表面等離子體共振生物芯片無標(biāo)記實(shí)時(shí)檢測(cè)蝦血藍(lán)蛋白

李 瑩，齊 攀，李仕萍，趙明路，黃建芳，馬 驍，王 宏，鐘金鋼,*

（1.暨南大學(xué) 光電信息與傳感 技術(shù)廣東普通高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510632；2.暨南大學(xué)預(yù)科部， 廣東 廣州 510610；3.廣東交通職業(yè)技術(shù)學(xué)院電子與通信工程學(xué)院電子工程系，廣東 廣州 510650；4.暨南大學(xué)理工學(xué)院光電工程系，廣東 廣州 510632；5.暨南大學(xué) 廣東省分子免疫與抗體工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510632）

表面等離子體共振生物芯片無標(biāo)記實(shí)時(shí)檢測(cè)蝦血藍(lán)蛋白

李 瑩1,2，齊 攀3，李仕萍1,4，趙明路4，黃建芳5，馬 驍4，王 宏5，鐘金鋼1,4,*

（1.暨南大學(xué) 光電信息與傳感 技術(shù)廣東普通高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510632；2.暨南大學(xué)預(yù)科部， 廣東 廣州 510610；3.廣東交通職業(yè)技術(shù)學(xué)院電子與通信工程學(xué)院電子工程系，廣東 廣州 510650；4.暨南大學(xué)理工學(xué)院光電工程系，廣東 廣州 510632；5.暨南大學(xué) 廣東省分子免疫與抗體工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510632）

利用自行研制的便攜式表面等離子體共振生物芯片檢測(cè)系統(tǒng)，在生物芯片表面分別固定蝦血藍(lán)蛋白、蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體、蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體腹水作為生物探針，利用免疫反應(yīng)的特異性，研究蝦血藍(lán)蛋白與其單克隆抗體的相互作用，分析動(dòng)力學(xué)反應(yīng)過程，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。用同一個(gè)生物芯片檢測(cè)了8 個(gè)抗體樣品、7 個(gè)未純化的抗體腹水，為現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)大量食品中過敏原、檢測(cè)臨床血清中過敏原特異性抗體進(jìn)行基礎(chǔ)研究。表面等離子體共振生物芯片檢測(cè)過敏原，儀器便攜、操作簡(jiǎn)便、無需標(biāo)記、無污染、成本低，可進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)大量樣品的實(shí)時(shí)連續(xù)檢測(cè)和快速篩選，適用于超市、集市、工廠等需要實(shí)時(shí)快速檢測(cè)和質(zhì)量監(jiān)控的場(chǎng)所，也可以應(yīng)用于臨床上患者血清樣品的過敏原抗體檢測(cè)。

過敏原；表面等離子體共振；生物芯片；無標(biāo)記；快速檢測(cè)；免疫反應(yīng)

全世界約有30%～40%的人患有各種各樣的過敏疾病[1]。食品過敏反應(yīng)是機(jī)體受同一抗原再次刺激后，表現(xiàn)為組織損傷或生理功能紊亂的特異性免疫反應(yīng)，臨床表現(xiàn)包括蕁麻疹、皰疹樣皮炎、口腔過敏綜合癥、腸病綜合癥、哮喘及過敏性鼻炎等，甚至?xí)疬^敏性休克，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[2-4]。食物過敏是涉及食品安全的重要問題，海產(chǎn)品是其中重要的一類。蝦及其制品味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，但具有較高的致敏性，是聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織公布的八大類過敏食物之一，過敏患者中約有20%對(duì)蝦過敏，小兒發(fā)病率甚至高達(dá)60%，已嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量[5]。世界很多地區(qū)都出產(chǎn)蝦，產(chǎn)量豐富，隨著水產(chǎn)品貿(mào)易的全球化，水產(chǎn)品的過敏原問題日益受到廣泛關(guān)注，美國(guó)食品藥品管理局、歐洲食品安全局、日本和中國(guó)香港都先后針對(duì)食品中的過敏原成分制定了相應(yīng)的法規(guī)，對(duì)過敏原的種類及標(biāo)簽標(biāo)示做出了明確的規(guī)定[6-10]。很多國(guó)家對(duì)進(jìn)口食品過敏原標(biāo)簽 的要求越來越嚴(yán)格，食品中過敏原的檢測(cè)已成為新的食品國(guó)際貿(mào)易技術(shù)壁壘。因此食品中過敏原的檢測(cè)、控制與安全評(píng)價(jià)尤為重要，已成為食品安全研究領(lǐng)域一個(gè)重要的課題。因此，蝦過敏原的檢測(cè)、過敏反應(yīng)的研究、抗過敏藥物的研制是亟需研究的課題。為現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)食品中蝦過敏原、臨床上檢測(cè)血清中蝦過敏原特異性抗體，研究特異、靈敏、快捷的方法意義重大。

