諾麗發(fā)酵果汁中總木脂素含量測(cè)定

史曉萌 陳建國(guó) 張露

摘要 [目的]建立諾麗發(fā)酵果汁中總木脂素的含量測(cè)定方法。[方法]以鬼臼毒素為對(duì)照品，采用紫外分光光度法建立總木脂素含量的分析測(cè)定方法。[結(jié)果]鬼臼毒素對(duì)照品在0～0.100 mg/mL線性關(guān)系良好；平均回收率為99.61%，RSD為1.85%。采用此方法對(duì)不同發(fā)酵時(shí)間的諾麗果汁中總木脂素成分進(jìn)行含量測(cè)定，含量為0.401 9～0.582 7 mg/mL。[結(jié)論]該試驗(yàn)建立的含量檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、迅速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于液體樣品中總木脂素成分含量的測(cè)定。隨著發(fā)酵時(shí)間的增長(zhǎng)，諾麗果汁中木脂素類成分的含量變化不大。

關(guān)鍵詞 諾麗發(fā)酵果汁；總木脂素；紫外分光光度法；含量測(cè)定

中圖分類號(hào) S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2017）28-0125-02

Abstract [Objective] The research aimed to establish a method for the total lignans content in Noni fermented juice.[Method] Using podophyllotoxin as the reference substance，the determination method of total lignans content was established by ultraviolet spectrophotometry.[Result]The linear relationship of podophyllotoxin reference substance in the 0-0.100 mg/mL was good.The average recovery rate was 99.61%，RSD was 1.85%.The content of total lignans in Noni juice in different fermentation time was 0.401 9-0.582 7 mg/mL.[Conclusion] This method was simple，rapid，accurate and repeatability，which can be applicable for determination of lignans content in liquid samples and the content of lignans in Noni juice was stable with the fermentation time extended.

Key words Noni fermented juice；Total lignans；Ultraviolet spectrometry；Content determination

諾麗（Noni）學(xué)名海巴戟天（Morinda citrifolia Linn.），原產(chǎn)于南太平洋群島、東南亞和澳大利亞等地的茜草科（Rubiaceae）巴戟天屬（Morinda）植物[1]，其根、莖、葉、果實(shí)和樹皮均具有很高的藥用價(jià)值，在波利尼西亞具有2 000多年的藥用歷史，用作偏方治療糖尿病、高血壓和癌癥[2-4]。現(xiàn)今廣泛應(yīng)用諾麗發(fā)酵果汁來預(yù)防與生活方式相關(guān)的疾病，如糖尿病、高血壓、心臟病和動(dòng)脈硬化引起的腦溢血[3-4]，并有報(bào)道指出諾麗果汁具有抑菌、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、輔助改善放化療副作用的效果[5-7]。

現(xiàn)有許多研究證實(shí)多酚類物質(zhì)是諾麗植物中重要的活性成分，在發(fā)酵果汁中的含量可達(dá)1.141 2 mg/mL[8]。目前，從諾麗果實(shí)、根、莖和葉中分離得到酚類化合物主要有黃酮類、香豆素類、木脂素類和酚酸類，其中木脂素是一類具有多種生理活性的成分，可抑制脂肪氧合酶活性，表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗氧化活性[9-12]。但有關(guān)諾麗發(fā)酵果汁中木脂素成分含量的研究目前鮮見報(bào)道。該研究建立了木脂素成分含量的測(cè)定方法，并對(duì)不同發(fā)酵時(shí)間的諾麗果汁樣品進(jìn)行了木脂素含量的測(cè)定與比較，以期為諾麗發(fā)酵食品的質(zhì)量控制及評(píng)價(jià)提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 儀器 紫外分光光度計(jì)（UNICO-JV2000），AB204-N萬(wàn)分之一電子天平（瑞士梅特勒儀器有限公司），電子天平（METTLER-TOLEDO 公司），離心機(jī)（Eppendorff 公司）。

1.2 試材 諾麗發(fā)酵果汁由海南諾尼生物工程開發(fā)有限公司提供。鬼臼毒素對(duì)照品由北京盈澤納新化工技術(shù)研究院提供（批號(hào)15042411）。甲醇、乙醇等其他試劑均為分析純（北京化工廠）。

1.3 方法

1.3.1 對(duì)照品溶液的制備。精密稱取鬼臼毒素（Podophyllotoxin）對(duì)照品10.00 mg置于50 mL 量瓶中，用甲醇溶解，即得對(duì)照品溶液。

1.3.2 樣品溶液的制備。精密量取樣品10.0 mL，置于100 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密移取31.25 mL置于100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻離心，上清即得樣品溶液。

