甲狀腺癌組織中神經細胞黏附分子、β-catenin的表達及意義

彭焱，吳翠嬌，向桂玲

(1青島大學醫學院，山東青島266021；2臨沂市人民醫院)

甲狀腺癌組織中神經細胞黏附分子、β-catenin的表達及意義

彭焱1，2，吳翠嬌1，向桂玲1

(1青島大學醫學院，山東青島266021；2臨沂市人民醫院)

目的 觀察甲狀腺癌組織中神經細胞黏附分子(NCAM)、β-catenin的表達，探討其在甲狀腺癌發生發展中的作用。方法 取70例甲狀腺癌組織和36例甲狀腺良性病變組織，采用免疫組化SP法檢測NCAM、β-catenin表達，分析NCAM、β-catenin表達與患者臨床病理特征的關系。結果 NCAM在甲狀腺癌組織中的陽性表達率低于甲狀腺良性病變組織，β-catenin在甲狀腺癌組織中的異常表達率高于甲狀腺良性病變組織(P均<0.05)。甲狀腺癌組織中NCAM陽性表達率和β-catenin異常表達率與患者的性別、年齡、腫瘤直徑及病理分期均無關(P均>0.05)，NCAM陽性表達率與腫瘤淋巴結是否轉移有關(P<0.05)。甲狀腺癌各組織學類型中NCAM、β-catenin異常表達率比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。甲狀腺癌組織中NCAM的表達與β-catenin呈負相關(r=-0.025，P<0.05)。結論 甲狀腺癌組織中NCAM和β-catenin的異常表達共同參與了甲狀腺癌的發生發展過程，可能成為判斷甲狀腺癌惡性程度、轉移及預后的指標。

甲狀腺癌；神經細胞黏附分子；β-catenin

甲狀腺癌是頭頸部最常見的惡性腫瘤，近年來甲狀腺癌發病率呈上升趨勢，文獻報道以每年3%的速度遞增[1]。典型的甲狀腺癌根據其組織的砂粒體、核特征、纖維化腫瘤等可確診，但對于特殊組織學類型、形態不典型的病變及微小癌的診斷存在困難，且與良性病變出現的乳頭狀增生極易發生混淆。其中部分難治性甲狀腺癌如髓樣癌、未分化癌等通過手術和131I、抑制TSH治療難以獲得良好的治療效果，而放療和化療對于甲狀腺癌的療效均較差。神經細胞黏附分子(NCAM)在神經細胞的發育過程中具有重要作用，其表達缺失可能與某些惡性腫瘤的轉移潛能和預后差密切相關。β-catenin最早作為黏附因子被發現，其主要介導細胞間黏附和參與基因的表達。本研究通過檢測甲狀腺癌及甲狀腺良性病變組織中NCAM、β-catenin的表達，探討其在甲狀腺癌發生發展過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2008年1月～2015年12月在我院行手術治療的甲狀腺癌患者70例(觀察組)，男22例、女48例，年齡20～71歲、平均40歲。術前未行放化療及其他生物學治療。其中甲狀腺乳頭狀癌33例，甲狀腺濾泡癌15例，甲狀腺髓樣癌12例，未分化甲狀腺癌10例。另取20例結節性甲狀腺腫和16例甲狀腺腺瘤作為對照組。

1.2 NCAM、β-catenin檢測 將標本用石蠟包埋，連續4 μm厚切片。采用免疫組化SP法檢測NCAM、β-catenin水平，具體操作步驟按試劑說明書進行。切片抗原修復采用高壓鍋高溫修復，封閉。滴加一抗(鼠抗人CD56稀釋度為1∶65，鼠抗人β-catenin稀釋度為1∶65，均為Abcam公司產品)，4 ℃過夜，滴加即用型生物素化二抗，37 ℃孵育20 min，隨即滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，37 ℃孵育20 min，DAB顯色，蘇木精復染，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察。以封閉血清代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定 NCAM以細胞膜染成棕黃色為陽性，陽性細胞數>10%為陽性，≤10%為陰性。β-catenin以細胞質、細胞核或細胞膜上出現棕黃染色為陽性，參照文獻[2]標準，從細胞膜、細胞質、細胞核三方面判斷β-catenin的分布特征：細胞膜陽性表達細胞百分數>70%為正常表達，反之為表達減弱或缺失；胞質或胞核陽性表達細胞百分數>10%為異位表達；表達減弱或缺失以及異位表達統稱為異常表達。每張切片鏡下隨機選取10個視野(×200)，每個視野計數100個甲狀腺濾泡上皮細胞，計算各視野中陽性細胞所占百分比，取平均值。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。率的比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman相關。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組NCAM陽性表達率、β-catenin異常表達率比較 觀察組NCAM陽性3例，陽性表達率為4.26%；對照組NCAM陽性33例，陽性表達率為91.67%。觀察組NCAM陽性表達率低于對照組(P<0.05)。觀察組β-catenin異常表達58例，異常表達率為82.56%；對照組β-catenin異常表達3例，異常表達率為8.33%。觀察組β-catenin異常表達率高于對照組(P<0.05)。

2.2 甲狀腺癌組織中NCAM、β-catenin表達與患者臨床病理特征的關系 觀察組NCAM陽性表達率與淋巴結轉移有關(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤直徑及病理分期均無關(P均>0.05)；β-catenin異常表達率與性別、年齡、腫瘤直徑、病理分期、淋巴結轉移均無關(P均>0.05)。見表1。

