宮頸鱗癌組織中β-catenin、E-cadherin、PTEN蛋白表達(dá)變化及其意義

楊冬梅，黃利紅，夏瓊，劉佩佩

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬普愛醫(yī)院，武漢430033)

宮頸鱗癌組織中β-catenin、E-cadherin、PTEN蛋白表達(dá)變化及其意義

楊冬梅，黃利紅，夏瓊，劉佩佩

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬普愛醫(yī)院，武漢430033)

目的 觀察宮頸鱗癌組織中β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、磷酸酶及張力蛋白同源(PTEN)蛋白的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法 82例份宮頸鱗癌組織標(biāo)本為觀察組，32例份宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)組織標(biāo)本為CIN組，30例份正常宮頸組織標(biāo)本為正常組。采用免疫組化SP法進(jìn)行檢測各組β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白，表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，分析β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白的相關(guān)性，采用ROC曲線判斷β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白在宮頸癌診斷中的靈敏度及特異度。結(jié)果 觀察組β-catenin陽性表達(dá)率高于CIN組和對照組，E-cadherin、PTEN蛋白陽性表達(dá)率均低于CIN組和對照組(P均<0.05)。CIN組β-catenin陽性表達(dá)率高于對照組，E-cadherin、PTEN蛋白陽性表達(dá)率均低于對照組(P均<0.05)。β-catenin表達(dá)與宮頸鱗癌組織學(xué)分級、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均<0.05)；E-cadherin、PTEN蛋白表達(dá)與宮頸鱗癌組織學(xué)分級、臨床分期、浸潤深度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均<0.05)。β-catenin診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度分別為89.02%、87.10%，E-cadherin診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度分別為85.37%、83.87%，PTEN蛋白診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度分別為84.15%、85.48%。宮頸鱗癌組織中β-catenin表達(dá)與E-cadherin、PTEN呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.736，-0.702；P<0.05)，E-cadherin表達(dá)與PTEN蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.694，P<0.05)。結(jié)論 宮頸鱗癌組織中β-catenin高表達(dá)，E-cadherin、PTEN蛋白低表達(dá)。β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白診斷宮頸鱗癌的敏感度和特異度均較高。β-catenin、E-cadherin及PTEN在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展中可能存在相互作用。

宮頸腫瘤；宮頸癌；宮頸鱗癌；β-連環(huán)蛋白；E-鈣黏蛋白；磷酸酶及張力蛋白同源

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)的常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居?jì)D科惡性腫瘤的第二位，且呈年輕化趨勢[1]。宮頸鱗癌發(fā)病率占宮頸癌的90%以上，但其具體病因尚未明確。研究認(rèn)為宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與原癌基因的激活、抑癌基因的失活及信號通路的激活等關(guān)系密切[1]。β-連環(huán)蛋白(β-catenin)是一種細(xì)胞膜內(nèi)黏著蛋白，可與、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)形成復(fù)合體，可保證組織結(jié)構(gòu)的完整性和功能性。同時(shí)β-catenin又是Wnt信號通路的調(diào)節(jié)中心環(huán)節(jié)調(diào)控細(xì)胞的分化，其在細(xì)胞核內(nèi)可與T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子相結(jié)合，激活原癌基因，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[2]。E-cadherin可維持上皮細(xì)胞的正常狀態(tài)，在腫瘤的在腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲過程中發(fā)揮重要作用[3]。磷酸酶及張力蛋白同源(PTEN)是一種抑癌基因，可反饋性抑制腫瘤細(xì)胞信號通路，抑制腫瘤細(xì)胞增殖、加速細(xì)胞凋亡[4]。目前關(guān)于β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白在宮頸癌組織腫的表達(dá)報(bào)道則較少。我們觀察了宮頸鱗癌組織中β-catenin、E-cadherin、PTEN蛋白的表達(dá)變化，并探討其臨床意義，旨在為臨床治療宮頸癌提供新的靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2014年1月～2016年12月間我院病理科存檔的宮頸組織標(biāo)本144例份，其中宮頸鱗癌組織標(biāo)本82例份(觀察組)、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)組織標(biāo)本32例份(CIN組)、正常宮頸組織標(biāo)本30例份(正常組)。患者年齡26～76(48.24±4.26)歲；三組標(biāo)本提供者均未接受放、化療。根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟對宮頸癌的分期標(biāo)準(zhǔn)[5]將觀察組分為Ⅰ期42例、Ⅱ期40例；組織的分化程度為低分化50例，高、中分化32例；浸潤深度≤1/2者46例、>1/2者36例；存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52例；腫瘤直徑≥4 cm者28例，<4 cm者54例。本研究納入患者臨床資料完整，且未合并其他腫瘤。

