芒果露水斑病病原菌分離鑒定及其拮抗菌篩選

井敏敏,田亞琴,王潤菡,邵遠志

(海南大學食品學院,海南海口 570228)

芒果露水斑病病原菌分離鑒定及其拮抗菌篩選

井敏敏,田亞琴,王潤菡,邵遠志*

(海南大學食品學院,海南海口 570228)

目的:明確芒果“露水斑病”的病原菌,并對病原菌拮抗菌進行篩選,為病害的進一步防治提供理論基礎。方法:采用掃描電鏡觀察病果表皮狀況,通過組織分離法對發病樣品進行病原菌分離,采用平板對峙法對病原菌拮抗菌進行篩選,最后對病原菌及拮抗菌進行形態學以及分子生物學鑒定。結果:明確“露水斑病”是由真菌引起,并鑒定為枝狀芽枝霉(Cladosporiumcladosporioides)。針對病原菌從芒果果園土壤中分離篩選出8株對其具有拮抗效果的菌株,其中細菌JS-8、酵母菌Y-1拮抗效果最為顯著(p<0.05),其抑菌圈直徑分別達15.17 mm、14.93 mm。經形態特征、生理生化特征以及分子生物學將菌株JS-8、Y-1分別鑒定為唐菖蒲伯克霍爾德菌(Burkholderiagladioli)、漢遜德巴利酵母(Debaryomyceshansenii)。結論:“露水斑病”主要由枝狀芽枝霉引起,唐菖蒲伯克霍爾德菌、漢遜德巴利酵母可作為該病害潛在生防菌株。

芒果露水斑病,病原菌,拮抗菌,鑒定,篩選

芒果(Mangifera indica.L)原產于印度以及馬來半島,屬于漆樹科芒果屬,具有很高的經濟價值和營養價值,被譽為“熱帶果王”。芒果果肉細膩多汁、風味獨特、并且具有抗氧化、延緩衰老、抗癌、防治心腦血管疾病、去痰止咳、健胃止暈等保健功效[1]。我國芒果種植歷史悠久,現栽培地區主要有廣西、廣東、四川、云南、海南、福建、臺灣等地,成為芒果第二大生產國,但是病蟲害日趨嚴重,使果實商品率下降,嚴重威脅我國芒果產業的發展[2]。近年來,海南芒果出現一種新的病害,在芒果表皮形成露水狀病斑,因其形態得名芒果“露水斑病”,該病多在陰雨天氣爆發,并且在地勢低洼、通風不良、雜草眾多的果園更易發病,而且常用農藥難以將其控制,嚴重影響果實外觀,情況嚴重時可造成整個果實呈現污漬狀,造成芒果商品價值大大降低,對果農造成很大的經濟損失,直接影響海南芒果產業的發展。目前對于該病害病原菌的分離鑒定、以及防治措施報道較少。目前,芒果生產上主要采用化學農藥防治各類病害,由于化學農藥的濫用,使得高殘留、污染環境等不利影響日益嚴重[3-4]。并且我國已明令禁止在果蔬、果樹、中草藥材、茶葉上使用的高毒性農藥有19種[5],如甲胺磷(methamidophos)、對硫磷(parathion)、克百威(carbofuran)、涕滅威(aldicarb)。隨著國家對化學農藥使用要求日趨嚴格,以及人們追求有機無公害食品和環境保護的意識日趨強烈,綠色環保的病蟲害防控措施成為研究的重點,生物防治受到了高度重視[6]。目前,生物防治主要包括:誘導果蔬提高自身抗病性,從植物中提取物抑菌物質[7],篩選拮抗微生物來控制病原菌等。本研究從芒果“露水斑病”病果中分離鑒定了芒果“露水斑病”病原菌,并從芒果根系土壤中分離篩選出兩株對芒果“露水斑病”病原菌具有較好拮抗效果的生防菌株,期望為芒果“露水斑病”的生物防治提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

供試果實:2015年3月至2015年5月,在海南昌江、三亞、樂東等芒果主要種植區分別采集典型發病果實各50個,同時采集健康芒果果實若干做為致病性測定用果;供試土壤:分別于2015年7月5日、7日在海南海口、昌江芒果園各選取10株不同果樹采集根系離土表5～15 cm的土壤樣品共40份,用密封袋封存,做好標記帶回實驗室,保存于4 ℃冰箱內,用于拮抗菌的分離。培養基:馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA):馬鈴薯200 g,葡萄糖20 g,瓊脂15 g,蒸餾水1000 mL,pH自然;牛肉膏蛋白胨培養基:牛肉膏3 g,蛋白胨10 g,NaCl 4 g,瓊脂15 g,蒸餾水1000 mL。

