斜面包埋手法在組織石蠟包埋中的運(yùn)用及體會

楊 洋，于 潔，潘成然，張憲菊，郭 琳，陳忠政，季昌華

斜面包埋手法在組織石蠟包埋中的運(yùn)用及體會

楊 洋，于 潔，潘成然，張憲菊，郭 琳，陳忠政，季昌華

病理技術(shù)；石蠟包埋；包埋平整；組織制片

石蠟包埋法是目前病理科最常用的組織包埋方法之一[1]，日常工作中，受組織結(jié)構(gòu)及取材等多因素影響，一個脫水盒中需放置多塊組織，在石蠟包埋時，多塊組織面難以保證在同一包埋面上，不僅導(dǎo)致組織切片切面不全，影響診斷，而且反復(fù)深切或重切，會造成局部病變組織缺失、延誤診斷等嚴(yán)重后果。實(shí)踐工作中，我們運(yùn)用斜面包埋手法，較好地解決了多塊數(shù)、多層次類組織包埋的平整度，有效避免因包埋導(dǎo)致的切片不全，現(xiàn)將斜面手法應(yīng)用在石蠟包埋中及注意事項(xiàng)總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 材料 常規(guī)選取內(nèi)鏡下黏膜剝離標(biāo)本、腸類管腔樣組織標(biāo)本、各種囊壁樣組織標(biāo)本、乳腺麥默通微創(chuàng)標(biāo)本、鈥激光前列腺剜除術(shù)標(biāo)本、細(xì)針穿刺標(biāo)本等，所有標(biāo)本均經(jīng)規(guī)范化取材、脫水、浸蠟處理待包埋。

1.2 方法 (1)注蠟：金屬包埋模具先接2/3體積的已溶石蠟，太少不宜控制石蠟?zāi)虝r間，太多微傾時溢出。(2)模具斜面制作(圖1)：包埋模具微傾置小冷臺，另一側(cè)微微翹起，傾角控制在5～10°間，形成斜面提供一個石蠟逐步凝固的環(huán)境過程[2]。(3)組織放入(圖2)：待包埋組織按包埋面沿先接觸冷臺的一側(cè)依次放入組織，使組織在石蠟未凝固前已放入，微凝固時固定包埋位置，凝固后包埋鑷離開并依次放入后續(xù)組織。(4)蓋脫水盒底座：包埋完成后，放平包埋模具，將脫水盒底座蓋一端入包埋模具上，緩緩放平趕出兩者間的氣泡后再一次灌注適當(dāng)石蠟，再次灌注體積最好為脫水盒底座體積的1/3，保證組織脫水盒和石蠟的緊實(shí)度。(5)成型分離：移至大冷臺，帶石蠟?zāi)毯髮⑾瀴K于包埋模具分離。斜面手法石蠟包埋過程中，在室溫下，冷臺溫度-10～0 ℃，整個模具凝固過程在10～15 s，依此時間決定包埋速度；成型蠟塊脫離模具時請勿機(jī)械強(qiáng)行分離，易造成局部包埋面斷裂，增加制片難度。

①②

圖1 模具斜面制作 圖2 組織的放入

2 結(jié)果

標(biāo)本經(jīng)規(guī)范化固定、取材、脫水、浸蠟處理后，在常規(guī)石蠟包埋中，同一包埋盒內(nèi)的各塊組織間包埋面平整度難以確保，切片顯示組織結(jié)構(gòu)不全(圖3)，影響診斷醫(yī)師做出全面準(zhǔn)確的診斷；應(yīng)用斜面包埋手法進(jìn)行石蠟包埋問題得以解決，便于病理技術(shù)組能夠切出組織層次結(jié)構(gòu)完整的優(yōu)良切片(圖4)，利于診斷醫(yī)師判讀的準(zhǔn)確度。

3 討論

組織包埋是病理技術(shù)基本工作；雜亂無序包埋的組織，不僅導(dǎo)致切片顯示不全、影響病理診斷，而且影響后續(xù)免疫組化、原位雜交、熒光原位雜交等后續(xù)檢查。