1.2 各組β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白檢測方法 采用免疫組化SP法。所有操作均嚴(yán)格按照使用說明書進(jìn)行。單克隆抗體均是由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供，分別為鼠抗人β-catenin單克隆抗體、鼠抗人E-cadherin單克隆抗體和小鼠抗人PTEN單克隆抗體，二氨基聯(lián)苯胺顯色劑及載玻片購自武漢博士德生物工程有限公司。將各組標(biāo)本制作成石蠟切片，常規(guī)脫蠟、包埋、切片，以0.01 mol/L的枸櫞酸鹽緩沖液(pH=6.0)加熱修復(fù)抗原，待溫度降至室溫30 min后，加入0.01mol/L的PBS溶液沖洗3次，5 min/次；加入5%的正常山羊血清，37 ℃封閉40 min，然后滴加一抗，4 ℃過夜；37 ℃依次滴加生物素標(biāo)記的二抗和辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素液，分別反應(yīng)25 min；二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木精復(fù)染，脫水、透明和封片。以空白PBS液作陰性對照。每張切片在高倍鏡(×400)下隨機(jī)選擇10個不重復(fù)視野。結(jié)合染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比綜合判定結(jié)果[2]。染色強(qiáng)度為無著色計(jì)0分，黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，黃褐色計(jì)3分；陽性細(xì)胞百分比<10%計(jì)0分，10%～<40%計(jì)1分，40%～<70%計(jì)2分，≥70%計(jì)3分；將上述兩項(xiàng)得分相加， 0～1分為蛋白表達(dá)陰性，2分為弱陽性，3～4分為陽性，5～6分為強(qiáng)陽性，其中2～6分為蛋白表達(dá)陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料用百分率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)； 采用ROC曲線判斷β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白在宮頸鱗癌診斷中的靈敏度、特異度，采用Pearson相關(guān)性分析法分析β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表達(dá)比較 各組β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白陽性表達(dá)率比較見表1。

表1 各組β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白陽性表達(dá)率比較(%)

注：與正常組比較，*P<0.05；與CIN組比較，#P<0.05。

2.2 β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表達(dá)與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表達(dá)與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表2。β-catenin表達(dá)與宮頸鱗癌組織學(xué)分級、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均<0.05)，而與年齡、浸潤深度和腫瘤直徑無關(guān)(P均>0.05)；E-cadherin、PTEN蛋白表達(dá)與宮頸鱗癌組織學(xué)分級、臨床分期、浸潤深度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均<0.05)，而與年齡和腫瘤直徑無關(guān)(P>0.05)。

2.3 β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度 ROC曲線分析結(jié)果顯示，β-catenin診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度分別為89.02%、87.10%，E-cadherin診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度分別為85.37%、83.87%，PTEN蛋白診斷宮頸鱗癌的靈敏度、特異度分別為84.15%、85.48%。

2.4 宮頸鱗癌組織中β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性 相關(guān)性分析顯示，宮頸鱗癌組織中β-catenin表達(dá)與E-cadherin、PTEN呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.736，-0.702；P<0.05)，E-cadherin表達(dá)與PTEN蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.694，P<0.05)。

表2 β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白表達(dá)與宮頸鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

