(yī)結合醫(yī)院，浙江 湖州 313009）

紫外-可見分光光度法測定牛筋草總黃酮的含量

胡曉鷗

（浙江省湖州市南潯區(qū)中西醫(yī)結合醫(yī)院，浙江 湖州 313009）

目的 建立牛筋草中總黃酮的測定方法，為其質量評價提供理論依據。方法 采用紫外-可見分光光度（UV-VIS）法，檢測波長507 nm。結果 牛筋草總黃酮在0.0042～0.0954 mg/ml范圍內線性關系良好（Y=12.342X+0.0082，r=0.9998，n=6），平均回收率為99.51%，RSD為3.35%。結論 本方法簡單、方便、專屬性強，可為牛筋草藥材的質量控制提供參考。

牛筋草；紫外-可見分光光度法；總黃酮

牛筋草為禾本科植物牛筋草Eleusine indica（L.）Gaertn.的干燥全草。又名牛頓草，千人拔，蟋蟀草，牛古草，牛皮草等。本品始載于《本草綱目拾遺》，主產于廣東，湖南，江西，福建等省區(qū)，全國均有分布[1]?！吨腥A本草》[2]中記載牛筋草可用于治療小兒驚風；乙腦；流腦；黃疸；淋證；小便不利；痢疾；便血；瘡瘍腫痛；跌打損傷，其莖葉中含多種黃酮類成分。

牛筋草資源豐富，民間大多作為雜草對待，對牛筋草含量測定的藥學研究鮮有報道，本文建立紫外-可見分光光度法測定牛筋草中總黃酮含量的方法，旨在為牛筋草的合理應用提供一定的科學依據；為牛筋草的進一步研究奠定基礎。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

紫外檢測器（日本島津UV-1800）、超聲波提取儀（昆山KQ-700DE）、萬分之一天平（梅特勒-托利多）、十萬分之一電子分析天平（瑞士Precisa）；超純水系統(tǒng)：美國Millipore（密理博）公司

1.2 試藥

10批牛筋草藥材分別來自浙江、廣東、福建、江西4個產區(qū)，經浙江省湖州市食品藥品檢驗研究院鑒定為禾本科植物牛筋草Eleusine indica（L.）Gaertn.的干燥全草。蘆丁（購于中國食品藥品檢定研究院，批號100080-201409）乙醇（分析純），超純水。

2 方法與結果

2.1 含量測定方法

取蘆丁對照品制成一定濃度梯度的標準品溶液，照紫外－可見分光光度法（中國藥典2015年版四部通則0401），全波長掃描確定最大吸收峰確定檢測波長后在該波長作處測定吸光度并繪制標準曲線。另取供試品溶液，同法測定，計算即得。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取牛筋草粉末2 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入40 ml的50%乙醇，稱定重量。加熱回流，保持微沸1 h，放冷至室溫后用50%乙醇補足減失的重量，過濾，精密吸取續(xù)濾液1ml置于10ml容量瓶中，用50%乙醇定容至刻度，搖勻，即得。

2.3 對照品溶液的制備

（1）取蘆丁對照品104.13 mg，置100 ml容量瓶中，加95%乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加50%乙醇至刻度，搖勻，即得每1 ml含1.0413 mg的溶液。

（2）取蘆丁對照品15.8941 mg，置20 ml容量瓶中，加95%乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加95%乙醇至刻度，搖勻，即得每1 ml含0.7947 mg的溶液。

2.4 空白溶液的制備

精密加入5%亞硝酸鈉溶液1 ml，10%硝酸鋁溶液1 ml，4%氫氧化鈉溶液10 ml，用乙醇定容至25 ml容量瓶。

2.5 檢測波長的選擇

精密吸取供試品溶液、對照品溶液各1 ml于25 ml量瓶中，精密加入5%亞硝酸鈉溶液1 ml，反應6 min后，精密加入10%硝酸鋁溶液1 ml，反應6 min后，精密加入4%氫氧化鈉溶液10 ml，用乙醇定容至刻度。15 min后，進行200～800 nm全波長掃描。結果：對照品與供試品在507 nm處均有最大吸收，選為測定波長，結果見圖1。

圖1 紫外可見吸收圖譜注：1.蘆丁對照品溶液；2.供試品溶液

2.6 標準曲線的繪制

精密吸取2.3.1項下蘆丁對照品溶液（1.0413 mg/ml）溶液0.1、0.5、1.0 ml，2.3.2項下蘆丁對照品溶液（0.7947 mg/ml）溶液0.5、2.0、3.0ml分別加1 ml5%亞硝酸鈉溶液，放置6 min，1 ml5%硝酸鋁溶液，放置6 min，加10 ml4%氫氧化鈉溶液，放置15 min加95%乙醇溶液定容至25 ml，使其濃度分別為0.0042、0.0159、0.0208、0.0417、0.0636、0.0954 mg/ml。于507 nm波長出測定吸光度。以對照品濃度（C，mg/ml）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標繪制標準曲線，得到回歸方程為Y=12.342X+0.0082（r=0.9998，n=6），結果表明，總黃酮濃度在0.0042～0.0954 mg/ml范圍內與吸光度呈良好的線性關系。

