不同藥品包裝材料微生物限度檢測方法適用性驗證

朱蓮花+凌蕾

摘 要 目的：選擇適宜方法對多種直接接觸藥品的包裝材料微生物限度進行檢查，并對方法的適用性進行驗證。方法：對固體藥用聚丙烯瓶等數種藥品包裝材料按照相應藥品包裝材料國家標準和中國藥典2015年版四部附錄通則的要求進行微生物限度方法適用性驗證。結果：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽胞桿菌、白色念珠菌和黑曲霉五種標準菌株在菌落計數法驗證試驗中的回收率為60%～150%，符合藥典規定。在控制菌的方法驗證試驗中，均可檢出相應的試驗菌。結論：選定的方法適用于不同的藥品包裝材料的微生物限度檢測。

關鍵詞 藥品包裝材料 微生物限度檢查 適用性驗證

中圖分類號：R951 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1533（2017）09-0073-03

Applicability verification of microbial limit test method for different drug packaging materials

ZHU Lianhua*， LING Lei（Shanghai Food and Drug Packaging Material Control Center， Shanghai 201203， China）

ABSTRACT Objective： To verify the applicability of the appropriate method for microbial limit test on different drug packaging materials. Methods： The microbial limit test and the validation test for the determination of the microbial contamination on pharmaceutical packaging materials such as the solid medicinal polypropylene bottle were performed based on the regulations of the National Standard Packaging Method and Chinese Pharmacopoeia 2015 edition. Results： The recovery rates of five standard strains Staphylococcus aureus， Pseudomonas aeruginosa， Bacillus subtilis， Candida albicans and Aspergillus niger were in the range of 60% ～150% by the colony count method， which meet the requirements of Chinese Pharmacopoeia. The corresponding test strains cold be detected by the validation test of control bacteria when they were incubated for a certain time at appropriate temperature. Conclusion： The selected method can be applied to the microbial limit test for the determination of the microbial contamination on different drug packaging materials.

KEy WORDS drug packaging material； microbial limit test； applicability verification

直接接觸藥品的包裝材料及容器既具備了盛藥品的功能，也因為其與藥品的接觸而可能影響藥品的質量。微生物污染是藥品包裝容器可能給藥品質量帶來的風險之一，因此，為了確保藥品的安全有效，必須嚴格控制包裝容器的微生物污染程度[1-2]。藥品包裝材料微生物限度檢驗主要是通過對附著在容器或材料表面的微生物進行采集和檢驗[3-4]，而藥品包裝容器的材料組成成分、生產工藝、貯存條件等各種因素都會對附著的微生物數量和種類帶來影響[5-6]。同時，檢驗方法中對樣品表面附著微生物的采集方法——即供試液制備過程中涉及的提取介質及具體制備方法都可能對微生物造成一定的損傷從而影響微生物生長，可能給檢驗的準確性帶來影響。微生物檢驗結果的準確性還受到其他多種因素的影響，如樣本分布均勻性、樣品溶液制備過程中微生物收集的有效性、檢驗方法的靈敏度等，這些內容一般已經在標準方法中有詳細的規定從而確保檢驗方法的科學性。但各個實驗室仍需對標準方法在本實驗室的適用性進行驗證，從而確保本實驗室的人員操作、實驗環境、培養基和試劑等各個環節不會對該方法的結果造成影響，從而保證檢測結果的準確性[7-10]。

1 儀器與材料

1.1 儀器

生化培養箱Thermo 815（賽默飛世爾）；高壓蒸汽滅菌鍋MLS-3780（日本三洋公司）；ESCO生物安全柜Class II BSC（藝思高科技有限公司）。

1.2 實驗用標準菌株

生物梅里埃定量質控菌株BioBall MultiShot 550系列，包括金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S. aureus）NCTC 10788（批號：B3651）、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，P. aeruginosa）NCTC 12924（批號：B3653）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis，B. sub）NCTC 10400（批號：B3647）、白色念珠菌（Candida albicans，C. albicans）NCPF 3179（批號：B3663）、黑曲霉（Aspergillus niger，A. niger）NCPF 2275（批號：B3642）、大腸埃希菌（Escherichia coli，E. coli）NCTC 12923（批號：B3661）。

1.3 培養基及試劑

胰酪大豆胨瓊脂培養基（TSA）干粉、胰酪大豆胨液體培養基（TSB）干粉、沙氏葡萄糖瓊脂培養基（SDA）干粉、麥康凱液體培養基干粉、麥康凱瓊脂培養基干粉、溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基干粉、甘露醇氯化鈉瓊脂培養基干粉，均來自于上海中科昆蟲生物技術開發有限公司。上述培養基適合性檢查符合規定[11]。

