布洛芬顆粒有關物質檢測方法研究

蘇德龍

【摘 要】目的：建立一種能用于布洛芬顆粒中有關物質控制的HPLC方法。方法：采用YMC C18 （ 150 mm×4. 6 mm，5 μm）色譜柱；流速：2 ml·min-1；檢測波長：214nm；流動相：磷酸溶液（pH2.5）- 乙腈（66：34）；柱溫：30℃；進樣量為5μL。結果：布洛芬與其各雜質能達到基線分離；布洛芬顆粒中的輔料不干擾有關物質的測定；方法的線性、準確性、靈敏度均能滿足要求。結論：本文所建方法為布洛芬顆粒的評價、質量控制提供了較好的分析手段。

【關鍵詞】布洛芬顆粒 有關物質 RP-HPLC

【Abstract】 Objective：To develop an HPLC method for determination the related substances of Ibuprofen granules.Method：The separation was performed on a column of YMC C18 （ 150 mm×4. 6 mm，5 μm）， with acetonitrile：pH2.5 phosphate buffer （66 ： 34） as the mobile phase at flow rate of 2.0ml/min. The detection wavelength was 214 nm. The injection amounts of sample solutions were 5μL. Result：Ibuprofen and its related substances can be well separated from each other on the developed system. The excipients in ibuprofen granules did not affect the determination of related substances. Linearity， accuracy，sensitivity and robustness of the method could meet the specific analytical requirements. Conclusion The developed method can be successfully applied to the quality control of Ibuprofen granules.

【Keywords】 Ibuprofen granules； related substances； RP-HPLC

布洛芬（Ibuprofen） 是一種療效確切、安全的非甾體抗炎、解熱、鎮痛藥物。臨床上用于風濕性、類風濕性關節炎和骨關節炎的長期治療， 還廣泛用于治療各種中度疼痛及炎癥、發熱等疾病， 其治療效果明顯， 對消化道的副作用較阿司匹林、吲哚美辛小。布洛芬顆粒為布洛芬原料藥和輔料蔗糖、糊精按比例制成的顆粒劑。目前，由于布洛芬顆粒藥品標準中無有關物質檢查項目，而有關物質是目前藥品安全性評價的一個重要指標。為更好的評價及控制布洛芬顆粒的質量，本研究參考美國藥典（USP32-NF27）及相關文獻[1]中布洛芬有關物質測定方法，確定了一種專屬性好，簡單可靠的布洛芬顆粒有關物質檢測方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀，LHH-250GP型藥品強光穩定性試驗箱，LHH-250HD型藥品穩定性試驗箱，DZF-6210型真空干燥箱。

布洛芬標準品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100179-201105），布洛芬顆粒（哈藥集團世一堂制藥廠，規格：0.2g），乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：YMC C18（150mm×4.6mm，5μm）；流速：2 ml·min-1；檢測波長：214nm；流動相：磷酸溶液（pH2.5）-乙腈（66：34）；柱溫：30℃。

2.2 溶液制備

取布洛芬顆粒適量（約相當于布洛芬1 g），精密稱定，置100ml量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。精密量取1ml，置100ml量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

2.3 測定方法

精密吸取供試品溶液和對照溶液各5μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。

2.4 專屬性試驗

2.4.1 空白輔料干擾試驗

（1）布洛芬對照品溶液：精密稱取布洛芬對照品適量，用乙腈溶解并稀釋成每1ml約含布洛芬1mg的溶液，濾過，取續濾液，即得。

（2）空白輔料溶液：精密稱取按處方比例混合均勻的空白輔料約4g，置100ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，濾過，取續濾液，即得。

（3）布洛芬顆粒供試品溶液：取布洛芬顆粒，研細，精密稱取細粉約5g，置100ml量瓶中，同2）中方法制備，即得。

精密吸取上述溶液各5μl，依2.1中色譜條件測定，記錄色譜圖。結果見圖1。結果表明空白輔料不干擾布洛芬有關物質的測定。

2.4.2 酸降解

取布洛芬顆粒適量（約相當于布洛芬1 g），置100ml量瓶中，加入5 mol·L-1鹽酸溶液10ml，搖勻，室溫放置16h 。用5 mol·L-1氫氧化鈉溶液調節pH至中性，加乙腈稀釋至刻度，濾過，取續濾液，精密吸取5μl，依2.1中色譜條件測定。結果表明布洛芬顆粒在本實驗條件下的酸溶液中較為穩定，無明顯降解。

2.4.3 堿降解

取布洛芬顆粒適量（約相當于布洛芬1g），精密稱定，置100ml量瓶中，加入5 mol·L-1氫氧化鈉溶液10ml，搖勻，室溫放置16h。用5 mol·L-1鹽酸溶液調節pH至中性，加乙腈稀釋至刻度，濾過，取續濾液，精密吸取5μl，依2.1中色譜條件測定。結果表明布洛芬顆粒在本實驗條件下的堿溶液中較為穩定，無明顯降解。

