一對雙方染色體異常夫婦的遺傳學分析與產前診斷

楊育青

[摘要] 目的 對一對有不良孕產史且雙方染色體異常的夫婦進行染色體遺傳學分析和產前診斷并提供遺傳咨詢。方法 2016年1月抽取夫妻雙方的外周血及2016年4月孕婦的羊水標本進行常規細胞培養和染色體制備，并綜合應用染色體核型分析（G顯帶）、熒光原位雜交；單核苷酸多態性微陣列進行染色體遺傳學分析。 結果 孕婦染色體核型：46，XX，del（X） （p22.2-pter），為Xp部分缺失攜帶者，其染色體在Xp22.33p22.2區段存在16.57 Mb片段的缺失；丈夫染色體核型：46，XY，inv（9）（p11q13）為染色體9號臂間易位攜帶者；胎兒染色體核型為：46，XX。 結論 夫妻可生育正常后代，如再次懷孕仍需行產前診斷。

[關鍵詞] 染色體核型分析；產前診斷；熒光原位雜交；單核苷酸多態性微陣列

[中圖分類號] R714.55 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）04（c）-0041-03

[Abstract] Objective To conduct the genetic analysis and prenatal diagnosis of a couple with chromosomal abnormalities and provide genetic consultation. Methods The peripheral blood of the couple extracted in January 2016 and amniotic fluid specimen of delivery women in April 2016 were selected for the routine cell culture and chromosome preparation， and the chromosomal genetic analysis was conducted by the chromosomal karyotypes （G banding）， fluorescence in situ hybridization and SNP array. Results Chromosomal karyotypes of delivery women， 46，XX，del（X） （p22.2-pter）， Xp partial deletion carrier， and the chromosome had the 16.57 Mb segment deletion in the Xp22.33p22.2 section； chromosomal karyotypes of husband， 46，XY，inv（9）（p11q13）， No.9 pericentric translocation carrier， and the chromosomal karyotypes of fetus； 46，XX. Conclusion The couple can produce the normal offspring， and it is necessary to receive the prenatal diagnosis if the wife was pregnant again.

[Key words] Chromosomal karyotypes analysis； Prenatal diagnosis； Fluorescence in situ hybridization； Single nucleotide polymorphisms

染色體病在遺傳病中占有相當的比重，發病率大約為5‰。其中由X性染色體異常引起的疾病發病率很高，其臨床表現有性腺發育不全、智力低下、兩性畸形、原發或繼發不孕等。而常染色體9號臂間倒位則是最常見的染色體結構變異之一，目前大部分學者認為9號倒位會引起自然流產、死胎、不孕不育等。該研究對象為2016年來該院診治的一對夫婦，孕婦為Xp部分缺失攜帶者，丈夫為染色體9號臂間倒位攜帶者，這種情況比較少見，現將對二者的遺傳學分析與產前診斷報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

張某30歲，孕8周，因兩年前有一次自然流產，與丈夫前來該院遺傳咨詢中心就診。孕婦查體：身高155 cm，四肢骨骼發育正常，性發育正常，17歲初潮，月經周期30 d，月經規律， 智力正常。丈夫查體正常。經咨詢并知情同意后夫婦先行外周血染色體檢查。孕婦待到合適孕周后加行產前診斷及非孕期性激素、甲狀腺功能檢測。

1.2 方法

1.2.1 孕婦張某 ①外周血淋巴細胞培養、收獲和制片：抽取靜脈血3 mL，取1 mL接種于外周血培養基進行培養，72 h后按實驗室操作規范進行收獲和制片，將部分細胞懸液置-20℃保存，將染色體片常規G顯帶；取2 mL靜脈血于EDTA抗凝管，提取基因組DNA。②羊水細胞培養：于孕18周經B 超引導行羊膜腔腹穿刺抽取羊水2 mL，換注射器針頭再取羊水20 mL分兩線進行接種培養；羊水細胞培養一周后換液，視克隆生長情況按實驗室操作規范進行收獲和制片，將染色體片常規G顯帶；染色體核型分析：鏡下計數20個細胞并分析5個，遇到嵌合時按全國行業標準進行處理，最后根據ISCN2005報告染色體核型。③SNP-array（ AffymetrixCytoScan 750K Array）測定：按儀器試劑廠家提供的實驗手冊進行實驗，用分析平臺Affymertrix GeneChip 750K SNP 進行實驗數據分析。④FISH 驗證：將步驟①制備的細胞懸液，通過滴片、熱變性處理，按照FISH實驗方法與選定的XYpter（綠色）/XYqter（紅色）雙色探針進行雜交，經洗片復染后進行結果分析。⑤在非孕期時抽取靜脈血3 mL，用UniCel DxI 800全自動化學發光分析儀及其相應試劑檢測性激素六項及甲狀腺功能，實驗操作按試劑說明書進行。

