不同果汁飲料對離體乳牙釉質表面超微結構及鈣磷溶出量的影響

黃翔　鄭燕丹　陳凱

【摘要】 目的 探討不同果汁飲料對離體乳牙釉質形態學的改變及對乳牙釉質脫礦程度的影響。方法 60顆無齲壞離體乳牙， 分三組浸泡于3種不同的果汁飲料中（橙汁組、蘋果汁組、葡萄汁組）， 每組20顆；另取10顆無齲壞離體乳牙浸泡于礦泉水中作為對照組， 四組均置于36.5 ℃恒溫箱中， 浸泡25 h， 每5小時換1次浸泡液。采用pH計測量不同果汁飲料的pH值；掃描電鏡（SEM）觀察各組離體乳牙處理前后牙釉質表面超微結構的改變；并應用化學分析法測量各組處理乳牙后飲料中的鈣、磷溶出含量。結果 橙汁組、蘋果汁組和葡萄汁組經處理后乳牙表面均有不同程度的改變， 牙齒表面均有色素沉著， 顏色發生一定的改變， 且隨著浸泡時間的延長， 牙齒變色加重。其中橙汁組變為橙黃色， 蘋果汁組變為淺綠色， 葡萄汁組變為深紫色。對照組乳牙牙釉質表面結構光滑， 結構致密， 未見凹陷缺損。橙汁組處理后， 牙齒表層釉柱不均勻斷裂， 局部區域斷裂消失， 牙齒表面有零星的小凹陷；蘋果汁組處理后， 牙釉質呈蜂窩狀結構， 釉中心遭到嚴重破壞， 表面有比較深的小凹陷， 甚至加大連接成片；葡萄汁組處理后， 表面形態不規則， 組織結構疏松， 可見軟質懸浮。對照組、橙汁組、蘋果汁組、葡萄汁組初始pH值分別為（6.32±0.09）、（3.75±1.01）、（2.94±1.05）、（4.01±1.02）。對照組、葡萄汁組、橙汁組、蘋果汁組的pH值依次降低（P<0.05）。果汁飲料處理乳牙25 h后， 橙汁組、蘋果汁組、葡萄汁組的鈣總溶出量（12.73±1.44）、（15.65±1.47）、（6.73±1.45）mmol/L， 磷總溶出量（10.41±1.43）、（13.19±1.45）、（7.15±

1.39）mmol/L較對照組的鈣總溶出量（3.63±1.37）、磷總溶出量（5.46±1.39）mmol/L均顯著升高（P<0.01）， 且蘋果汁組的鈣、磷溶出量最高。結論 橙汁、蘋果汁、葡萄汁飲料均會對乳牙釉質酸蝕脫礦， 對牙釉質表面造成一定程度的損害， 以蘋果汁的損害作用最為明顯。

【關鍵詞】 果汁飲料； 乳牙； 牙釉質； 脫礦； 超微結構； 鈣； 磷； 溶出量

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.35.020

【Abstract】 Objective To investigate influence by different fruit drink on in vitro deciduous tooth enamel morphological changes and demineralization degree. Methods A total of 60 in vitro deciduous teeth without carious lesion were divided into three groups with different fruit drink （orange juice group， apple juice group and grape juice group）， with 20 teeth in each group. Another 10 teeth without carious lesion were taken into mineral water as control group. All the four groups were placed in calorstat 36.5℃ for 25 h， with soak solution changed each 5 hours. pH values of differenct fruit drinks were detected by pH paper. Tooth enamel ultrastructure change before and after processing of in vitro deciduous teeth in three groups was observed by scanning electron microscope（SEM）， and dissolving-out quantity of calcium and phosphorus after processing of deciduous teeth in three groups was measured by chemical analysis. Results After processing， orange juice group， apple juice group and grape juice group had different degrees of change in deciduous teeth surface， with hyperpigmentation and changed color in tooth surface， and tooth discoloration is aggravated as the extension of immersion time. The orange juice group changed for orange-yellow， apple juice group changed for reseda， and grape juice group changed for modena. The control group had smooth and dense structured enamel surface without fovea and defect. After processing， tooth surface enamel fiber had uneven fracture in orange juice group， with local fracture disappeared and sporadic small fovea could be seen； enamel fiber had honeycomb structure in apple juice group， and enamel center was heavily damaged with deep fovea and even connected into piece； irregular surface morphology， loose organization structure and soft suspension could be seen in grape juice group. The control group， orange juice group， apple juice group and grape juice group had pH value respectively as （6.32±0.09）， （3.75±1.01）， （2.94±1.05） and （4.01±1.02）. The control group， grape juice group， orange juice group and apple juice group had decreased pH value one after another （P<0.05）. After deciduous teeth processed with fruit drink for 25 h， orange juice group， apple juice group and grape juice group had total dissolving-out quantity of calcium as （12.73±1.44），