目前，過敏原的檢測(cè)主要是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA），該方法檢測(cè)限低，但是檢測(cè)過程復(fù)雜，使用的熒光標(biāo)記物污染環(huán)境，儀器價(jià)格昂貴，更主要的是ELISA方法需要標(biāo)記抗體，可能影響抗體的生物活性，降低檢測(cè)靈敏度，在實(shí)際應(yīng)用中受到限制[11-16]。表面等離子體共振（surface plasmon resonance，SPR）生物芯片不需要標(biāo)記，可對(duì)分子間的相互作用進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，已被廣泛用于藥物分析、食品分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)等許多領(lǐng)域[17-25]。本研究采用自行開發(fā)的便攜式SPR生物芯片檢測(cè)系統(tǒng)[23-25]，利用免疫反應(yīng)的特異性，研究蝦血藍(lán)蛋白與其單克隆抗體的相互作用，分析動(dòng)力學(xué)反應(yīng)過程，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，為現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)大量食品中過敏原、檢測(cè)臨床血清中過敏原特異性抗體進(jìn)行基礎(chǔ)研究。與ELISA方法相比，本研究?jī)x器便攜、操作簡(jiǎn)便、無需標(biāo)記、無污染、成本低，可進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)大量樣品的實(shí)時(shí)連續(xù)檢測(cè)和快速篩選，適用于超市、集市、工廠等需要實(shí)時(shí)檢測(cè)的場(chǎng)所進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控，并有望用于臨床上患者血清樣品的過敏原抗體檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

過敏原為重組蝦血藍(lán)蛋白（分子質(zhì)量為80 kD，質(zhì)量濃度為4.62 mg/mL），蝦血藍(lán)蛋白（蝦中提?。┘捌鋯慰寺】贵w（質(zhì)量濃度2.1 mg/mL，滴度為16萬）由廣東省分子免疫與抗體工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)[26-27]；巰基十一酸（HS(CH2)10COOH）、巰基己酸（HS(CH2)6OH）、乙醇胺（Eth）、十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS）、N-羥基琥珀酰亞胺（N-hydroxysuccinimide，NHS）、碳二亞胺（N-(3-dimethylaminopropyl)-N’-ethylcarbodiimid hydrochlorid，EDC） 美國(guó)Sigma公司；其他試劑購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司。免疫反應(yīng)的緩沖液為磷酸緩沖溶液（phosphate buffered saline，PBS）（2 mmol/ L NaH2PO4、2 mmol/L Na2HPO4、150 mmol/L NaCl、pH 7.4），蝦血藍(lán)蛋白、蝦血藍(lán)蛋白單克隆抗體用PBS稀釋成相應(yīng)質(zhì)量濃度的溶液。

自主研制了便攜型SPR檢測(cè)儀。該儀器為角度掃描型，用Labview軟件編寫控制程序，檢測(cè)不同入射角光強(qiáng)的變化，靈敏度高，方法簡(jiǎn)便易行。檢測(cè)儀由光路系統(tǒng)、機(jī)械掃描系統(tǒng)、樣品輸送系統(tǒng)、生物傳感芯片、控制及分析軟件組成[23-25]。

