宮頸癌組織中S6K1和S6K2的表達及其臨床意義

韓 冰 趙國軍 蘭素偉 吉 潔 付子毅

(承德醫學院附屬醫院婦科，河北 承德 067000)

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宮頸癌組織中S6K1和S6K2的表達及其臨床意義

韓 冰 趙國軍 蘭素偉 吉 潔 付子毅1

(承德醫學院附屬醫院婦科，河北 承德 067000)

目的 探討宮頸癌組織中核糖體蛋白S6激酶(S6K)1和S6K2的表達及其臨床意義。方法 經手術切除的宮頸癌組織94例、正常宮頸組織52例及宮頸上皮內瘤樣病變(CIN)組織103例(CINⅠ 33例、CINⅡ 29例、CIN Ⅲ 41例)，采用免疫組化法檢測以上組織中S6K1和S6K2的表達情況，分析兩者表達與宮頸癌臨床病理參數的關系(年齡、淋巴結轉移、分化程度、FIGO分期、脈管瘤栓、深肌層浸潤及宮旁浸潤)，采用單因素分析和多因素分析影響宮頸癌預后的因素。結果 宮頸癌組織中S6K1和S6K2陽性表達率均高于正常宮頸組織和CIN組織(P<0.05)；正常宮頸組織和CIN組織中S6K1、S6K2陽性表達率差異無統計學意義(P>0.05)。S6K1表達與分化程度和FIGO分期均有關(P<0.05)，而S6K2表達與淋巴結轉移、分化程度、FIGO分期和深肌層浸潤均有關(P<0.05)；S6K1、S6K2陽性者的5年生存率均低于陰性表達者(P<0.05)。多因素分析發現，淋巴結轉移、分化程度、FIGO分期、宮旁浸潤及S6K1和S6K2表達為影響宮頸癌預后的獨立因素。結論 宮頸癌組織中的S6K1和S6K2為高表達，均與分化程度和FIGO分期有關，且S6K1、S6K2陽性者的預后較差，可作為預測預后的影響因素。

宮頸癌；核糖體蛋白S6激酶(S6K)1；S6K2

宮頸癌的發生發展是一個多階段、多步驟的復雜過程，其中涉及多個基因的異常表達〔1〕。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，可通過調控必要蛋白質的翻譯過程來影響細胞生長、增殖及代謝〔2〕。mTOR是一種調節多個細胞功能的關鍵效應子，其在多種腫瘤組織中表達升高，且其參與的信號通路處于激活狀態。由于mTOR參與了多種致癌細胞通路，故探討mTOR的調控網絡及其下游效應因子的表達在癌癥靶向治療中有重要意義〔3,4〕。核糖體蛋白S6激酶(S6K)1和S6K2是mTOR的重要底物，近年來發現兩者參與了惡性腫瘤的發生發展〔5,6〕，但在宮頸癌中的表達模式及作用尚不清楚。本研究旨在探討宮頸癌組織中S6K1和S6K2的表達情況及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集承德醫學院附屬醫院2011年1月至2014年6月經手術切除的宮頸癌組織94例、正常宮頸組織52例及宮頸上皮內瘤樣病變(CIN)組織103例。宮頸癌組織來源于接受手術治療的94例宮頸癌患者，均為鱗癌，年齡27～61歲，中位年齡42.5歲，均接受廣泛性全子宮切除術加盆腔淋巴結清掃術，術后接受盆腔常規外照射放療，總劑量45～50 Gy；正常宮頸組織來源于同期52例子宮肌瘤手術者，年齡31～60歲，中位年齡43.0歲；103例CIN組織均經病理活檢確診，其中CINⅠ 33例、CINⅡ 29例和CIN Ⅲ 41例，年齡30～58歲，中位年齡41.0歲。

1.2 試劑 兔抗人S6K1、S6K2 多克隆抗體(工作濃度為1∶5 000)均購自美國Abcam公司，免疫組化試劑盒及DAB顯色試購自武漢博士德生物公司，其他輔助用液及材料均由本院病理科專業技術人員配制。