3 討論

β-catenin作為一種細(xì)胞膜上的多功能蛋白質(zhì)，是鈣離子依賴性黏蛋白家族成員，由多條肽鏈組成，人體中的編碼基因?yàn)镃TNNB1，位于3號染色的p21和p22上[6]。β-catenin不僅是組成Cadherin/Catenin 復(fù)合體的一部分，而且可以調(diào)節(jié)Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[7]。本研究結(jié)果顯示，觀察組β-catenin陽性表達(dá)率高于CIN組和對照組，CIN組β-catenin陽性表達(dá)率高于對照組。同時(shí)β-catenin表達(dá)與宮頸鱗癌組織學(xué)分級、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而與年齡、浸潤深度和腫瘤直徑無關(guān)，提示宮頸鱗癌組織中存在β-catenin表達(dá)異常，且與宮頸癌的發(fā)展具有緊密聯(lián)系。β-catenin在細(xì)胞內(nèi)有兩種形式：游離型和結(jié)合型，游離型β-catenin參與Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，作用機(jī)制是通過核膜在細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子Tcf/Lef，從而激活Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的靶基因，發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖或凋亡的作用，加速腫瘤細(xì)胞的惡性增殖。結(jié)合型β-catenin在正常細(xì)胞中可以與細(xì)胞膜上的E-cadherin結(jié)合，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附作用。Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路處于失活狀態(tài)時(shí)，多數(shù)β-catenin為結(jié)合型，形成蛋白復(fù)合體，可以通過磷酸化被降解，一旦Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路處于激活狀態(tài)，Wnt蛋白與多種蛋白受體結(jié)合，導(dǎo)致與β-catenin相結(jié)合的相關(guān)蛋白解離斌剛進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，阻斷磷酸化進(jìn)程，繼而造成β-catenin沉積在細(xì)胞質(zhì)中，而β-catenin又可以與細(xì)胞核中的轉(zhuǎn)錄因子相結(jié)合，激活Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的腫瘤靶基因[2,8]。

E-cadherin是一種鈣黏蛋白，具有Ca2+依賴性，分子量為120 kD，能夠通過與α-、β-和γ-catenin形成復(fù)合體E-cadherin/catenin維持上皮細(xì)胞的形態(tài)及結(jié)構(gòu)完整性，從而參與宮頸上皮細(xì)胞的分化成熟[8]。研究結(jié)果顯示，觀察組E-cadherin陽性表達(dá)率均低于CIN組和對照組，CIN組E-cadherin低于對照組。E-cadherin表達(dá)與宮頸鱗癌組織學(xué)分級、臨床分期、浸潤深度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而與年齡和腫瘤直徑無關(guān)。這與相關(guān)研究[9]結(jié)果一致。PTEN是繼p53后機(jī)體內(nèi)腫瘤細(xì)胞中的的一種抑癌基因，可以調(diào)控細(xì)胞的生長周期，加速細(xì)胞的凋亡，調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附及遷移作用，另外能夠參與生成新的血管，從而抑制惡性腫瘤生長，編碼PTEN的蛋白同時(shí)具有脂質(zhì)磷酸酶和蛋白磷酸酶的雙重活性，對細(xì)胞中的信號因子產(chǎn)生廣泛作用[10,11]。從PTEN表達(dá)情況的研究結(jié)果來看，在CIN組及觀察組中的表達(dá)明顯降低，且PTEN蛋白表達(dá)與宮頸鱗癌組織學(xué)分級、臨床分期、浸潤深度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而與年齡和腫瘤大小無關(guān)。說明PTEN表達(dá)的缺失是宮頸癌發(fā)生的主要事件，并且與其關(guān)系密切。

β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白診斷宮頸鱗癌的靈敏度及特異度均超過80%，表明三種指標(biāo)均能有效地診斷宮頸癌，分析其原因主要與三種蛋白質(zhì)的作用機(jī)理密切相關(guān)，研究中的不足是需要對三種指標(biāo)的聯(lián)合檢測進(jìn)行研究。宮頸鱗癌組織中β-catenin表達(dá)與E-cadherin和PTEN表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，E-cadherin表達(dá)與PTEN蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。說明三種蛋白間聯(lián)系密切，β-catenin和E-cadherin可在細(xì)胞膜上形成復(fù)合體，共同維持細(xì)胞的形態(tài)及結(jié)構(gòu)功能性，PTEN 的缺失表達(dá)會導(dǎo)致磷脂酰肌醇三磷酸去磷酸化失敗，持續(xù)激活磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信號通路，加速E-cadherin的表達(dá)缺失。而β-catenin與PTEN之間的具體聯(lián)系尚有待進(jìn)一步研究[4]。

綜上所述，宮頸鱗癌組織中β-catenin高表達(dá)，E-cadherin、PTEN蛋白低表達(dá)。β-catenin、E-cadherin及PTEN蛋白診斷宮頸鱗癌的敏感度和特異度均較高。β-catenin、E-cadherin及PTEN在宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展中可能存在相互作用。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2017.19.016

R711

B

1002-266X(2017)19-0054-03

2017-02-10)