2.7 精密度考察

取對照品一份，按2.3.1項下制備對照品溶液，按2.1項下方法連續(xù)6次測定吸光度，RSD=0.8%，表明精密度良好。

2.8 重現(xiàn)性考察

稱取供試品6份，按2.2項下制備供試品溶液后，平行制備6份。按2.1項下方法分別測定吸光度，RSD=0.6%，表明重現(xiàn)性良好。

2.9 顯色穩(wěn)定性考察

取供試品1份，按2.2項下操作制備供試品溶液，按2.1項下方法操作，每隔10 min測定一次吸光度，結果表明：RSD=1.1%，表明在2 h內顯色穩(wěn)定性良好。

2.10 加樣回收試驗

取涼粉草（廣州清平藥材市場，20151023）粉末0.5 g（總黃酮按干燥品計算含量為86.63 mg/g），精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入適量蘆丁，精密稱定，精密加入50%乙醇20 ml，稱定重量，加熱回流保持微沸1 h，放冷至室溫后用50%乙醇補足減失的重量，過濾，精密吸取續(xù)濾液1 ml置于10 ml容量瓶中，用50%乙醇定容至刻度，搖勻，以2.4制備空白對照，在507 nm處測定吸光度。結果顯示平均加樣回收率為99.51%，RSD值為3.35%，表明該實驗方案有效可行。結果見表1。

2.11 樣品測定

取不同批號的牛筋草按材料與方法4項下操作制備成供試品溶液后，按材料與方法1項下操作對樣品進行含量測定。結果見表2。

表1 加樣回收率試驗結果（n=6）

表2 涼粉草樣品的總黃酮測定

3 討 論

牛筋草為世界十大惡性雜草之一[3]，已在60多個國家和地區(qū)46種作物田間發(fā)現(xiàn)其危害，目前對牛津草的研究多集中于農藥除草劑方面。中醫(yī)認為牛筋草能清熱利濕，用于治療黃疸、乙型腦炎、乳腺炎等疾病有良好的療效，具有較高的藥用價值[2]。對其進行藥學研究，有助于人們進一步認識牛筋草，為其綜合利用提供科學依據。

本研究還對提取方法、提取溶劑和料液比進行了考察，結果發(fā)現(xiàn)加熱回流的提取方法比超聲提取效率高。50%的乙醇提取作為提取溶劑對于黃酮類物質最優(yōu)，以20：1的料液比最為適宜。

黃酮類化合物具有抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛調節(jié)免疫、抗衰老等藥理作用[4]。本文建立測定牛筋草總黃酮的含量的方法，樣品制備方法簡單，檢測結果準確，回收率、線性、精密度均符合《中國藥典》對于中藥分析的要求，且方法簡單，快速準確靈敏，為以后開發(fā)牛筋草的藥物制劑奠定了基礎，可作為牛筋草的質量控制標準。

[1] 廣東省食品藥品監(jiān)督管理局.廣東省中藥材標準(第一冊)[M].廣州:廣東科技出版社,50-51.

[2] 國家中醫(yī)藥管理局.中華本草(第八冊)[M].上海:上海科學技術出版社,345.

[3] 王新玲,馬小艷,姜偉麗,等.不同棉區(qū)牛筋草對草甘膦的抗藥性比較[J].中國棉花,2016,43(2):27-31.

[4] 馬 銳,吳勝本.中藥黃酮類化合物藥理及作用機制研究進展[J].中國藥物警戒,2013,10(5):286-290.

本文編輯：吳 衛(wèi)

Total Flavonoids content in Eleusine indica(L.)Gaertn. with Ultraviolet-Visible Spectrophotometry

HU Xiao-ou

(Nanxun Integrative Medicine Hospital, Zhejiang Huzhou 313009, China)

Objective Ultraviolet-Visible Spectrophotometry was established to determine the total flavonoids content in Eleusine indica(L.)Gaertn. Methods Reference standard method (λ-507nm) was used to determine the content of total flavonoids in Eleusine indica(L.)Gaertn. Results The test of Soluble protein in Eleusine indica(L.)Gaertn. was linear within the range of 0.0042～0.0954 mg·ml-1(Y=12.342X+0.0082, r=0.9998, n=6).The average recovery was 99.51%,RSD=3.35%. Conclusion The methods were simple and accurate.

Eleusine indica(L.)Gaertn.; Ultraviolet-Visible Spectrophotometry; Total flavonoids

R284.1

A

ISSN.2095-8242.2017.017.3176.03