1.2 方法

在直徑20 mm厚度1 mm的圓形玻璃片上沉積50 nm的金。將鍍有金膜的傳感芯片固定到儀器上，安裝好流通系統(tǒng)，通入PBS，基線穩(wěn)定幾分鐘后進(jìn)行生物芯片的自組裝，流通池中通入1 mmmol/L的HS(CH2)10COOH和HS(CH2)6OH的乙醇溶液，質(zhì)量比為1∶9，對(duì)金膜表面進(jìn)行化學(xué)修飾2 h，然后通入PBS清洗?；€穩(wěn)定后加入0.1 mol/L的NHS和0.1 mol/L的EDC混合液（1∶1，V/V），活化芯片表面15 min，之后用PBS沖洗2 min，這時(shí)的基線比活化前略有升高。然后進(jìn)行生物探針的固定，制備不同用途的生物芯片。在生物芯片表面分別固定蝦血藍(lán)蛋白、蝦血藍(lán)蛋白的單克隆抗體腹水（未純化），此時(shí)SPR響應(yīng)值明顯升高，30 min后完成探針固定，通入PBS沖洗2 min，響應(yīng)值只有小幅下降，說明探針固定效果較好。加入1 mol/L的乙醇胺（pH 8.5）封閉滅活剩余的酯鍵，4～6 min，PBS沖洗后，生物芯片制備完成，可用于下一步的免疫檢測(cè)。SPR檢測(cè)過敏原的過程如圖1所示。

圖1 SPR生物芯片檢測(cè)過敏原的示意圖Fig.1 Schematic of allergen detection by surface plasmon resonance-based chip

2 結(jié)果與分析

2.1 過敏原的固定及抗體的檢測(cè)

圖2 SPR生物芯片檢測(cè)純化抗體的動(dòng)力學(xué)曲線Fig.2 Kinetic curves showing the dependence of SPR response on antibody concentration by shrimp hemocyanin-fixed SPR biochip

將稀釋20 倍的過敏原——重組蝦血藍(lán)蛋白，固定在生物芯片表面，檢測(cè)對(duì)象是蝦血藍(lán)蛋白單克隆抗體，抗體分別稀釋300、200、150、75、50 倍。過敏原作為探針檢測(cè)抗體的動(dòng)力學(xué)曲線如圖2所示。每個(gè)樣品檢測(cè)時(shí)間是330 s，樣品中的抗體與芯片表面的抗原（蝦血藍(lán)蛋白）發(fā)生免疫反應(yīng)，形成抗原-抗體結(jié)合物，SPR響應(yīng)值增大，蝦血藍(lán)蛋白與抗體結(jié)合能力較強(qiáng)。隨樣品中抗體質(zhì)量濃度的增大，即稀釋度小，相同反應(yīng)時(shí)間，更多的抗體與抗原結(jié)合，SPR響應(yīng)值增大。由圖2可見，330 s時(shí)動(dòng)力學(xué)曲線仍處于上升階段，檢測(cè)時(shí)間約10 min，曲線不再上升，達(dá)到飽和。固定蝦血藍(lán)蛋白的生物芯片檢測(cè)蝦血藍(lán)蛋白抗體的曲線如圖3所示，隨稀釋倍數(shù)的增大，SPR響應(yīng)值下降，呈倒S曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為f（x）=1.959×10－8x3－1.133×10－5x2+0.001 11x+ 0.167 5，R2=0.989。血藍(lán)蛋白作為探針檢測(cè)特異性抗體的方法適合過敏原抗體篩選、患者血清樣品中過敏原特異性抗體檢測(cè)等。

圖3 固定過敏原的SPR生物芯片檢測(cè)抗體的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 Standard calibration curve for allergen-specific antibodies by using allergen-fixed SPR biosensor

將質(zhì)量濃度為2.1 mg/mL的蝦血藍(lán)蛋白單克隆抗體，分別稀釋200、100、50 倍的抗體質(zhì)量濃度分別為0.010 5、0.021、0.042 mg/mL，記為真實(shí)值。將稀釋后的蝦血藍(lán)蛋白單克隆抗體作為待測(cè)樣品通入流通池，與SPR生物芯片上的探針發(fā)生免疫反應(yīng)，對(duì)芯片反應(yīng)區(qū)進(jìn)行SPR掃描，記錄SPR共振角的變化，獲得未知樣品的SPR動(dòng)力學(xué)曲線，結(jié)合圖3的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出未知樣品中抗體的質(zhì)量濃度，作為檢測(cè)值，檢測(cè)值與真實(shí)值進(jìn)行對(duì)比，如表1所示。檢測(cè)值與真實(shí)值的絕對(duì)偏差均較小，其相對(duì)偏差亦較小，說明SPR生物芯片檢測(cè)系統(tǒng)具有良好的預(yù)測(cè)能力，實(shí)驗(yàn)方法可行。2.2 同一芯片檢測(cè)多個(gè)樣品

