外周血單核細胞自體吞噬相關基因表達與高血壓頸動脈IMT的關系

孫繼紅 萬大國 張 娟 孫慎杰 李貴琦 宋恒良 張衛國

鄭州大學第二附屬醫院心內科 鄭州 450014

外周血單核細胞自體吞噬相關基因表達與高血壓頸動脈IMT的關系

孫繼紅 萬大國 張 娟 孫慎杰 李貴琦 宋恒良 張衛國△

鄭州大學第二附屬醫院心內科 鄭州 450014

高血壓；頸動脈內膜中層厚度；自噬；Beclin-1；LC3

原發性高血壓是嚴重危害人類健康的心血管疾病之一，也是腦血管病的嚴重危險因素，頸動脈內膜中層厚度(IMT)是反映全身早期動脈粥樣硬化的重要指標之一，IMT的增加與多種心腦血管事件的發生及流行密切相關[1]，是心腦血管事件的一個獨立的危險因素。應用先進的超聲診斷技術檢測頸動脈IMT厚度及斑塊的形成，能夠在早期有效判定動脈粥樣硬化的進展程度。探討IMT增厚機制對防治高血壓靶器官損害、降低病死率具有重要意義。自噬(autophagy)是細胞通過自我降解衰老的或損壞的組織、蛋白及細胞器，完成細胞自我更新及物質重復利用的過程。近年來研究表明，自噬與多種腦血管疾病息息相關，如腦外傷、缺血再灌注損傷、神經退行性疾病、缺血損傷等，腦細胞自噬水平迅速升高。當前對于自噬在IMT增厚中的作用的相關研究還很少。我們通過檢測自噬相關蛋白Beclin-1與LC3 在高血壓患者外周血單核細胞中的表達，探討自噬與高血壓IMT增厚發生的可能關系，為今后臨床高血壓血管損害的防治提供理論依據。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取我院2015-03—2016-07收治的初診高血壓患者99例，男 57例，女42例，年齡48～73歲，平均 61.5歲。納入標準：(1)初診高血壓患者，未使用任何降壓藥物；(2)高血壓診斷符合《中國高血壓防止指南2010》標準[2]；(3)排除繼發性高血壓、糖尿病、冠狀動脈粥樣硬化、吸煙等。

1．2 頸動脈超聲檢查 應用PHILIPS EPIQ 7C彩色超聲診斷儀進行頸部IMT檢測，具體的操作方法參考文獻[3]，并由本院固定醫師操作。根據2003年歐洲心臟協會高血壓治療指南提出頸動脈IMT>0.9 mm是判斷動脈壁增厚的標準，根據頸動脈IMT是否>0.9 mm把患者分為對照組(53例)和IMT增厚組(46例)。2組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

1．3 臨床血生化指標 所有受試者清晨空腹靜脈采血，使用SIEMENS ADVIA 2400全自動生化分析儀測定血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、血糖(GLU)水平。2組臨床生化指標比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 2組一般資料比較

表2 2組臨床生化指標資料比較 (±s，mmol/L)

1．4 外周血單核細胞的提取 抽取靜脈血15 mL，EDTA抗凝，1 500 r/min，離心5 min，吸取血清查血生化指標，將剩下的血細胞用Hank′s液稀釋1～2倍，緩慢倒在5 mL淋巴細胞分離液上，2 000 r/min，離心25～30 min，在血漿層和淋巴細胞分離液之間即為云霧狀單個核細胞層，吸取這一層細胞后用PBS洗滌2～3次，即可得到外周血單核細胞。

表3 RT-PCR引物信息

2 結果

圖1 IMT增厚組患者外周血單核細胞Beclin-1、LC3-mRNA表達增強 與對照組比較，**P<0.01

圖2 高血壓IMT增厚患者外周血單核細胞Beclin-1、LC3相應蛋白表達增強 A：Western印跡檢測IMT增厚組和對照組外周血單核細胞Beclin-1和LC3蛋白 B、C：灰度掃描各組的相對表達強度 與對照組相比，*P<0.05

3 討論

腦卒中是全世界致死的第2大原因和致殘的主要原因，缺血性腦卒中是最常見的腦卒中類型，約占全部腦卒中的88%，該病發病急促，病死率、致殘率高[4]，給社會和患者家庭帶來嚴重的負擔。動脈粥樣硬化是引起缺血性腦卒中的最常見原因，頸動脈是動脈粥樣硬化最常累及的部位之一，其硬化程度能夠直接反映冠狀動脈、腦動脈及外周動脈的硬化程度。

近年來，自噬作為一種區別于凋亡的程序性細胞死亡方式引起了醫學界的廣泛關注，其與缺血性腦卒中備受關注。自噬是細胞內批量降解長壽命蛋白和細胞器的生物學過程，通過將待降解的成分包繞并形成自噬體，并將自噬體運輸至溶酶體進行降解[5]，胞內受損細胞器以及蛋白聚集體幾乎全部都經自噬途徑降解[6-7]。因此，自噬是保持細胞自我更新的重要通路，在維持細胞器正常功能及蛋白質表達質量控制方面發揮重要作用[8-9]。自噬性細胞死亡在腫瘤、神經退化等細胞增殖、細胞死亡發揮重要作用的疾病中發揮著重要的作用，缺血性腦卒中的細胞自噬逐漸成為學者關注、研究的熱點。

由于頸動脈IMT的增厚發生在斑塊出現之前，大量的研究認為頸動脈IMT可作為全身動脈粥樣硬化的早期可靠的診斷指標。研究結果表明，在頸動脈無斑塊形成時，IMT的增厚仍舊作為獨立危險因素與缺血性腦卒中呈正相關[10]，因此，研究患者頸動脈IMT增厚的機制可以為預防心腦血管粥樣硬化的發生提供更有力的臨床證據。

本研究中，通過PCR法和Western blot法對對照組和IMT增厚組外周血單核細胞的自噬標志物LC3、Beclin-1的檢測，發現在IMT增厚組自噬表達顯著增強，推測自噬的激活有可能參與了高血壓頸動脈IMT增厚的發病過程，然而自噬在頸動脈IMT增厚的發生、發展過程中的具體作用和機制尚不明確，其作用究竟是有益還是有害目前還存在爭議，需要進一步研究證明。

[1] Nambi V，Chambless L，Folsom AR，et al．Carotid in-tima-madia thickness and presence or absence of plaque improves prediction of coronary heart disease risk：the ARIC(Atherosclerosis Risk in Communities)study[J]．J Am Coll Cardiol，2010，55(15)：1 600-1 607．

[2] 中國高血壓防治指南修訂委員會．中國高血壓防止指南[J]．中華高血壓雜志，2011，39(7)：579-616．

[3] 劉金霞，項潔，卜瑞芳，等．2型糖尿病患者血清25-羥維生素D濃度與頸動脈內膜中層厚度的關系[J]．中華心血管病雜志，2012，40(2)：115-119．

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(收稿2017-02-01)

Correlation of the expression of autophagy related gene in peripheral blood mononuclear cells with intima-media thickness of carotid artery in hypertension patients

SunJihong，WanDaguo，ZhangJuan，SunShenjie，LiGuiqi，SongHengliang，ZhangWeiguo

DepartmentofCardiology，theSecondAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity，Zhengzhou450014，China

Hypertension；Intima-media thickness of carotid artery；Autophagy；Beclin-1；LC3

R544.1

A

1673-5110(2017)09-0012-03

△通訊作者：張衛國，E-mail：13140001222@163.com