1.4 實驗樣品

本實驗所用樣品均為日常測試樣品。

1.5 菌液的制備

將不同種類的BioBall MultiShot 550標準菌株球分別倒入1.1 ml 14 d復溶液中，混勻，為實驗用菌液（即500 cfu/ml標準菌株實驗用菌液）。

1.6 供試液及濾膜的制備

1.6.1 墊片、膜、藥用瓶、鋁管等

藥用聚酯/鋁/聚丙烯封口墊片、外用貼膏劑用聚酯非織造布及復合膜、口服固體藥用瓶、鋁管及軟膏管分別按國家藥包材標準中YBB00132005-2015、YBB00132002-2015、YBB00082002-2015、YBB00162002-2015微生物檢查項下的要求進行供試液制備后，分別取相當于技術標準中的一個單位（一片墊片、100 cm2的復合膜、一個瓶、一支鋁管）的供試液進行薄膜過濾[12]。

1.6.2 氣霧劑閥門

取樣品10個，置于錐形瓶中，加入氯化鈉注射液100 ml，振搖1 min，即得1∶10供試液。取供試品溶液10 ml進行薄膜過濾。

1.6.3 口服固體藥用瓶蓋

取本品10個，將無菌棉簽用氯化鈉注射液沾濕，在瓶蓋內側擦拭，然后立即剪斷后將棉簽投入盛有100 ml氯化鈉注射液的錐形瓶中，換1支棉簽，同法操作（即每個瓶蓋用2支棉簽擦拭）。將瓶快速搖晃1 min，即得1∶10供試品溶液。分別取供試品溶液10 ml進行薄膜過濾。

1.6.4 濾膜的沖洗

每張濾膜沖洗3次，每次的沖洗液體積為50 ml。

取濾膜照中國藥典2015年版四部通則1105進行需氧菌總數、霉菌及酵母總數檢查，照中國藥典2015年版四部通則1106進行控制菌檢查。

1.6.5 菌落計數和控制菌檢驗

需氧菌、酵母及霉菌菌落計數及控制菌E. coli、S. aureus和P. aeruginosa檢驗均按文獻操作[11]。

1.7 方法適用性驗證

需氧菌、霉菌及酵母總數計數及控制菌方法適用性驗證試驗按照文獻操作[11]。加入的標準規定菌種量為50 cfu，即上述1.5中的菌液0.1 ml?；厥章剩?）=（試驗組菌數–供試品對照組菌數）/菌液對照組菌數×100%。當5種標準菌的回收率均為50%～200%時，判定為合格。

2 結果

對8種藥品包裝材料的微生物限度試驗中的需氧菌、霉菌及酵母的方法適用性驗證結果顯示，標準菌株的回收率均為63%～143%（表1～2）；在控制菌的驗證試驗中，大腸埃希菌的試驗組和菌液對照組在封口墊片、藥用復合膜、氣霧劑閥門、口服固體藥用瓶及藥用瓶蓋包裝材料上的試驗結果均是陽性，而供試品對照組則為陰性；金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的試驗組和菌液對照組在非織造布、氣霧劑閥門、藥用復合膜、鋁管和軟膏管上的試驗結果均是陽性，而供試品對照組則為陰性。這些結果表明，這三種控制菌的方法適用性驗證結果均符合藥典相關要求，而8種藥品包裝材料的微生物限度試驗方法也均適用。

3 討論

本實驗對直接接觸藥品的包裝容器及材料中的封口墊片、非織造布、復合膜、氣霧劑閥門、口服固體藥用瓶、瓶蓋、軟膏管、鋁管8個產品的檢驗方法進行了適用性驗證。在菌落計數法中，金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉5種標準菌株回收率均為63%～143%，符合2015年版《中國藥典》四部通則1105中50%～200%的要求。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌及銅綠假單胞菌的控制菌方法適用性驗證也均符合2015年版《中國藥典》四部通則1106的要求。

對不同的藥品包裝材料的產品，應選擇合適正確的檢驗方法，并對所選的方法進行適用性驗證，只有當方法適用性驗證結果符合要求時，才能證明所選用的方法標準是合理的，檢測該類產品的結果是準確有效的。但在標準中對于同類品種不同生產企業生產時是否進行方法適用性的驗證未作明確規定，有待今后進一步完善[13-14]。

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