RP-HPLC測定乳清蛋白糖基化產(chǎn)物中的氨基葡萄糖

張英華，劉艷樂，劉天舒，朱敏

（東北農(nóng)業(yè)大學食品學院，哈爾濱150030）

RP-HPLC測定乳清蛋白糖基化產(chǎn)物中的氨基葡萄糖

張英華，劉艷樂，劉天舒，朱敏

（東北農(nóng)業(yè)大學食品學院，哈爾濱150030）

利用酸水解釋放出的糖基化產(chǎn)物中氨基葡萄糖，采用Elite C18色譜柱分離，以68%的0.025 mol·L-1pH 3.6乙酸-乙酸鈉緩沖溶液和32%甲醇作為流動相等度洗脫，流速為1 mL·min-1，進樣體積10 μL，柱溫35℃。定量分析結(jié)果表明，氨基葡萄糖0.1～100 μg·mL-1與氨基葡萄糖峰面積線性關(guān)系良好（R2=0.9998）；以0.3、0.5、1.0 mg 3個添加水平作回收試驗，氨基葡萄糖平均回收率為88.05%～110.79%，相對標準偏差為2.45%～5.92%；氨基葡萄糖檢出限為0.02 μg·mL-1。糖基化乳清蛋白中氨基葡萄糖含量為2.03 mg·g-1。RP-HPLC測定法用于乳清蛋白-氨基葡萄糖糖基化產(chǎn)物制備條件優(yōu)化，方法簡單、重復性好、靈敏度高，可用于蛋白質(zhì)-氨基葡萄糖糖基化產(chǎn)物中氨基葡萄糖含量分析測定。

反相高效液相色譜；乳清蛋白；氨基葡萄糖

Key words:reversed-phase high-performance liquid chromatography(RP-HPLC);whey protein; glucosamine

乳清蛋白是牛乳中含量較高的主要成份之一[1]，在pH等電點處除去沉淀酪蛋白后的蛋白質(zhì)統(tǒng)稱為乳清蛋白。其含量約占乳蛋白質(zhì)18%～20%，營養(yǎng)價值高、易消化。氨基葡萄糖是葡萄糖一個羥基被氨基取代后化合物，來源廣泛，由于其分子質(zhì)量較小，在糖存在蛋白溶液反應(yīng)體系中更易擴散，是蛋白質(zhì)糖基化重要前體。將乳清濃縮蛋白與羧甲基纖維素混合物60℃下反應(yīng)5 d，可顯著提高結(jié)合物乳化穩(wěn)定性[2]。Jiang等將氨基葡萄糖與豌豆蛋白美拉德反應(yīng)作交聯(lián)，結(jié)果顯示，氨基葡萄糖導入可提高豌豆蛋白體外消化性[3]。Jiang等將氨基葡萄糖分別導入大豆蛋白和酪蛋白結(jié)果表明，糖基化交聯(lián)蛋白質(zhì)溶解性和乳化性均提高，其中流變性質(zhì)增大顯著[4-5]。……