（15.65±1.47） and （6.73±1.45） mmol/L， and total dissolving-out quantity of phosphorus as （10.41±1.43）， （13.19±1.45） and （7.15±1.39） mmol/L， which were all higher than total dissolving-out quantity of calcium as （3.63±1.37） mmol/L and total dissolving-out quantity of phosphorus as （5.46±1.39） mmol/L in the control group （P<0.01）， and apple juice group had highest dissolving-out quantity of calcium and phosphorus. Conclusion Orange juice， apple juice and grape juice all can acid etching and demineralize deciduous tooth enamel and induce certain degree of damage to the enamel surface， and apple juice is the worst one.

【Key words】 Fruit drink； Deciduous teeth； Tooth enamel； Demineralization； Ultrastructure； Calcium； Phosphorus； Dissolving-out quantity

齲病是兒童常見的多發病， 會引發口腔炎癥、胃腸消化不良等。隨著經濟水平的提高， 人們對于果汁飲料的消耗量越來越大， 大多飲料均呈酸性， 當酸直接作用于牙釉質時， 使釉質中的羥磷灰石結晶溶解， 破壞牙釉質超微結構， 造成牙釉質酸蝕脫礦[1]。飲料的pH越低， 浸泡時間越長， 對牙釉質的損傷就越大， 脫礦效果越顯著[2]。本研究主要探討橙汁、蘋果汁、葡萄汁3種不同果汁飲料對兒童離體乳牙釉質超微結構的改變及對乳牙釉質脫礦的影響， 現報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 選取2015年7月～2016年6月本院口腔科拔除的無齲壞離體乳牙60顆， 分三組浸泡于3種不同的果汁飲料中（橙汁組、蘋果汁組、葡萄汁組）， 每組20顆；另取10顆無齲壞離體乳牙浸泡于礦泉水中作為對照組。納入標準：患兒年齡5～7歲， 全身健康狀況良好；口腔衛生良好；均因替牙期乳牙松動或乳牙滯留就診；肉眼觀察牙冠完整、無齲壞、無齲壞脫礦；釉質發育良好；均截去牙根， 僅保留牙冠部分。選取市售橙汁、蘋果汁、葡萄汁飲料以及礦泉水作為實驗飲料， 均于本地超市購買。

1. 2 方法

1. 2. 1 牙齒標本的制備 用牙科手機去除牙根部， 牙冠進行超聲清洗， 磨去釉質表面菌斑及色素。然后將牙齒標本在無水乙醇中浸泡48 h脫水， 超聲清洗3 min， 去除標本表面的油脂和食物殘渣， 用清水浸泡沖洗， 置于密閉干燥的無菌容器內烘干， 4 ℃保存備用（所有標本均在拔后1周內使用）。

1. 2. 2 實驗分組及處理 將60顆無齲壞離體乳牙隨機分為三組， 各20顆， 各組牙齒標本均用蒸餾水清洗， 每顆牙的冠根斷面采用抗酸透明指甲油覆蓋。分別浸泡于3種不同的果汁飲料中（橙汁、蘋果汁、葡萄汁）；另取10顆無齲壞離體乳牙浸泡于礦泉水中作為對照組， 均放置于（37.0±0.5 ）℃恒溫箱內， 浸泡25 h， 每5小時換1次浸泡液。

1. 3 觀察指標

1. 3. 1 不同飲料pH值的測定 所有果汁飲料均在常溫下開瓶15 min內取50 ml， 采用HANNA pH計測量各浸泡液的pH值， 重復測量3次， 取平均值。

1. 3. 2 不同飲料處理后乳牙釉質SEM鏡下超微結構觀察 將牙齒標本清洗、梯度酒精脫水、干燥等處理后， 采用SEM觀察不同種類果汁飲料處理后的牙釉質表面超微結構變化， 并保存影像資料。

1. 3. 3 不同飲料處理后鈣磷溶出量的檢測 收集各組不同時間段處理后的飲料各1 ml， 采用化學分析法測量不同果汁飲料浸泡乳牙不同時間后的鈣、磷溶出量， 應用全自動生化測量儀檢測。