BCM-1000生物凈化工作臺 蘇州蘇潔凈化設備有限公司;FYL-YS-280L型恒溫箱 北京福意電器有限公司;NRY-211恒溫培養搖床 上海南榮實驗室設備有限公司;AL-204電子天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;ZEALWAYGR60DA高壓滅菌器 廈門致微儀器有限公司;Nikon ECLIPSE Ci-s/Ci-L顯微鏡 南京衡橋儀器有限公司;HITACHI S-3000N掃描電子顯微鏡 蘇州瑞測精密儀器有限公司;HCP-2臨界點干燥儀 蘇州瑞測精密儀器有限公司;TG16KR臺式高速冷凍離心機 長沙東旺實驗儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 病斑掃描電鏡的觀察 參照潘洵操[8]的方法,選取新發病的芒果果實用無菌水沖洗2～3次,在病斑處切取2 mm×2 mm的果皮組織,經2.5% pH6.8的戊二醛于4 ℃下固定過夜,固定后的樣品于0.1 mol/L pH6.8磷酸緩沖液中清洗3次,經系列乙醇逐級脫水,最后經乙酸異戊酯置換。樣品于HCP-2型臨界點干燥儀進行干燥,用導電膠粘貼于樣品臺上,噴金后在HITACHI S-3000N電鏡下觀察拍照,以健康果實果皮為對照。

1.2.2 病原菌分離純化 采用常規組織分離法[9]。選取新發病的芒果果實,用75%的酒精進行表面消毒,隨后用無菌水沖洗3次,在無菌條件下切取病健交界處3 mm×3 mm組織塊,置于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基平板上,于28 ℃培養3～5 d,挑取菌落邊緣菌絲少量于PDA培養基中劃線純化,重復上述步驟,直至菌落單一。純化后的菌株保存于PDA斜面上,置于4 ℃備用。

1.2.3 致病性測定 采用科赫法則驗證[10]。選取健康、大小、成熟度一致的芒果,用75%酒精進行表面消毒,取于PDA培養基上培養了3～5 d的病原菌,用無菌打孔器打成6 mm的病原菌圓片,小心地貼于芒果表面,每果接種3～5個,接種PDA培養基為對照,用無菌脫脂棉保濕2 d,置于28 ℃室溫下培養,觀察發病情況,并計算發病率。

發病率(%)=接種發病點數/接種點數×100

1.2.4 病原菌鑒定

1.2.4.1 病原菌形態學特征觀察 將純化后的病原菌接于PDA培養基上28 ℃下培養3～5 d,觀察菌落特征,并采用插片法在顯微鏡下觀察菌絲、孢子以及孢子梗形態特征,參照《真菌鑒定手冊》進行初步鑒定[11]。

1.2.4.2 病原菌rDNA-ITS序列分析 病原菌DNA由Ezup柱式真菌基因組DNA抽提試劑盒(上海生工生物工程股份有限公司)提取,采用通用引物ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)與ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)進行PCR擴增。PCR產物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測并委托上海生工生物工程股份有限公司進行測序。測序結果與GenBank核酸數據庫進行對比。

1.2.5 拮抗菌分離純化 采用稀釋平板法以及平板劃線法在PDA培養基上對各地區土壤樣品中菌株進行分離純化,直至獲得單一菌落。

1.2.6 拮抗菌篩選 分離純化后的菌株與病原菌經平板對峙[12]培養進行拮抗菌初篩,采用含菌平板抑菌圈測定法[13]對初篩有拮抗效果的菌株進行復篩,并采用十字交叉法測量抑菌圈直徑[14],每菌株做3次重復。

1.2.7 拮抗菌的鑒定 將細菌JS-8、酵母菌Y-1委托上海生工生物工程股份有限公司分別進行16S rDNA、rDNA-ITS序列測序分析,測序結果與GenBank中核酸數據庫進行同源性比對。并結合菌落形態特征、生理生化特性對拮抗菌株進行鑒定[15-16]。

