應用HPLC測定雙黃連口服液中主要成分含量

靳慧娟

摘要：目的：建立雙波長高效液相色譜法梯度洗脫方法測定雙黃連口服液中主要成分含量。方法：采用HederaODS-2色譜柱，以0.2%磷酸水溶液-甲醇流動相進行梯度洗脫，流速1.0ml/min，檢測波長324nm、280nm，柱溫為30℃。結果：該方法在試驗濃度范圍內線性關系良好、溶液穩定性、專屬性良好，且與《中國藥典》方法檢驗結果一致。結論：本方法用于雙黃連口服液主要成分含量測定，操作簡便、準確。

關鍵詞：高效液相色譜；黃芩苷；綠原酸；連翹苷；含量

雙黃連口服液組方金銀花、黃芩和連翹。具有疏風解表、清熱解毒之功效，臨床上常用于治療細菌和病毒引起的感冒、流行性感冒以及氣管炎、扁桃體炎、肺炎等癥?！吨袊幍洹?010年版一部采用高效液相色譜法對雙黃連口服液中主要成分黃芩苷、綠原酸、連翹苷含量分別進行測定。供試品溶液需分別制備，檢驗時限較長，檢驗方法較為繁瑣。本研究通過建立雙波長高效液相色譜法梯度洗脫方法用于雙黃連口服液中黃芩苷、綠原酸、連翹苷含量的同時測定，操作更加簡便快速，具體方法學考察如下：

1.儀器與試藥

1.1儀器

CPA225D電子天平（賽多利斯公司）

Agilent1260高效液相色譜儀，HP1100型二極管陣列檢測器（安捷倫科技有限公司）

1.2試藥

黃芩苷、綠原酸、連翹苷對照品（中國食品藥品檢定研究院）

甲醇為色譜純試劑（迪馬科技公司）

磷酸為色譜純（天津市科密歐化學試劑有限公司）

試驗用水為二次蒸餾的純化水

2.方法

2.1色譜條件與系統適用性試驗

采用Hedera ODS-2色譜柱（4.6mmx250mm，5μm）。0.2%磷酸水溶液為流動相A，甲醇為流動相B，梯度洗脫程序：0-5min，20%→30%B；5-35min，30%→45%B；35-50min，45%→70%B；50-55min，70%→20%B；55-60min，20%B。流速1.0ml/min，檢測波長324nm、280nm，柱溫為30℃，進樣量為10μl。各組分分離度、拖尾因子在0.95至1.05之間。

2.2混合對照品貯備液的制備

分別精密稱取綠原酸對照品25.12mg置25ml容量瓶內、連翹苷對照品20.22mg置25ml容量瓶內，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度；再精密稱取黃芩苷對照品29.95mg，精密量取上述兩種溶液各5ml置同一100ml量瓶內，用50%甲醇制成每毫升含黃芩苷299.5μg，綠原酸50.24μg，連翹苷20.22μg的混合溶液作為混合對照品貯備液。

2.3供試品溶液的制備

精密量取雙黃連口服液1ml置50ml量瓶中，加50%甲醇適量超聲處理15min，加50%甲醇定容至刻度，搖勻后經0.45μm的微孔濾膜濾過即得。

3.方法學考察

3.1線性關系考察

分別精密量取混合對照品貯備溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml，分別置于10ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述溶液10μl注入高效液相色譜儀，每個濃度進一針，記錄峰面積。以各對照品濃度為橫坐標，對應的峰面積為縱坐標，進行線性回歸，見表1。結果表明：黃芩苷、綠原酸、連翹苷試驗濃度范圍內線性關系良好。

3.2溶液穩定性試驗

精密量取混合對照品貯備溶液5.0ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別于溶液配制完成后0小時、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時精密量取10μl注入高效液相色譜儀，每個時間點進樣一針，記錄峰面積。計算6針峰面積之間的相對標準偏差（RSD%），黃芩苷、綠原酸、連翹苷6次測定峰面積的RSD分別為0.56%、0.22%、0.64%。結果表明：黃芩苷、綠原酸、連翹苷混合溶液在8小時內基本穩定。

3.3專屬性試驗

按照產品處方，分別取黃芩提取物、金銀花提取物、連翹提取物及適量蔗糖分別制成缺一味制劑，按供試品溶液制備方法制成缺一味空白溶液，精密量取10μl注入高效液相色譜儀。相應缺一味空白溶液色譜在黃芩苷、綠原酸、連翹苷處無吸收峰。結果表明在試驗專屬性較好。

3.4兩種含量測定方法結果比較

取市售雙黃連口服液三批，分別采用《中國藥典》雙黃連口服液項下含量測定方法和本次研究方法對黃芩苷、綠原酸、連翹苷含量進行測定，結果見表2。結果表明試驗方法用于雙黃連口服液中黃芩苷、綠原酸、連翹苷含量測定與《中國藥典》方法檢驗結果一致。

3.討論

雙黃連口服液為黃芩、金銀花、連翹經過提取制成的純中藥制劑口服液，具有辛涼解表，清熱解毒的功效。《中國藥典》中分別對黃芩、金銀花、連翹含量進行了具體的規定，其中黃芩含量以黃芩苷計每1ml不得少于10.0mg，金銀花含量以綠原酸計每1ml不得少于0.60mg，連翹含量以連翹苷計每1ml不得少于0.30mg。

隨著藥物分析技術的不斷進步，高效液相色譜法在藥品質量控制過程中的應用日益廣泛，已成為藥品檢驗中最為重要的分析方法。本次研究通過建立雙波長高效液相色譜法梯度洗脫方法用于雙黃連口服液中黃芩苷、綠原酸、連翹苷含量的同時測定，該方法在試驗濃度范圍內線性關系良好、溶液穩定性、專屬性良好，且與《中國藥典》方法檢驗結果一致。與《中國藥典》中逐一進行檢測的方法相比操作更加簡便快速，可用于雙黃連口服液的質量控制。