基于顯著抑菌活性原藥1—萘酚和惡霉靈的乳油制備

周驥 車志平 田月娥 劉圣明 陳根強

摘要[目的]探討基于1-萘酚和惡霉靈的乳油最佳配方。[方法]采用菌絲生長速率法初步測定1-萘酚和惡霉靈對小麥赤霉病菌、油菜菌核病菌和牡丹黑斑病菌的室內抑菌活性；基于1-萘酚和惡霉靈顯著抑菌活性，制備乳油制劑；通過對溶劑、乳化劑進行篩選組合優化，測定相應配方的性能。[結果] 1-萘酚和惡霉靈對3種植物病原真菌均表現出顯著的抑制活性。確定序號5、11、12、16、17和20的配方不論從乳油外觀還是乳化分散性和穩定性方面均完全符合乳油的要求。[結論] 1-萘酚和惡霉靈乳油制劑可進一步研究開發。

關鍵詞1-萘酚；惡霉靈；抑菌活性；乳油

中圖分類號S482.2文獻標識碼A文章編號0517-6611（2017）05-0151-03

Abstract[Objective] The aim was to find out the optimum proportion of emulsifiable concentrate based on 1naphthol and hymexazol.[Method] Firstly，we prepared and bioevaluated 1naphthol and hymexazol for their antifungal activities against Fusarium graminearum，Sclerotinia sclerotiorum and Alternaria suffruticosae by using mycelium growth rate method in vitro，respectively.Secondly，we prepared emulsifiable concentrate based on the significant inhibitory activity of 1naphthol and hymexazol.Finally，we screened combinatorial optimization of solvent and emulsifier according to the corresponding formula of performance measurement.[Result] 1naphthol and hymexazol showed significant inhibitory activity against three kinds of plant pathogenic fungi.Six formulas like 5，11，12，16，17 and 20，no matter from the appearance，emulsifying dispersion or stability were completely in line with the requirements of the emulsifiable concentrate.[Conclusion] The emulsifiable concentrate based on 1naphthol and hymexazol is worthy to study in the future.

Key words1naphthol；Hymexazol；Antifungal activity；Emulsifiable concentrate

基金項目河南科技大學博士科研啟動基金項目；河南科技大學青年科學基金項目；河南科技大學高級別科研項目培育基金。

作者簡介周驥（1986—），男，河南洛陽人，碩士研究生，研究方向：農藥學。*通訊作者，博士，從事天然產物農藥研究。

收稿日期2016-11-16

隨著人們對化學農藥要求的提高，加之近年來新農藥開發難度日益增大，對現有農藥進行新劑型加工成為農藥創制的一種經濟有效手段。筆者所在課題組前期研究發現，1-萘酚對煙草枯萎病菌[Fusarium oxysporum（Schlecht） f.sp.nicotianae（Johns.） Snyder et Hansen]和番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea Pers.）均表現出很好的抑菌活性[1]。然而，由于1-萘酚不溶于水，很難在田間直接使用。乳油具有加工簡單、使用方便、活性較其他劑型顯著的優點[2-5]，研究基于1-萘酚的乳油具有重要意義，目前鮮見文獻報道。

惡霉靈是一種安全、低毒、高效的環保型殺菌劑，目前關于其乳油劑型的研究報道較少。一般而言，同種原藥制備成乳油的毒力要顯著高于其他劑型[6-12]。鑒于此，筆者進一步探索了基于1-萘酚和惡霉靈乳油的制備，研究了不同溶劑、乳化劑配比對乳油分散性及穩定性的影響，并評價了所制備乳油的性能，旨在為開發1-萘酚和惡霉靈乳油劑型提供理論依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試藥劑與試劑。原藥：1-萘酚，購自阿拉丁試劑網，純度為99.0%；惡霉靈，已商品化殺菌劑，購自山東濰坊華諾生物科技有限公司，純度為99.0%。乳化劑：吐溫-20（TWEN-20，天津光復精細化工研究所）、吐溫-80（TWEN-80，天津博迪化工有限公司）、司盤-20（SPAN-20，天津光復精細化工研究所）、司盤-40（SPAN-40，天津福晨化學試劑廠）、十二烷基二甲基甜菜堿（BS-12，青島優索化學科技有限公司）。溶劑：乙酸乙酯、N-甲基-2-吡咯烷酮（NMP）、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）、丙酮、二甲亞砜（DMSO）。

1.1.2供試菌株。

小麥赤霉病菌（Fusarium graminearum Schw.）、油菜菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum（Lib.） de Bary）、牡丹黑斑病菌（Alternaria suffruticosae），3種常見植物病原真菌均由河南科技大學林學院植保系實驗室提供。

1.1.3培養基。PDA培養基：去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，蒸餾水定容至1 000 mL。

1.2方法

1.2.1原藥1-萘酚和惡霉靈抑菌活性測定。根據預試驗將原藥1-萘酚和惡霉靈設定5個質量濃度，采用菌絲生長速率法[13-14]分別測定1-萘酚和惡霉靈對小麥赤霉病菌、油菜菌核病菌和牡丹黑斑病菌3種常見植物病原真菌的室內抑菌活性。首先將原藥1-萘酚和惡霉靈用一定量丙酮溶解，待滅菌后的PDA培養基冷卻至60～70 ℃時分別與所測原藥混合配制成設定質量濃度，充分混勻后制成含不同劑量的帶藥培養基，以不加藥劑的培養基為空白對照，每個質量濃度設3個重復。待培養基充分冷卻后，接種生長活力一致、直徑5 mm的供試病原菌菌餅，于（28±1） ℃下培養。待空白對照菌落直徑大于70 mm時，采用十字交叉法測量菌落直徑，計算出2種原藥在不同質量濃度下對病菌的生長抑制率，采用DPS統計軟件進行數據處理，求出EC50。