1.2.8 數據處理與分析 實驗數據采用SPSS Statistics17.0軟件進行統計,并采用ANOVA進行Duncan多重差異分析。

2 結果與分析

2.1 病斑掃描電鏡觀察

從健康果皮以及病斑處果皮掃描電鏡結果看,健康芒果表皮細胞正常,大小、形狀不一的皮孔清晰可見,且果皮表面無異物(圖1A);發病芒果果皮表面生長大量菌絲,定殖于皮孔以及表皮傷口裂紋處,且發病越嚴重的果皮表面菌絲越濃密,由此可推斷芒果“露水斑病”由真菌引起,并且從(圖1B)中可以看出有菌絲延伸入皮孔,推測病原菌菌絲可能由皮孔及傷口侵入芒果表皮;病斑表皮局部可見真菌分生孢子梗(圖1C)及分生孢子(圖1D)。

圖1 健康與病果果皮的掃描電鏡觀察Fig.1 Observation of healthy and diseased fruit peel by SEM注：圖A為健康芒果表皮;圖B箭頭處表示病原菌入侵途徑; 圖C箭頭處表示病原菌分生孢子梗; 圖D箭頭處表示病原菌分生孢子。

2.2 病原菌致病性檢測及其鑒定結果

2.2.1 致病性檢測 本實驗從病果的病健交界處分離純化出10株不同真菌,采用科赫法則進行致病性驗證,發現接種J1號真菌的芒果5 d后果皮表面出現黑斑,與田間“露水斑”病癥類似,并且發病率達86.6%,而對照組發病率為0,并且取病斑處果皮組織按照1.2.2所述方法進行組織分離,分離出病原菌與J1號菌菌落形態一致,屬于同一種菌株,于是確定J1號菌為芒果“露水斑病”病原菌。

2.2.2 病原菌的形態特征 病原菌J1在PDA培養基上菌落近圓形(圖2E、F),生長速度緩慢,菌絲墨綠色,有隔膜,多分枝(圖2G);分生孢子梗多側生,直立或彎曲,頂端分枝或不分枝,具有隔膜,(20.56～83.91)μm×(2.99～5.02)μm。分生孢子鏈生,呈檸檬形、橢圓形或圓柱形,淡褐色,光滑,且具1～2個臍點,大小為(3.62～10.05)μm×(2.16～4.42)μm(圖2H)。根據病原菌形態特征,參考《真菌鑒定手冊》將病原菌初步鑒定為芽枝霉屬。

圖2 病原菌菌落形態以及菌體形態Fig.2 Photographs of colonies and cells of the C. cladosporioides注：圖E、F分別為PDA培養基上菌落正反面特征圖; 圖G為菌絲形態(×40);圖H為分生孢子形態(×40)。

2.2.3 病原菌rDNA-ITS序列分析 將病原菌基因組DNA進行PCR擴增,擴增結果如圖3所示,擴增片段為500～600 bp,經測序獲得534 bp的核苷酸序列,通過在GenBank數據庫中進行Blast同源性分析,結果發現菌株與Cladosporiumcladosporioides(KJ596320.1)的ITS序列同源性為100%。綜合形態學特征鑒定該病原菌為枝狀芽枝霉。

圖3 病原菌ITS區PCR擴增電泳圖Fig.3 PCR amplification of ITS sequence of the pathogen注：M為DNA Ladder Mix maker;1為J1的ITS擴增產物。

2.3 拮抗菌的分離及篩選結果

共分離純化出56株菌,通過平板對峙,得到14株對芒果“露水斑病”病原菌具有拮抗效果的菌株,占總分離菌株的25%,經復篩后,從14株拮抗菌中篩選出8株拮抗效果好的菌株,其抑菌圈直徑見表1。其中菌株JS-8、Y-1對枝狀芽枝霉的拮抗效果明顯,抑菌圈直徑分別達15.17、14.93 mm。(圖4)。

圖4 拮抗菌在PDA平板上對枝狀芽枝霉的抑制效果Fig.4 Effects of antagonistic bacterium on C.cladosporioides in PDA medium

表1 拮抗菌株對病原菌的抑菌復篩結果

注：不同字母表示差異顯著(p<0.05)。

2.4 拮抗菌的鑒定結果

拮抗菌JS-8為革蘭氏陰性桿菌、無芽孢,呈灰白色、邊緣光滑、濕潤、不透明、突起菌落,不產色素。拮抗菌Y-1為酵母菌,菌落白色、不透明、軟而平滑且粘稠,具有酵母發酵香氣,細胞呈球形或卵圓形,單個或成雙,出芽生殖。