1.3.3 線性關(guān)系考察。精密吸取“1.3.1”鬼臼毒素對(duì)照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、2.00、2.50、3.00 mL分別置于5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配制成系列質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，在292 nm處進(jìn)行測(cè)定，并以吸光度（y）對(duì)鬼臼毒素對(duì)照品溶液終濃度（x）進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.4 精密度試驗(yàn)。精密吸取“1.3.1”鬼臼毒素對(duì)照品溶液3.0 mL置于10.0 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，以甲醇溶液為空白對(duì)照，連續(xù)6次測(cè)定其在波長(zhǎng)292 nm處的吸光度，計(jì)算RSD值。

1.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)。取“1.3.2”制備的樣品溶液，以甲醇為空白對(duì)照，在波長(zhǎng)292 nm 處測(cè)定吸光度，測(cè)得其吸光度并計(jì)算RSD值。

1.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取“1.3.1”鬼臼毒素對(duì)照品溶液，適當(dāng)稀釋一定倍數(shù)后，分別在0、10、20、40、80、120、240 min時(shí)波長(zhǎng)292 nm處進(jìn)行紫外測(cè)定，測(cè)得吸光度并計(jì)算RSD值，評(píng)價(jià)對(duì)照品穩(wěn)定性。取“1.3.2”制備的樣品溶液，分別在0、10、20、40、80、120、240 min，以甲醇為空白對(duì)照，在波長(zhǎng)292 nm 處測(cè)定吸光度，測(cè)得其吸光度并計(jì)算RSD值，評(píng)價(jià)樣品穩(wěn)定性。

1.3.7 加樣回收率試驗(yàn)。取“1.3.2”的樣品溶液9份，精密量取1.0 mL置于5 mL量瓶中，分別精密量取“1.3.1”對(duì)照品溶液0.138 、0.168、0.198 mg 3個(gè)水平各3份加入樣品中，加甲醇稀釋至刻度并以甲醇為空白對(duì)照，在波長(zhǎng)292 nm 處測(cè)定吸光度（n=3）。

1.3.8 樣品測(cè)定。精密量取4個(gè)不同發(fā)酵時(shí)間的諾麗果汁樣品，按照“1.3.2”方法制備樣品溶液，以甲醇為空白對(duì)照，在292 nm處測(cè)定吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算木脂素含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定對(duì)照品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，數(shù)據(jù)經(jīng)過回歸處理，得鬼臼毒素對(duì)照品的回歸方程為y=0.012 5x+0.007 6（r=0.999 4），結(jié)果表明對(duì)照品在0～0.100 mg/mL具有良好的線性關(guān)系。

2.2 精密度試驗(yàn) 按照“1.3.4”操作，重復(fù)進(jìn)樣6次測(cè)定含量，計(jì)算RSD值為0.14%，表明該方法精密度良好。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn) 按照“1.3.5”操作，平行進(jìn)樣對(duì)照品6次，計(jì)算RSD值為0.96%，表明樣品的重復(fù)性良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按照“1.3.6”操作，取對(duì)照品和樣品分別在0、10、20、40、80、120、240 min時(shí)292 nm 處進(jìn)行紫外測(cè)定，測(cè)得吸光度并計(jì)算RSD值分別為1.02%和0.94%，表明對(duì)照品和樣品在240 min內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.5 加樣回收試驗(yàn) 由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算鬼臼毒素的平均回收率為99.61%和RSD為1.85%（表1），表明該含量測(cè)定方法準(zhǔn)確可靠。

2.6 樣品含量測(cè)定 取發(fā)酵25～500 d的諾麗果汁，采用上述建立的方法測(cè)定其中總木脂素含量，結(jié)果表明（表2），總木脂素含量為0.401 9～0.582 7 mg/mL，其中發(fā)酵25 d時(shí)含量最高，整個(gè)發(fā)酵期間變化不大。

3 結(jié)論與討論

該試驗(yàn)建立的紫外分光光度法測(cè)定諾麗發(fā)酵果汁中總木脂素含量的方法簡(jiǎn)便快捷且穩(wěn)定可靠，在0～0.100 mg/mL具有良好的線性關(guān)系，適用于液體類樣品中木脂素成分含量的檢測(cè)。采用此方法對(duì)不同發(fā)酵時(shí)間的諾麗果汁中總木脂素成分進(jìn)行含量測(cè)定，得出其含量為0.401 9～0.582 7 mg/mL。前期文獻(xiàn)報(bào)道，諾麗植物中所含木脂素主要有雙四氫呋喃型、苯駢二氧六環(huán)型、苯駢呋喃型三大類，是諾麗果中重要的功能性成分[1-4]。該試驗(yàn)結(jié)果顯示諾麗發(fā)酵果汁中木脂素成分的含量隨發(fā)酵時(shí)間的增長(zhǎng)變化不大，表明此類成分在發(fā)酵過程中較穩(wěn)定。此結(jié)果為后期諾麗發(fā)酵工藝的研究及相關(guān)生產(chǎn)的質(zhì)量控制奠定了理論基礎(chǔ)。

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