2.4.4 氧化降解

取布洛芬顆粒適量（約相當于布洛芬1 g），精密稱定，置100ml量瓶中，加入30%過氧化氫溶液10ml，搖勻，室溫放置16h。加乙腈稀釋至刻度，濾過，取續濾液，精密吸取5μl，依2.1中色譜條件測定。結果表明布洛芬顆粒在本實驗的氧化條件下較為穩定，無明顯降解。

2.4.5 高溫降解

取布洛芬顆粒適量（約相當于布洛芬0.25 g），精密稱定，置7ml玻璃管制注射劑瓶中，105℃放置4h 。轉移至25ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，濾過，取續濾液，精密吸取5μl，依2.1中色譜條件測定。結果表明布洛芬顆粒在105℃高溫條件下與降解前相比在46min附近出現一雜質峰，但降解雜質峰能夠與主成分峰達到有效分離，符合測試要求。

2.4.6 高濕降解

取布洛芬顆粒適量（約相當于布洛芬0.2 g），精密稱定，置7ml玻璃管制注射劑瓶中，于75%RH、40℃放置48h 。轉移至100ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，濾過，取續濾液，精密吸取25μl，依2.1中色譜條件測定。結果表明布洛芬顆粒在75%RH、40℃條件下較為穩定，無明顯降解。

2.4.7 光照降解

取布洛芬顆粒適量（約相當于布洛芬0.2g），精密稱定，置7ml玻璃管制注射劑瓶中，于照度為4500lx±500lx、45℃放置5d 。轉移至100ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，濾過，取續濾液，精密吸取25μl，依2.1中色譜條件測定。結果表明布洛芬顆粒在照度4500lx±500lx、45℃條件下較為穩定，無明顯降解。

2.5 檢測限

精密稱取布洛芬對照品適量，用乙腈溶解并稀釋成每1ml約含布洛芬1mg的溶液，將此溶液用乙腈進行倍數梯度稀釋后，濾過，取續濾液，精密吸取5μl注人液相色譜儀，記錄色譜圖。其中，當稀釋濃度為12.5ng·ml-1時，S/N （S：布洛芬峰高；N：最大噪音峰高）約為3，將此時的進樣量定為檢測限，即在本色譜條件下布洛芬的檢測限為0.06ng。

2.6 耐用性

2.6.1 溶液穩定性

取供試品溶液及對照溶液室溫放置，分別于0、3、6、9、12、15、18 小時精密吸取上述溶液各5μl，依2.1中色譜條件測定，記錄色譜圖。結果對照溶液主成分峰面積RSD值為0.32%；供試品溶液總雜質峰面積RSD值為2.79%，且未見明顯新雜質產生。表明，在室溫條件下布洛芬顆粒對照溶液及供試品溶液穩定性均較好，18 h內穩定。

2.6.2 色譜柱

分別考察了3種不同品牌的色譜柱（YMC-pack ODS-A-302、Agilent Eclipse XDB-C18、Phenomenex Luna C18（2） 100A），規格均為150 mm×4. 6 mm 5 μm。結果表明，YMC色譜柱的分離效果最好。因此，本試驗中選擇YMC色譜柱用于布洛芬顆粒有關物質的檢測。

2.6.3 柱溫

分別考察了柱溫25℃、30℃和35℃條件下的色譜圖。結果表明，在柱溫上下波動5℃的范圍內，各雜質峰與主成分峰軍能得到較好的分離。

2.6.4 流動相

分別考察了乙腈與pH為2.5的磷酸水溶液的體積比為33：67、34：66和35：65的色譜圖。結果表明，流動相比例的微小變化并不影響各雜質峰與主成分峰的分離。

2.6.5 流速

分別考察了流速為1.9ml·min-1、2.0 ml·min-1、2.1 ml·min-1的色譜圖。結果表明，流速的微小變化并不影響各雜質峰與主成分峰的分離。

2.7 樣品測定及限度確定

取8批次布洛芬顆粒樣品進行測定。除與對照溶液色譜圖中溶劑峰相近的色譜峰外，本品的有關物質總和均不大于對照溶液主峰面積（1%），因此，確定本品的有關物質限度不得大于1%。

3 討論

由于本品的國家標準中無有關物質檢查項目，參考美國藥典布洛芬有關物質測定方法及相關文獻，本實驗采用HPLC法進行本品的有關物質研究，實驗結果表明該色譜條件專屬性好，空白輔料及強制降解實驗中各雜質峰與主成分峰均有良好的分離；布洛芬的檢測限為0.06ng；室溫條件下，18h內布洛芬顆粒對照溶液及供試品溶液均較穩定；且在此檢測條件下，色譜柱、柱溫、流動相及流速的微小變化對各雜質峰與主峰的分離幾乎無影響。

本實驗建立了HPLC 測定布洛芬顆粒有關物質的方法，該色譜方法能夠使各雜質與主峰得到良好的分離，方法專屬性好，簡單可靠，分離度好，可以作為布洛芬顆粒有關物質的檢測方法。

參考文獻：

[1]賀秀婷，翟光喜，等.HPLC法測定布洛芬緩釋膠囊有關物質[J].藥學研究，2013Vol.32， NO.2： 85-87.