分別對菌株JS-8、Y-1進行了部分生理生化實驗,主要對拮抗菌JS-8進行了接觸酶實驗、氧化酶實驗、檸檬酸鹽實驗、硝酸鹽還原實驗、丙二酸鹽利用實驗、甲基紅實驗、V-P實驗、吲哚實驗以及糖發酵實驗;對拮抗菌Y-1進行了糖發酵實驗、碳源同化實驗以及氮源同化實驗,其結果見表2。

表2 拮抗菌JS-8和Y-1的生理生化特征

注：+表示90%以上菌株陽性;-表示90%以上菌株表示陰性。

以JS-8、Y-1菌株的總DNA為模板,分別采用16S rDNA通用引物、rDNA-ITS通用引物進行PCR擴增,擴增結果如圖5,PCR擴增片段約為1400、600 bp,經測序得知菌株JS-8的16S rDNA序列長1368 bp,Y-1的ITS序列長613 bp。分別將所得測序結果與GenBank數據庫中已有序列進行Blast同源性分析,結果顯示菌株JS-8與Burkholderiagladioli菌株16S rDNA同源性為99%,菌株Y-1與Debaryomyceshansenii菌株rDNA-ITS序列同源性為99%。并結合菌落形態學觀察以及生理生化特征,分別將JS-8、Y-1鑒定為唐菖蒲伯克霍爾德菌、漢遜德巴利酵母。

圖5 拮抗菌JS-8、Y-1電泳圖譜Fig.5 PCR amplification of JS-8 and Y-1注：M為DNA Ladder Mix maker;1為Y-1;2為JS-8。

3 討論與結論

芒果“露水斑病”是海南省芒果產區危害最嚴重的病害,其發病迅速,多在雨季爆發,并且一旦發病難以控制,該病害主要影響芒果外觀、形成污斑,嚴重降低商品價值,對整個海南芒果發展產業已造成一定影響,目前對該病害的報道還很少,同時對該病害還沒有有效的防治措施。本研究從海南省各芒果產區采集了發病樣本,利用掃描電鏡對比了健康果實與發病果實果皮之間的差異,發現發病果皮表面生長大量真菌菌絲,而健康果實未出現菌絲,從而確定該病害是一種真菌病害。并采用組織分離法對其病原菌進行分離,經過科赫法則驗證,通過形態學以及分子生物學鑒定,確定J1號真菌為枝狀芽枝霉(Cladosporiumcladosporioides)。

目前芒果病害的防控大多采用化學殺菌劑,但隨著病原菌產生抗藥性,以及農藥殘留對環境與人體造成危害,人們逐漸意識到生物防治的重要性[17-18],現有報道的細菌、酵母菌以及小型絲狀真菌對真菌病原菌具有拮抗作用[19-20]。目前報道較多的拮抗細菌主要是芽孢桿菌屬以及假單胞菌屬;具有生防能力的酵母菌已有40余種,主要是假絲酵母屬、畢赤酵母屬、隱球酵母屬、紅酵母屬以及梅奇酵母屬;小型絲狀真菌主要是木霉屬[21-22]。并且已有生物拮抗制劑得到商業化應用,如殺菌劑Serenade(Agro Quess Inc.,USA)、殺菌劑Rhio-plus(KFZB Biotechnick,Germany)、生物拮抗菌產品Biosave(Eco Science Corporation,USA)以及生物拮抗菌產品Blight Ban A506(Nu Farm,Inc.,USA)[23],由此可見生防菌株有一定的應用前景。目前對芒果病害拮抗菌研究主要集中于炭疽病、蒂腐病,對于芒果其他病害生防菌的報道較少,報道的拮抗菌主要是芽孢桿菌、季也蒙畢赤酵母、假絲酵母[24-26],而針對芒果“露水斑病”病原菌的拮抗菌還未有報道。本研究從芒果果園土壤樣品中分離出8株對芒果“露水斑病”病原菌具有拮抗效果的菌株,其中菌株JS-8、Y-1拮抗效果明顯,并分別鑒定為唐菖蒲伯克霍爾德菌、漢遜德巴利酵母。之前國內外已有報道利用漢遜德巴利酵母作為生防菌株的研究,如Chalutz等[27]從檸檬果實上分離出漢遜德巴利酵母,并發現其對柑橘青、綠霉病以及酸腐病具有較好的控制效果;Droby等[28]從葡萄果實上分離出的漢遜德巴利酵母對柑橘綠霉病具有抑制作用;何秀娟等[29]報道漢遜德巴利酵母能有效防治芒果炭疽病以及蒂腐病。黃蓉等[30]發現漢遜德巴利酵母產生的揮發性物質對草莓灰霉病的發病有顯著地抑制作用。此外漢遜德巴利酵母還可防治蘋果青霉病、桃酸腐病[31-32]。對于唐菖蒲伯克霍爾德菌作為生防菌的報道還很少,胡曉峰等[33]報道唐菖蒲伯克霍爾德菌對大麗輪枝菌、辣椒疫霉、立枯絲核菌以及煙草疫霉煙草變種具有一定的拮抗作用。但對于唐菖蒲伯克霍爾德菌、漢遜德巴利酵母兩種拮抗菌對芒果“露水斑病”病原菌的抑制作用是首次報道。因此,拮抗菌JS-8以及Y-1可以作為防治“露水斑病”的潛在生防菌株,并為該病的防治提供理論基礎。