抑菌率=〖SX（〗對照生長直徑-處理生長直徑〖〗對照生長直徑-5〖SX）〗×100%

1.2.2原藥1-萘酚和惡霉靈乳油的制備及性能測定。

乳油的制備：按照預定的配方，先稱取一定量農藥原藥，將原藥溶解于定量的有機溶劑中使其完全溶解，再加入一定比例的乳化劑等其他助劑，定容到設定體積，形成透明溶液即可。乳油的乳化穩定性測定參照GB/T 1603；乳油的熱貯穩定性測定參照GB/T 19136；乳油的低溫穩定性測定參照GB/T 19137。

2結果與分析

2.1原藥1-萘酚和惡霉靈的抑菌活性由表1可知，2種原藥對3種供試植物病原真菌均表現出顯著活性。

2.2原藥1-萘酚和惡霉靈乳油的制備及性能

2.2.1溶劑的篩選。

溶劑的篩選主要依據2個指標，即溶劑對原藥的化學穩定性和原藥在溶劑中的溶解度。該研究采用郭武棣[15]的方法測定不同溶劑對2種原藥的溶解度。

由表2可知，DMF和DMSO對2種原藥的溶解性最好，NMP次之，丙酮和乙酸乙酯一般。根據該試驗需要，選取溶解性最好的DMF和DMSO為制備乳油的最佳溶劑，用以溶解原藥1-萘酚和惡霉靈，并補足至乳油樣品的100%。

2.2.2乳化劑的篩選。

室溫下，選取TWEN-20、TWEN-80、SPAN-20、SPAN-40和BS-12 5種乳化劑與溶解性最好的2種溶劑分別進行乳化分散性及穩定性比較。通過觀察乳油樣品的外觀以及滴入水中（稀釋200倍）的乳化現象判斷所配制乳油的分散性及穩定性性能。其中，1-萘酚乳油按照原藥5%、乳化劑10%，溶劑補足100%的配方配制，惡霉靈乳油按照原藥20%、乳化劑10%，溶劑補足100%的配方配制。

由表3可知，以1-萘酚為原藥配制乳油，1～3號和6～8號基本符合乳油的一般性能，只是乳化穩定性稍差，即28 ℃下靜置1 h 能保持乳液體系穩定，而靜置24 h筒底部出現了少量沉淀，攪拌后沉淀消失；4、9和10號不合格，表現為乳油外觀不達標，乳化分散性及穩定性差（上有浮油或下有沉淀，且攪拌后不能恢復）；5號從乳油外觀、乳化分散性及穩定性方面均完全符合乳油的要求。以惡霉靈為原藥配制乳油，11、12、16、17和20號不論從乳油外觀，還是乳化分散〖CM（25〗性及穩定性方面均完全符合乳油的要求；13、15、18和19號均基本具備乳油的一般性能，檢測中發現乳化穩定性稍差，靜置24 h測量筒底部出現了少量沉淀，攪拌后沉淀消失；14號不合格，表現為乳油外觀不達標。

初步分析發現，水溶性較好的原藥易于配制高標準、高濃度乳油，如原藥惡霉靈，由于其水溶性較1-萘酚強，因此易于成功配制乳油，且配制乳油各方面性能較好；水溶性較差的原藥，如1-萘酚，配制乳油難度增大，尤其是高濃度乳油，成功概率大大降低。一旦配制成功，對原藥的利用將是一個新的方向。

2.2.3熱貯及冷貯穩定性測定。

對“2.2.2”經乳化分散性及穩定性測定結果合格的乳油樣品分別進行熱貯及冷貯穩定性測定。其中，熱貯處理時溫度為（60±2） ℃，時間為7 d；冷貯處理時溫度為（-20±2） ℃，時間為3 d。

由表4可知，對乳化分散性和穩定性測定合格的乳油樣品進行熱貯及冷貯測定，均合格，達到了乳油的一般標準。

3結論

首先，原藥1-萘酚和惡霉靈體外對小麥赤霉病菌、油菜菌核病菌和牡丹黑斑病菌3種常見植物病原真菌均表現出顯著的抑菌活性。其次，通過研究不同溶劑、乳化劑、熱貯及冷貯對配制乳油性能的影響，確定了原藥1-萘酚和惡霉靈乳油最佳配方。1-萘酚乳油最佳配方：原藥5%，BS-12 10%，DMF補足100%。惡霉靈乳油最佳配方：①原藥20%，TWEN-20 10%，DMF補足100%；②原藥20%，TWEN-80 10%，DMF補足100%；③原藥20%，TWEN-20 10%，DMSO補足100%；④原藥20%，TWEN-80 10%，DMSO補足100%；⑤原藥20%，BS-12 10%，DMSO補足100%。按照上述最佳配比配制好的1-萘酚和惡霉靈乳油，需進一步測定其對田間常見植物病原真菌的抑菌活性。

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