1.3 免疫組化SP法 取病理科保存的術后石蠟包埋組織進行切片，將石蠟切片脫蠟至水后，進行微波爐抗原熱修復，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3次，每張切片滴加適當比例的一抗或一抗工作液，37℃孵育1～2 h或4℃過夜，PBS沖洗3次，5 min/次，每張切片滴加適量新鮮生物素標記的二抗，室溫孵育30 min，PBS沖洗3次，5 min/次，DAB顯色(顯微鏡下控制顯色時間)，依次經蘇木素復染、脫水及二甲苯透明，中性樹膠封片。陽性對照選已訂購的陽性對照片，陰性對照為PBS代替一抗。

1.4 結果判斷標準 光鏡下觀察整個切片，每例切片隨機選取5個高倍鏡視野進行結果判定。免疫組化結果判定采用雙盲法，即由兩位資深病理醫師對免疫組化結果進行觀察及評估，當出現不一致時由雙方協商確定。S6K1和S6K2的陽性染色為出現棕黃或棕褐色顆粒。采用染色強度×染色細胞百分率綜合記分方式評估：陽性細胞數≤5%計0分，6%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，>75%計4分；(2)按染色深淺：無陽性細胞計0分，黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分。將兩者得分相乘：0分為-，1～2分為+，3～4分為，5～12分為；設+～為陽性。

1.5 評價指標 (1)比較宮頸癌組織、正常宮頸組織及CIN組織中的S6K1和S6K2陽性表達率情況；(2)收集以上患者的一般資料，如年齡、淋巴結轉移、分化程度、FIGO分期、脈管瘤栓、深肌層浸潤及宮旁浸潤，分析S6K1和S6K2表達與宮頸癌臨床病理參數的關系；(3)采用電話或門診的方式進行隨訪預后情況，采用單因素分析和多因素分析影響宮頸癌預后的因素。

1.6 統計學處理 采用SPSS20.0軟件進行χ2檢驗，采用Kaplan-Meier法進行生存分析并行Log-rank檢驗，采用Cox比例風險模型分析影響預后的因素。

2 結 果

2.1 S6K1表達情況 S6K1陽性表達定位于細胞質宮頸癌組織中的S6K1陽性表達率為70.21%(-28例，+15例，29例，22例)，高于正常宮頸組織(36.54%，其中-33例，+8例，7例，4例)和CIN組織(CIN Ⅰ 36.36%，其中-21例，+3例，7例，2例；CIN Ⅱ 34.48%，其中-19例，+4例，3例，3例；CIN Ⅲ 39.02%，其中-25例，+10例，4例，2例)(P<0.05)；正常宮頸組織和CIN組織中S6K1陽性表達率的差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 S6K2表達情況 S6K2陽性表達定位于細胞質和細胞膜。宮頸癌組織中的S6K2陽性表達率為62.77%(-35例，+26例，19例，14例)，高于正常宮頸組織(21.15%，其中-41例，+4例，5例，2例)和CIN組織(CIN Ⅰ 18.18%，其中-27例，+2例，3例，1例；CIN Ⅱ 20.69%，-23例，+4例，2例，0例；CIN Ⅲ 21.95%，其中-32例，+5例，3例，1例)(P<0.05)；正常宮頸組織和CIN組織中S6K2陽性表達率的差異無統計學意義(P>0.05)。

2.3 宮頸癌組織S6K1表達與臨床病理參數的關系 S6K1表達與年齡、淋巴結轉移、脈管瘤栓、深肌層浸潤及宮旁浸潤均無關(P>0.05)，與分化程度和FIGO分期均有關(P<0.05)，其中低分化者的S6K1陽性表達率高于中、高分化者，FIGO分期Ⅱa期者的S6K1陽性表達率高于Ⅰb期(均P<0.05)。見表1。

表1 宮頸癌組織S6K1表達與臨床病理參數的關系〔n(%),n=94〕

2.4 宮頸癌組織S6K2表達與臨床病理參數的關系 S6K2表達與年齡、脈管瘤栓及宮旁浸潤均無關(P>0.05)，與淋巴結轉移、分化程度、FIGO分期和深肌層浸潤均有關(P<0.05)，其中有淋巴結轉移者的S6K2陽性表達率，高于無淋巴結轉移者，低分化者陽性表達率，高于中、高分化者(P<0.05)，FIGO分期Ⅱa期者陽性表達率，高于Ⅰb期，有深肌層浸潤者的陽性表達率，高于無深肌層浸潤者(P<0.05)。見表1。