[1]羅學兵.芒果的營養價值、保健功能及使用方法[J].中國食物與營養,2011,17(7):77-79.

[2]鐵萬祝,羅關興,王友富,等.我國芒果產業發展概況與主要問題[J].中國熱帶農業,2013,5(5):16-19.

[3]楊勝遠,陳桂光,肖功年,等.芒果主要病原菌拮抗微生物的分離篩選[J].植物保護,2004,30(3):55-58.

[4]Solaimani B,Ramezani S,Rahemi M,et al. Biological control of postharvest disease caused by Penicillium digitutum and P.italicum on stored citrus fruits by Shiraz Thyme essential oil[J]. Advances in Environmental Biology,2009,3(3):249-254.

[5]張曉宇,張則君,韓巨才.拮抗菌在果蔬采后病害防治中的應用[J].農業技術與裝備,2012,242(14):62-64.

[6]鹿秀云,李社增,馬平,等.黃瓜白粉病拮抗細菌的篩選與鑒定及其防病機理[J].中國生物防治,2006,22(增刊):54-58.

[7]胡軍華,馬麗娜,賀磊,等. 47種植物提取物對3種柑桔常見貯藏病害病原菌活性抑菌作用研究[J].中國南方果樹,2010,39(3):1-4,8.

[8]潘洵操,謝寶貴.荔枝果皮的掃描電鏡觀察[J].園藝學報,1996,23(3):227-230.

[9]陸家云.植物病原真菌學[M].北京:中國農業出版社,2001:55-56.

[10]方中達.植病研究方法[M].第三版.北京:中國農業出版社,1998:24-151.

[11]魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海:上海科學技術出版社,1979:567-569.

[12]幕立義.植物化學保護研究方法[M].北京:中國農業出版社,1991:76-79.

[13]趙健,蘭成忠,陳慶河,等.抗番茄青枯病內生拮抗細菌的篩選及室內防效測定[J].武夷科學,2006,22(1):49-54.

[14]劉曉妹,陳秀蓉,蒲金基.兩株芽孢桿菌無菌液抗菌譜及穩定性測定[J].中國生物防治,2003,19(3):141-143.

[15]東秀株,蔡妙英.常見細菌系統鑒定手冊[M].北京:科學出版社,2001:162-171.

[16]Barnett J A,Penn R W,Yaro D著,胡瑞卿譯. 酵母菌的特征與鑒定手冊[M]. 青島:青島海洋大學出版社,1991:60-117.

[17]Kupper C,Cervantes L,Klein N,et al. Evaluation of Antagonistic MicroorganismsSaccharomycesCerevisiaeand Bacillus Subtilis for Control ofPenicilliumDigitatum[J].Rev Bras Frutic,2013,35(2):425-436.

[18]Sugar D,Basile S R. Orchard Calcium and Fungicide Treatments Mitigate Effects of Delayed Postharvest Fungicide Applications for Control of Postharvest Decay of Pear Fruit[J]. Postharvest Biology and Technology,2011,60(1):52-56.

[19]裘紀瑩,王未名,陳建愛,等.拮抗菌在果蔬保鮮中的應用研究進展[J].食品工業科技,2009,30(5):334-336.

[20]華娟,李淋玲,程華,等.拮抗菌生物防治果蔬病害的研究進展[J].江西農業學報,2013,25(10):71-74.

[21]魏巧婕,鄭新艷,鄧開英,等.黃瓜枯萎病拮抗菌的篩選鑒定及其生物防效[J].南京農業大學學報,2013,36(1):40-46.