表1 NCAM、β-catenin表達與甲狀腺癌臨床病理特征的關系

2.3 甲狀腺癌組織中NCAM與β-catenin表達的相關性 67例NCAM陰性的甲狀腺癌組織中，β-catenin陽性55例(82%);58例β-catenin陽性的甲狀腺癌組織中,NCAM陰性55例(95%)。相關性分析顯示，甲狀腺癌組織中NCAM與β-catenin的表達呈負相關(r=-0.025，P<0.05)。

3 討論

甲狀腺癌多起病隱匿、進展緩慢，初期癥狀和體征與一些良性腫瘤無明顯的區別，極易誤診。尋找特異性腫瘤標記物，建立可靠、可行的檢測甲狀腺癌的手段，是甲狀腺癌研究的熱門領域[3]。從分子水平認識細胞信號傳導通路異常在甲狀腺癌細胞發生發展、侵襲轉移中的作用，可以為甲狀腺癌的防治提供新的思路。

NCAM屬于免疫球蛋白超家族，在來源于神經外胚層的細胞和組織中廣泛存在。NCAM抗原正常表達于神經元、星形細胞、NK細胞和少數活化的T淋巴細胞等，可對腫瘤細胞的遷移和腫瘤相關淋巴管的形成產生影響[4]。El Demellawy等[5]報道，NCAM在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達呈陰性，而陽性表達于除癌以外的多數病變和良性腫瘤，其特異性接近100%。Ozolins等[6]發現，NCAM在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達呈陰性，僅在周圍的正常組織中出現表達，而在甲狀腺腺瘤和甲狀腺腫中表達呈陽性；認為NCAM可以用于輔助鑒別甲狀腺良惡性病變。胡孟鈞等[7]研究表明，NCAM在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性率為16%，在良性乳頭狀增生中的陽性率為68%。Scarpino等[8]研究發現，NCAM在正常甲狀腺組織和良性甲狀腺病變中多數有表達，但在多數甲狀腺癌中表達降低。進一步的研究表明CD56的失表達可作為甲狀腺乳頭狀癌的鑒別診斷要點[9，10]。本研究顯示，NCAM在甲狀腺癌組織中70例樣本僅3例陽性，陽性表達率為4.26%，而在結節性甲狀腺腫和甲狀腺腺瘤組織中陽性表達率高達91.67%，證實NCAM在甲狀腺癌中存在表達缺失的現象。NCAM陽性表達與腫瘤淋巴結轉移相關，而與性別、年齡、腫瘤直徑及病理分期無關，表明在淋巴結轉移的甲狀腺癌中NCAM陽性表達率更低，可能與甲狀腺癌轉移潛能和預后差相關。

甲狀腺癌的發生、發展和浸潤是一個涉及多分子相互作用的多階段的復雜過程。在此過程中，不同功能的基因對細胞產生的影響促使細胞癌變，加速腫瘤發展，其中原癌基因的過度表達、腫瘤抑制基因的突變等均與甲狀腺癌發生、發展密切相關[11]。β-catenin廣泛存在于各類型細胞，如內皮細胞、成纖維細胞、成骨細胞，對這些細胞的增殖、分化和凋亡等方面有重要的調節。β-catenin基因是原癌基因，其編碼的β-catenin蛋白與胞膜上的鈣黏蛋白E相結合，共同調節細胞之間的的同質性黏附，在Wnt經典信號途徑中起著樞紐作用[12]。楊鷺等[13]研究表明，β-catenin在許多惡性腫瘤如乳腺癌中表達上調，且與不良預后相關。劉瑞等[14]的小鼠黑色素瘤B16-F0細胞增殖實驗證實，NCAM能夠通過調控β-catenin促進小鼠黑色素瘤細胞增殖，NCAM對β-catenin信號通路的影響完全獨立于經典的Wnt信號通路。NCAM、β-catenin在甲狀腺侵襲轉移方面具有協同促進作用，可能存在一條傳導通路，使NCAM通過調控β-catenin來掌控黑色素瘤細胞的增殖。賈金良等[15]報道，分化型甲狀腺癌組織中的β-catenin蛋白表達率為67.31%，明顯高于正常甲狀腺組織的20.00%。本研究通過免疫組化法檢測甲狀腺癌組織與甲狀腺良性腫瘤中的β-catenin蛋白表達，結果顯示甲狀腺癌組織中β-catenin的異常表達率高于結節性甲狀腺腫和甲狀腺腺瘤組織，提示β-catenin可能對甲狀腺癌的浸潤、轉移有促進作用。β-catenin異常表達率在腫瘤淋巴結有無轉移及病理分期之間差異無統計學意義；其在未分化甲狀腺癌中異常表達率高于甲狀腺癌其他組織學類型，但差異也沒有統計學意義，需要加大樣本量進一步研究。進一步分析NCAM與β-catenin的相關性發現，二者表達呈負相關。這兩種蛋白表達的反向平衡現象，提示NCAM、β-catenin在甲狀腺癌的發生、浸潤及轉移中關系密切。

綜上所述，甲狀腺癌組織中NCAM陽性表達和β-catenin蛋白異常表達共同參與了甲狀腺癌的發生發展過程，可能成為判斷甲狀腺癌惡性程度、轉移及預后的指標。

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吳翠嬌(E-mail: wucjzr@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.06.035

R736.1

B

1002-266X(2017)06-0098-03

2016-10-15)