病理組織標(biāo)本取材時，若為長條形標(biāo)本，每個脫水盒放入組織應(yīng)不超過4條，以提高工作效率。若單條組織處理雖能保障包埋質(zhì)量，但取材數(shù)量太多，對組織復(fù)原不便，增加工作量。包埋應(yīng)按相同方向打開脫水盒、相同次序放入組織，組織若菲薄，應(yīng)按相同方向翻轉(zhuǎn)90°后組織豎立包埋[3]、蓋入脫水盒底座時按同樣的方向，以確保制片一致，組織層次及復(fù)原圖能夠與之對應(yīng)，便于確定組織結(jié)構(gòu)和測量相應(yīng)區(qū)域面積等。組織間緊密平行集中排列包埋，便于制片，為后續(xù)如免疫組化、原位雜交、熒光原位雜交等實(shí)驗(yàn)技術(shù)制片節(jié)約試劑，利于制出質(zhì)優(yōu)價廉的成品切片。取材的厚度應(yīng)在2～3 mm，若為囊壁或黏膜剝離樣標(biāo)本取材寬度應(yīng)為2～3 mm，太薄時組織容易彎曲變形、影響組織結(jié)構(gòu)、難以順利包埋；太厚時組織處理不佳、影響制片。

③④

圖3 常規(guī)包埋法包埋制出的切片

圖4 斜面包埋手法包埋制出的切片

內(nèi)鏡下黏膜剝離標(biāo)本、腸類管腔樣組織標(biāo)本、各種囊壁樣組織標(biāo)本，組織取材時切面盡量平整，若組織特別薄時可借助包埋用薄海綿固定取材組織，以防止組織變形，固定組織學(xué)相對位置，黏膜組織面應(yīng)方向一致，以保證組織學(xué)信息及組織平整度和方向性。

乳腺麥默通微創(chuàng)標(biāo)本，取材時選取適量質(zhì)韌標(biāo)本放于一脫水盒內(nèi)，含脂肪多的穿刺條應(yīng)放于一脫水盒內(nèi)，標(biāo)本沿長軸放入包埋模具中，組織間緊密平行排列包埋，橫徑菲薄的組織應(yīng)豎立包埋，若含有脂肪較多的組織應(yīng)將脂肪部分盡量放于模具的邊緣位置。

前列腺鈥激光剜除標(biāo)本，取材的標(biāo)本每個脫水盒放置不要超過脫水盒體積的2/3，集中緊密排列后，逐步隨石蠟?zāi)逃冒耔囕p輕按壓剩余組織以確保在同一包埋面上。

細(xì)針穿刺標(biāo)本取材時應(yīng)用包埋紙包裹，防止組織丟失，便于組織直立不彎曲。包埋時應(yīng)按長軸平行于模具中間處，待底層石蠟稍凝時用包埋鑷輕輕快速沿組織一端輕壓至另一端，確保組織在同一包埋面。

利用斜面手法進(jìn)行包埋多塊數(shù)、多層次類組織標(biāo)本可有效避免因組織包埋面不平而導(dǎo)致的切面不全，完整的病理切片大大提高診斷醫(yī)師判讀準(zhǔn)確性。

[1] 王德田, 董建強(qiáng). 實(shí)用現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)[M]. 北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社, 2012:39-45.

[2] 楊京彥，管冰心，王海濤，等. 胃ESD標(biāo)本的病理取材及切片制作方法[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2015,31(8):939-940.

[3] 丁 偉, 王德田. 簡明病理學(xué)技術(shù)[M]. 杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社, 2014:16-18.

時間：2017-3-16 14:23

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170316.1423.032.html

山東大學(xué)第二醫(yī)院病理科，濟(jì)南 250033

楊 洋，男，技士。Tel:(0531)85875340，E-mail: sddxdeyyblkyy@163.com 季昌華，女，技師，通訊作者。E-mail: changhuaji100@163.com

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B

1001-7399(2017)03-0346-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.03.032

接受日期：2017-01-20