表1 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)蝦血藍(lán)蛋白單克隆抗體的結(jié)果分析Table1 Analysis of monoclonal antibodies against shrimp hemocyanin by standard curve

SPR生物芯片可以連續(xù)檢測(cè)多個(gè)樣品，能進(jìn)行大量樣品的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和初步篩選。在生物芯片表面固定稀釋20 倍的重組蝦血藍(lán)蛋白，連續(xù)檢測(cè)了8 個(gè)蝦血藍(lán)蛋白抗體樣品和7 個(gè)未純化的腹水抗體樣品，效果良好。生物芯片制備和檢測(cè)15 個(gè)樣品的動(dòng)力學(xué)過程如圖4所示。通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證生物芯片檢測(cè)樣品的穩(wěn)定性。用固定過敏原（重組蝦血藍(lán)蛋白）的同一芯片連續(xù)檢測(cè)1 組稀釋10 倍的蝦血藍(lán)蛋白抗 體樣品，結(jié)果顯示，至少可以穩(wěn)定地連續(xù)檢測(cè)70 個(gè)樣品，如圖5所示，超過70 個(gè)樣品，檢測(cè)靈敏度明顯降低，芯片需再生。

圖4 同一芯片檢測(cè)多個(gè)樣品的動(dòng)力學(xué)曲線Fig.4 Kinetic curves for different samples detected with the same chip

圖5 連續(xù)檢測(cè)樣品的穩(wěn)定性測(cè)試Fig.5 Stability of continuous detection of samples

2.2.1 抗原的固定及抗體的檢測(cè)

圖6 固定過敏原的同一生物芯片檢測(cè)抗體Fig.6 Kinetic curves for a group of allergen-specific antibody samples detected by the same allergen-fixed biosensor

如圖4所示，階段1是PBS基線，2是芯片活化的過程，3是活化后的芯片用PBS清洗，這時(shí)SPR響應(yīng)值比基線略有上升。4是抗原（重組蝦血藍(lán)蛋白）固定，5是固定后用PBS清洗，此時(shí)SPR響應(yīng)值僅略有下降，與3相比升幅較大，說明生物芯片表面的探針固定率高，固定效果良好，蝦血藍(lán)蛋白與芯片表面的結(jié)合能力較強(qiáng)。6是封閉的過程，7為用PBS清洗。8、9、11～16階段分別記錄了稀釋1 500、1 000、500、400、200、100、50、10 倍的抗體與芯片表面生物探針的 免疫反應(yīng)，SPR響應(yīng)值增大，動(dòng)力學(xué)曲線為上升趨勢(shì)。SDS-HCl溶液可以使抗原-抗體結(jié)合物解離，每個(gè)樣品檢測(cè)完都通入SDS-HCl溶液洗脫，10～15 s，例如階段10、24，其他洗脫過程未標(biāo)出。每次免疫反應(yīng)完成后、洗脫（注入SDS-HCl溶液）完成后，都通入PBS溶液清洗，圖中未做標(biāo)示。依據(jù)圖4得出的固定蝦血藍(lán)蛋白的生物芯片檢測(cè)抗體的動(dòng)力學(xué)曲線如圖6所示，4 條曲線分別記錄了稀釋10、100、500、1 500 倍的抗體與生物芯片表面抗原的免疫反應(yīng)。隨著樣品稀釋倍數(shù)的增加，SPR響應(yīng)值下降。稀釋1 500 倍的樣品，仍能檢測(cè)到免疫反應(yīng)，如果延遲反應(yīng)時(shí)間，可以檢測(cè)到稀釋倍數(shù)更高的樣品，檢測(cè)限可降低。

2.2.2 抗原的固定及抗體腹水的檢測(cè)