[22]黃運鳳,劉國凌.拮抗菌制劑在果蔬采后病害防治中的應用研究進展[J].貴州農業科學,2010,38(5):106-109.

[23]王友升. 拮抗酵母菌與果蔬采后病害防治[M].北京:知識產權出版社,2012:4-7.

[24]李春玲,王慶國,胥李娜,等.一株芒果炭疽病拮抗菌抑菌活性的研究及其鑒定[J].食品工業科技,2012,33(11):147-150.

[25]陳敏,高云慨,宋海超,等.氯化鈣結合季也蒙畢赤酵母(Meyerozyma guilliermondii)對抑制芒果采后炭疽病效果的影響[J].食品科學,2016,37(2):204-209.

[26]趙超,胡美姣,李敏,等.芒果采后病害拮抗菌的篩選、鑒定及其生防效果研究[J].西南農業學報,29(2):385-389.

[27]Chalutz E,Wilson C L. Postharvest biocontrol of green and blue mold and sour rot of citrus fruit by Debaryomyces hansenii[J]. Plant Disease,1990,74(2):134-137.

[28]Droby S,Lischinski S,Cohen L,et al. Characterization of an epiphytic yeast population of grapefruit capable of suppression of green mould decay caused by Debaryomyces hansenii[J]. Biological Control,1999,16(1):27-34.

[29]何秀娟.篩選芒果采后炭疽病和蒂腐病的生防菌研究[D].武漢:華中農業大學,2006.

[30]黃蓉,黃盼,黃瑞榮.一株酵母菌的鑒定及其揮發性物質防病測定[J].江西農業大學學報,2015,37(5):903-908.

[31]Singh D,Sharma R R,Samuel D V,et al. Enhancing the bioefficacy of Debaryomyces hansenii with sodium salts for reducing the blue mould rot in apples[J].Indian Phytopathology,2011,62(4):478-483.

[32]Diesh S,Goutam M. Improved control of Rhizopus stolonifer-induced storage rot of peach with hot water and antagonistic yeast,Debaryomyces hansenii[J].Indian Phytopathology,2012,59(2):168-173.

[33]胡曉峰,郭晉云,張楠,等.一株溶磷抑病細菌的篩選及其溶磷特性[J].中國農業科學,2010,43(11):2253-2260.

Isolation and identification of pathogen causing mango dew blotch disease and screening of its antagonistic microorganisms

JING Min-min,TIAN Ya-qin,WANG Run-han,SHAO Yuan-zhi*

(College of Food Science and Technology,Hainan University,Haikou 570228,China)

Objective:The project aims to clarify the pathogen of the mango dew blotch disease,screen its antagonistic microorganisms in order to lay theoretical basis for the further prevention of the disease. Methods:Scanning electron microscope was used to observe the condition of the peel of diseased fruit. Conventional tissue separation method was applied to separate disease tissue. And the antagonistic microorganisms were screened by the flat-stand method. The pathogen and antagonistic microorganisms were identified in morphological and molecular biological methods. Results:It was found that mango dew blotch disease was caused by fungus.And the pathogen was identified as Cladosporium cladosporioides. Eight antagonistic strains againstCladosporiumcladosporioideswere isolated and screened from the soil in mango garden. The strain JS-8 and Y-1 showed the highest and most stable antagonistic effect(p<0.05). Results showed that the inhibition zone diameters were 15.17 mm and 14.93 mm. Based on morphological,physiological and biochemical characteristics,and molecular biological methods,JS-8 and Y-1 were identified asBurkholderiagladioli,Debaryomyceshansenii. Conclusions:Mango dew blotch disease was mainly caused byCladosporiumcladosporioides.BurkholderiagladioliandDebaryomyceshanseniican be used for potential biocontrol strains of Mango dew blotch disease.

mango dew blotch disease;pathogen;antagonistic microorganisms;identification;screening

2016-09-28

井敏敏(1990-),女，碩士研究生,研究方向:熱帶果蔬貯藏加工學,E-mail:jingminmin2016@163.com。

*通訊作者:邵遠志(1969-),男,本科，教授,研究方向:果蔬病害防控與果蔬采后保鮮,E-mail:s.yz123789@163.com。

農業部南亞熱作項目(14RZNJ-59);海南省重點研發計劃項目(ZDYF2016043)。

TS201.3

A

1002-0306(2017)05-0163-05

10.13386/j.issn1002-0306.2017.05.022