1. 4 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 肉眼觀察 橙汁組、蘋果汁組和葡萄汁組經處理后乳牙表面均有不同程度的改變， 牙齒表面均有色素沉著， 顏色發生一定的改變， 且隨著浸泡時間的延長， 牙齒變色加重。其中橙汁組變為橙黃色， 蘋果汁組變為淺綠色， 葡萄汁組變為深紫色。

2. 2 SEM觀察 對照組乳牙牙釉質表面結構光滑， 結構致密， 未見凹陷缺損。橙汁組處理后， 牙齒表層釉柱不均勻斷裂， 局部區域斷裂消失， 牙齒表面有零星的小凹陷；蘋果汁組處理后， 牙釉質呈蜂窩狀結構， 釉中心遭到嚴重破壞， 表面有比較深的小凹陷， 甚至加大連接成片；葡萄汁組處理后， 表面形態不規則， 組織結構疏松， 可見軟質懸浮。

2. 3 四組飲料pH值情況 對照組、橙汁組、蘋果汁組、葡萄汁組初始pH值分別為：（6.32±0.09）、（3.75±1.01）、（2.94±

1.05）、（4.01±1.02）。對照組、葡萄汁組、橙汁組、蘋果汁組的pH值依次降低（P<0.05）。

2. 4 四組飲料處理乳牙25 h后鈣、磷總溶出量情況 果汁飲料處理乳牙25 h后， 橙汁組、蘋果汁組、葡萄汁組的鈣總溶出量及磷總溶出量較對照組均顯著升高（P<0.01）， 且蘋果汁組的鈣、磷溶出量最高。見表1。

3 討論

隨著人們生活水平的提升， 飲料種類不斷增多， 市售飲料大多均呈酸性， 且pH值比較低， 大部分果汁飲料的pH值約為2.2～4.9。飲料中的糖分、含量不同， 脫礦能力也不同[3， 4]。本研究結果顯示， 3種不同飲料pH值均低于釉質脫礦的臨界值5.0～5.5， 且蘋果汁飲料的pH值最低， 葡萄汁飲料的pH最高；飲料pH值低直接造成牙齒表面酸蝕、破壞， 乳牙釉質中含有較多不穩定型的磷酸鈣鹽， 在酸性環境下發生化學反應， 損害牙釉質表面結構[5-9]。本研究中SEM結果顯示， 橙汁、蘋果汁、葡萄汁飲料對兒童乳牙釉質均有不同程度的損害：對照組牙釉質表面光滑， 結構致密；而橙汁組、蘋果汁組及葡萄汁組處理后的乳牙釉質表面形態不規則， 呈松解狀， 釉柱溶解， 組織結構疏松， 表面出現明顯的小凹陷， 與彭杰等[7]研究結果相似， 其中蘋果汁飲料對牙釉質的損傷最明顯， 小凹陷較深且多， 甚至呈現片狀， 可能是由于蘋果汁飲料的pH最低， 對牙釉質的酸蝕作用最明顯。

不同果汁飲料均可導致乳牙釉質不同程度的脫礦， 使牙釉質鈣、磷溶出。飲料與牙釉質接觸后， 酸可直接進入釉質裂隙， 引起釉質中的羥基磷灰石晶體溶解， 造成牙釉質脫礦， 但鈣磷溶出量因果汁飲料種類的不同而有差異[10， 11]。本研究結果中， 3種不同果汁飲料處理牙釉質塊后飲料中鈣、磷離子濃度均有升高， 提示牙釉質中的鈣、磷均有一定程度的溶出。蘋果汁組鈣、磷總溶出量最高， 且顯著高于對照組， 提示蘋果汁飲料所導致的牙釉質脫礦最為嚴重， 可能由于其pH最低， 直接導致牙釉質脫礦， 與上述SEM觀察結果對應， 且與鈕曉勇等[9]研究結果相似。對照組中礦泉水pH值接近中性， 鈣、磷溶出不明顯。

綜上所述， 橙汁、蘋果汁及葡萄汁3種果汁飲料對乳牙釉質均存在不同程度的影響， 其中蘋果汁飲料的pH值最低， 對乳牙釉質的酸蝕作用最明顯， 對應其處理后的乳牙釉質表面的超微結構破壞及脫礦程度最嚴重， 其次依次是橙汁飲料和葡萄汁飲料。生活中應加強宣傳教育工作， 指導兒童合理飲用果汁飲料， 保持良好的口腔衛生， 減輕兒童齲病及酸蝕癥的發生。

參考文獻

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[收稿日期：2016-12-09]