2.5 影響宮頸癌患者預后的單因素、多因素分析 單因素分析發現，淋巴結轉移、分化程度、FIGO分期、脈管瘤栓、深肌層浸潤、宮旁浸潤及S6K1和S6K2表達情況均與宮頸癌患者的預后有關，其中有淋巴結轉移、低分化程度、FIGO Ⅱa期、有脈管瘤栓、有深肌層浸潤、有宮旁浸潤及S6K1和S6K2陽性者的5年生存率較低，差異有統計學意義(P<0.05)。經多因素分析發現，淋巴結轉移、分化程度、FIGO分期、宮旁浸潤及S6K1和S6K2表達為影響宮頸癌預后的獨立因素。見表2、表3。

表2 影響宮頸癌患者預后的單因素分析(%)

表3 影響宮頸癌患者預后的多因素分析

3 討 論

作為mTOR的重要底物，S6K1和S6K2的氨基酸序列中有70%以上的同源性，而且兩者催化結構域有更高的序列同源性(>83%)〔7〕。兩者在域結構及多個磷酸化位點上序列保守，表明在哺乳動物中S6K1和S6K2這兩個異構體位基因復制的結果〔8〕。盡管兩者均可將40S核糖體蛋白S6激酶磷酸化，但仍被認為具有不同的生物學功能〔9〕。與S6K1相比，S6K2包含一個富含脯氨酸的序列，該序列與PI3K的p85亞基中的一個序列同源，可與SH3結構域的蛋白質相互作用〔10〕。編碼S6K1和S6K2的基因分別位于染色體17q21-23和11q13區域，在多種惡性腫瘤中處于擴增狀態〔11〕。研究發現S6K1和S6K2過表達與乳腺癌患者的不良預后有關〔12〕，抑制S6K1表達可增強Bcl-2/Bcl-xL活性缺失誘導乳腺癌細胞凋亡〔13〕。此外，S6K1還參與了EGFR野生型NSCLC細胞對厄洛替尼的敏感性調節〔14〕，以上提示S6K1和S6K2在惡性腫瘤發生發展中發揮癌基因的作用。

本研究結果表明S6K1和S6K2可能在宮頸癌發生發展中發揮癌基因的作用。Pérez-Tenorio等〔12〕研究發現乳腺癌中S6K1和S6K2基因位于的染色體17q21-23和11q13區域中多為擴增狀態，且同屬此區域的HER2和CCND1是重要的癌基因。本研究提示腫瘤負荷越大時，編碼S6K1和S6K2的基因擴增越明顯，最終導致兩者蛋白表達升高。此外，S6K2還與淋巴結轉移和深肌層浸潤有關，以上表明S6K2與宮頸癌的侵襲轉移有關，可能原因為盡管S6K1和S6K2具有較高的同源性，但在具體生物學功能上仍有差異，下一步將采用分析生物學手段驗證兩者在調控侵襲轉移上的作用模式。另一方面本研究的樣本量較少也可能是導致兩者差異的一個原因。

降低復發轉移、提高生存獲益是宮頸癌治療的一個目標〔15〕。本研究通過對隨訪資料分析發現S6K1和S6K2與宮頸癌患者的預后有關，S6K1、S6K2表達是宮頸癌預后的獨立因素，盡管S6K1與復發轉移等臨床病理參數無關，但由于其與S6K2有較高的同源性，在功能上有一個重疊〔7,11〕，推測可能通過間接的方式來影響宮頸癌細胞的侵襲轉移。以上結果表明檢測宮頸癌組織中S6K1和S6K2的表達情況具有一定的臨床價值，可用于宮頸癌患者預后的預測。本研究為小樣本探索性研究，還需要進一步開展大樣本的臨床驗證。

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〔2016-12-23修回〕

(編輯 滕欣航)

國家自然科學基金(81302304)

吉 潔(1978-)，女，主治醫師，主要從事婦科研究。

韓 冰(1976-)，女，主治醫師，主要從事婦科研究。

R737.33

A

1005-9202(2017)09-2182-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.09.045

1 南京醫科大學附屬南京市婦幼保健院醫學研究中心