圖4中后半段為檢測(cè)完1組純化抗體樣品的芯片繼續(xù)連續(xù)檢測(cè)1組未純化的抗體腹水樣品，17～23分別記錄了稀釋150、100、80、50、40、20、10 倍的抗體腹水的免疫反應(yīng)。圖7為依據(jù)圖4得出的稀釋10、50、100、150 倍的抗體腹水免疫反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)曲線。檢測(cè)每個(gè)樣品時(shí)，隨免疫反應(yīng)的進(jìn)行，SPR響應(yīng)值增大。不同樣品，相同反應(yīng)時(shí)間，當(dāng)稀釋倍數(shù)增加，SPR響應(yīng)值降低。該方法檢測(cè)的是未純化的抗體腹水，有望直接用于臨床初步篩查，檢測(cè)患者血清中的過敏原特異性抗體，檢測(cè)速度快，每個(gè)樣品檢測(cè)時(shí)間為3～4 min。

圖7 固定蝦血藍(lán)蛋白的同一生物芯片檢測(cè)抗體腹水Fig.7 Kinetic curves showing the dependence of SPR response on antiallergen antibodies in ascites with the same biochip

2.3 抗體腹水的固定及過敏原的檢測(cè)

圖8 未純化抗體腹水檢測(cè)蝦血藍(lán)蛋白Fig.8 Responses to allergen detected using biosensor with unpurified ascites antiboby fixed on its surface

為探索大量食品中過敏原的檢測(cè)與安全評(píng)價(jià)，本研究在生物芯片表面固定稀釋100 倍的未純化抗體腹水，作為生物探針，檢測(cè)抗原-蝦血藍(lán)蛋白，該蝦血藍(lán)蛋白為蝦中提取，不是重組蛋白?？乖謩e稀釋10、50、100 倍，檢測(cè)時(shí)間為3～5 min。如圖8所示，3 種質(zhì)量濃度的樣品檢測(cè)3 min時(shí)的SP R共振曲線，隨樣品質(zhì)量濃度升高，共振角增大，共振曲線右移。該方法使用未純化抗體腹水作為探針，降低了成本，簡(jiǎn)化了操作步驟，縮短了檢測(cè)時(shí)間，便于進(jìn)行大量樣品的初步篩查。與ELISA方法相比，SPR生物芯片檢測(cè)方法不需要標(biāo)記和二抗，對(duì)環(huán)境無污染，不影響抗體生物活性，有利于提高檢測(cè)靈敏度。

3 討 論

過敏原又稱為變應(yīng)原，是能誘導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)的抗原；過敏反應(yīng)，又稱變態(tài)反應(yīng)，是異常、有害、病理性的免疫反應(yīng)[5,28-30]。蝦過敏屬于Ⅰ型過敏反應(yīng)，其機(jī)理是過敏原進(jìn)入機(jī)體后，誘發(fā)能合成IgE的B細(xì)胞產(chǎn)生特異性IgE，IgE與肥大細(xì)胞、嗜堿性顆粒細(xì)胞結(jié)合成為致敏靶細(xì)胞。IgE一旦與靶細(xì)胞結(jié)合，機(jī)體就會(huì)呈現(xiàn)致敏狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體再次接觸同樣的過敏原刺激時(shí)，再次進(jìn)入的相同過敏原與已經(jīng)結(jié)合的靶細(xì)胞上的IgE結(jié)合發(fā)生特異性反應(yīng)，引起水腫、哮喘、蕁麻疹、腹瀉等過敏癥狀，伴隨著患者血清IgE水平升高。目前國(guó)內(nèi)對(duì)過敏性疾病的實(shí)驗(yàn)診斷，主要采用過敏原檢測(cè)和特異性IgE、IgG檢測(cè)法，檢測(cè)試劑主要依賴進(jìn)口，檢測(cè)費(fèi)用較高。同時(shí)，食品中過敏原的檢測(cè)、控制與安全評(píng)價(jià)是食品安全領(lǐng)域的重要課題。