1.2.2 丈夫 ①外周血淋巴細胞培養、收獲、制片及核型分析同上；②C帶分析按實驗室操作規范進行。

2 結果

2.1 孕婦張某

①外周血細胞G顯帶（320條帶）染色體分析發現其一條X染色體短臂存在部分缺失（圖1），由于缺失片段較小，且其本人未有明顯異常表型，又進一步行SNP-array分析，以排除是否平衡性易位，SNP-array結果arr[hg19] Xp22.33p22.2（522，089-17，096，900）x1顯示該患者為女性在X染色體p22.33p22.2區段存在16.57 Mb片段的缺失（圖2），FISH結果： ish del（X）（（p22.1）（XYpter-，XYqter+）顯示患者為X染色體短臂末端缺失的攜帶者（圖3），通過SNP-array與FISH二者相互驗證，最后確定張某核型為46，X，del（X）（p22.2-ter）。②性激素六項及甲狀腺功能檢測結果如下：雌二醇（E2） 201 pg/mL（正常參考值99～448 pmol/L），促黃體生成素 （LH）8.62mIU/mL（正常參考值：2.12～10.89 mIU/ mL），促卵泡生成素（FSH）9.55 mIU/mL（正常參考值：4.5～22.51 mlU/mL），泌乳素（PRL）11 ng/mL（正常參考值：2.74～19.64 ng/mL），孕酮（P）2.05 nmol/L （正常參考值：0.99～4.83 nmol/L），睪酮（T）0.42 ng/mL（正常參考值：0.1～0.9 ng/mL）。游離三碘甲狀腺原氨酸4.18 pmol/L（正常參考值：3.8～6.0 pmol/L），游離四碘甲狀腺原氨酸 9.96 pmol/L（正常參考值：7.5～21.1 pmol/L），促甲狀腺激素4.22 ulU/m1（正常參考值：0.34～5.60 ulU/m1），甲狀腺過氧化物酶抗體1 IU/mL（正常參考值：0～9 IU/mL）。

2.2 丈夫

外周血細胞G顯帶（320條帶）染色體分析發現其一條9號染色體存在臂間倒位（圖4），結合C帶實驗確認其核型為46，XY，inv（9）（p11q13）。

2.3 胎兒

羊水細胞G顯帶（320條帶）染色體分析其核型為46，XX。

3 討論

正常的女性個體應具有兩條結構完整的X染色體，當X染色體發生數目或結構異常時，將會導致性腺發育不良或功能障礙，出現閉經、不孕等。X染色體的結構異常包括：缺失、易位、倒位以及等臂X染色體等。

X染色體上不同片段的缺失，可有不同的表型，短臂缺失可導致性腺退化，臨床表現有幼稚外生殖器，原發閉經和不孕。長臂缺失可導致原發閉經或卵巢早衰；X染色體上相同的片段或基因缺失其臨床表型也不一定相同[1-2]，存在于Xp末端假常染色體區的SHOX基因突變/缺失與常染色體顯性遺傳的Leri-Weill軟骨骨生成障礙（Leri-Weill dyschondrosteosis）等疾病相關，可致身材矮小，并且與骨骼異常如高腭弓、小頜畸形、肘外翻、短掌骨、脊柱側凸等有關[3-5]，但SHOX基因缺失導致的臨床表型差異很大[6]。該文病例基因芯片分析顯示該患者在X染色體p22.33p22.2區段存在16.57Mb片段的缺失，內含SHOX等78個OMIM基因，但該患者身高尚可，四肢骨骼發育正常，性激素六項及甲狀腺功能檢查正常，性發育和月經周期正常，這與以往的多數報道不一致，有分析顯示，Turner綜合征患者許多都有除45，X單體以外的細胞系[7]，由于患者拒絕本人進一步檢查及其父母接受染色體核型分析，無法得知患者的異常染色體是由于父母遺傳或者是新生突變所致，以及患者身上是否還存在X短臂缺失以外的細胞系。

染色體倒位以9號最為常見，其人群中發生率約為1.0%～3.0%[8]。因無遺傳物質丟失，9號倒位攜帶者一般無異常表型，但在減數分裂形成生殖細胞時，根據在配子形成中同源染色體相互配對和在倒位圈內奇數交換，臂間倒位在理論上將形成4種配子，有2種為部分重復和缺失，這些不平衡的配子可導致不孕不育、流產等生殖異常。

該研究中夫婦二人均為染色體異常攜帶者，其正常生育機會遠小于雙方染色體正常或只有一方為染色體異常攜帶者，故該研究對其胎兒做了產前診斷，結果顯示核型正常。隨訪：孕40周順產一女嬰，女嬰發育及表型未見異常。可見此類夫婦能生育正常后代，但再次懷孕時必須做產前診斷。

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（收稿日期：2017-01-18）