SPR生物芯片檢測(cè)過敏原及單克隆抗體，為直接法檢測(cè)，靈敏度比間接ELISA方法低，但設(shè)備便攜、實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、成本低廉、檢測(cè)時(shí)間短、不需標(biāo)記、不使用二抗、不影響抗體的生物活性，對(duì)環(huán)境無污染，適合大量樣品的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和快速篩查。本研究使用的蝦血藍(lán)蛋白和單抗，間接ELISA實(shí)驗(yàn)抗原包被質(zhì)量濃度為100 μg/mL，OD值為1時(shí)抗體的質(zhì)量濃度為46.2 ng/mL（該數(shù)據(jù)由廣東省分子免疫與抗體工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供）。SPR生物芯片方法為我國(guó)食品安全領(lǐng)域過敏原的檢測(cè)、臨床診斷、蝦過敏原疫苗設(shè)計(jì)和制定我國(guó)食品過敏原標(biāo)簽管理提供了一定的技術(shù)基礎(chǔ)，為食品過敏原的檢測(cè)和食品中致敏成分的標(biāo)識(shí)管理提供技術(shù)支持。

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A Label-Free Surface Plasmon Resonance Biochip for in Situ Detection of Shrimp Hemocyanin

LI Ying1,2, QI Pan3, LI Shiping1,4, ZHAO Minglu4, HUANG Jianfang5, MA Xiao4, WANG Hong5, ZHONG Jingang1,4,*
(1. Key Laboratory of Optoelectronic Information and Sensing Technologies of Guangdong Higher Education Institutes, Jinan University, Guangzhou 510632, China; 2. Department of Pre-university, Jinan University, Guangzhou 510610, China; 3. Department of Electronics Engineering, School of Electronics and Communication Engineering, Guangdong Communication Polytechnic, Guangzhou 510650, China; 4. Department of Optoelectronic Engineering, College of Science and Engineering, Jinan University, Guangzhou 510632, China; 5. Key Laboratory of Molecular Immunology and Antibody Engineering of Guangdong Province, Jinan University, Guangzhou 510632, China)

In this paper, a rapid label-free method to analyze the immune response to allergens by using a portable surface plasmon resonance (SPR) biochip was presented. Shrimp hemocyanin, monoclonal antibody against shrimp hemocyanin, and ascites fluid containing the monoclonal antibody were immobilized onto the surface of the biochip as probes, respectively. The biochip was then used to detect the immune response between shrimp hemocyanin and the corresponding monoclonal antibody. The kinetics of the reaction was analyzed, and the standard curve was constructed. Eight different batches of samples and seven different batches of unpurified ascites were detected on the same chip. This method allowed real-time, label-free, low-cost, environment-friendly and easy-to-control detections. It was suitable for real-time and continuous detectio n and rapid screening of a large number of samples. The developed portable SPR biochip detection system can be widely applicable to real-time rapid detection and quality control in factories, markets, supermarkets and other fields. It can also be applied in the clinical detection of allergen-specific antibody in serum of patients.

allergen; surface plasmon resonance; biochip; label-free; rapid detection; immunoreaction

10.7506/spkx1002-6630-201712036

TS254；R155.5

A

1002-6630（2017）12-0234-06

2016-07-20

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（41206081；61605063）；廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2014A030310483；2015A030310458）；廣東省高等職業(yè)院校珠江學(xué)者崗位計(jì)劃資助項(xiàng)目（2016年度）

李瑩（1976—），女，教授，博士，研究方向?yàn)槭称钒踩珯z測(cè)、生物醫(yī)學(xué)信息技術(shù)。E-mail：916407691@qq.com

*通信作者：鐘金鋼（1964—），男，教授，博士，研究方向?yàn)楣怆娦畔@取與處理、生物醫(yī)學(xué)光學(xué)。E-mail：tzjg@jnu.edu.cn

李瑩, 齊攀, 李仕萍, 等. 表面等離子體共振生物芯片無標(biāo)記實(shí)時(shí)檢測(cè)蝦血藍(lán)蛋白[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(12)： 234-239.

10.7506/spkx1002-6630-201712036. http：//www.spkx.net.cn

LI Ying, QI Pan, LI Shiping, et al. A label-free surface plasmon resonance biochip for in situ detection of shrimp hemocyanin[J]. Food Science, 2017, 38(12)： 234-239. (in Chinese with English abstract) DOI：10.7506/spkx1002-6630-201712036. http：//www. spkx.net.cn