火祭離體快繁技術(shù)研究

陶佩琳++沈蘇婷++董帆

摘要 火祭作為多肉市場(chǎng)上一種常見(jiàn)的觀(guān)葉植物，觀(guān)賞價(jià)值高，需求量大。本研究以火祭嫩葉為外植體，進(jìn)行組織培養(yǎng)與快速繁殖研究。結(jié)果表明：誘導(dǎo)葉片愈傷組織的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，愈傷誘導(dǎo)率達(dá)85.0%；最佳分化增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，增殖系數(shù)為8.8；最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.2 mg/L+1.5 g/L活性炭，生根率為86.7%。

關(guān)鍵詞 多肉植物；火祭；離體快繁

中圖分類(lèi)號(hào) S682.33 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）07-0155-02

火祭又名秋火蓮，為景天科青鎖龍屬多年生匍匐肉質(zhì)草本，植株叢生，莖四棱棒狀；具淺綠色橢圓形葉，交互對(duì)生，緊密排列呈蓮座狀。在光照充足的條件下，其莖、葉緣及葉的大部分轉(zhuǎn)為紅色，特別是在晚秋至初春的冷涼季節(jié)，葉色更鮮艷，給人以蓬勃向上的熱情活力之感，具有較高的觀(guān)賞價(jià)值。火祭常以單株或組合盆栽的形式，被廣泛應(yīng)用于室內(nèi)外環(huán)境裝飾[1]。

目前，繁殖火祭以扦插為主，也可播種、分株繁殖，但都不能在短期內(nèi)提供大量種苗，滿(mǎn)足市場(chǎng)需要。本試驗(yàn)以較高的增殖系數(shù)和較短的生產(chǎn)周期作為主要考量因素，利用火祭嫩葉作為外植體，對(duì)其離體快繁技術(shù)進(jìn)行了研究，以期為實(shí)現(xiàn)其工廠(chǎng)化育苗提供技術(shù)支持，也為其他多肉植物的組培生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 外植體選擇及消毒

選擇生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的火祭植株，取其嫩葉作為外植體。用洗衣粉水振蕩清洗干凈后，再用流水沖洗20 min，除去表面污物，之后轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)上進(jìn)行表面消毒。先用75%酒精浸泡30 s，再用加有吐溫的無(wú)菌水沖洗1次；之后用0.1%升汞消毒5～6 min，用無(wú)菌水沖洗5～7遍。消毒及沖洗過(guò)程中要不斷搖動(dòng)，使藥劑與材料充分接觸，消毒徹底。將消毒后的材料置于無(wú)菌濾紙上，備用。

1.2 愈傷組織誘導(dǎo)

將嫩葉切成1 cm見(jiàn)方的小塊，接種于含不同濃度6-BA（0.5、1.0、2.0 mg/L）和 NAA（0.1、0.2、0.5 mg/L）組合的MS培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)。9個(gè)培養(yǎng)基組合分別為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L（A1）、MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L（A2）、MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L（A3）、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L（A4）、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L（A5）、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L（A6）、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L（A7）、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L（A8）、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L（A9），MS培養(yǎng)基中添加蔗糖30 g/L、瓊脂5 g/L，pH值5.8。每種培養(yǎng)基30個(gè)重復(fù)，每瓶接種2個(gè)外植體。接種后先暗培養(yǎng)3～5 d，之后再每日以日光燈輔助光照12 h，光照強(qiáng)度2 000 lx，溫度（25±1）℃。觀(guān)察并統(tǒng)計(jì)各外植體愈傷組織誘導(dǎo)情況[2-3]。

1.3 分化增殖培養(yǎng)

選取生長(zhǎng)狀態(tài)良好且狀態(tài)一致的愈傷組織，切成1 cm見(jiàn)方的小塊，接種至含不同濃度6-BA（1.0、2.0 mg/L）和 NAA（0.1、0.2、0.5 mg/L）組合的MS培養(yǎng)基上，進(jìn)行分化增殖培養(yǎng)。培養(yǎng)基組合分別為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L（A4）、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L（A5）、MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L（A6）、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L（A7）、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L（A8）、MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L（A9）。培養(yǎng)條件為溫度（25±1）℃，光照時(shí)間12～14 h，光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx。不定芽形成后，每45 d繼代1次[4-5]。

1.4 生根培養(yǎng)

將不定芽切成單芽苗，接種至生根培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。生根培養(yǎng)以MS及1/2MS作為基本培養(yǎng)基，分別附加不同濃度的NAA（0.1、0.2、0.5 mg/L），并附加1.5 g/L活性炭，研究其對(duì)火祭生根情況的影響。培養(yǎng)30 d后統(tǒng)計(jì)試管苗的生根情況[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 愈傷組織的誘導(dǎo)

接種約10 d左右，可見(jiàn)葉片切口處開(kāi)始膨大，邊緣向上卷曲拱起；20 d左右，葉片表面出現(xiàn)皺褶，邊緣產(chǎn)生淡綠色半透明的愈傷組織塊。由表1可知，除處理A3外，其他所有培養(yǎng)基上均可形成愈傷組織，但愈傷誘導(dǎo)率及褐化率存在差異。其中，處理A4愈傷誘導(dǎo)率最高，達(dá)85.0%；處理A7次之，誘導(dǎo)率為71.7%。在低濃度6-BA和高濃度NAA組合中，即處理A3、A6細(xì)胞分裂素及生長(zhǎng)素濃度比較接近，不適合愈傷組織的誘導(dǎo)，且褐化率較高。其中，處理A3的褐化率高達(dá)100.0%。

2.2 分化增殖培養(yǎng)

在愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)，部分愈傷組織上可見(jiàn)2～3 mm的綠色芽點(diǎn)。將其切割再轉(zhuǎn)入分化增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)約30 d時(shí)，小芽點(diǎn)長(zhǎng)成大量叢生芽，并逐漸分化出新葉和嫩莖。由表2可知，6-BA濃度為2.0 mg/L時(shí)（處理A7、A8、A9），叢生芽的增殖系數(shù)總體較高，可見(jiàn)不定芽的分化與增殖效率與 6-BA的濃度呈正相關(guān)。其中，處理A7增殖系數(shù)最大，為 8.8，且形成的叢生芽葉色濃綠，葉大芽多，確定為最佳增殖培養(yǎng)基。另外，在處理A8、A9有玻璃化試管苗的產(chǎn)生，這可能是高的6-BA濃度及細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素比例失調(diào)的結(jié)果。

2.3 生根培養(yǎng)

待增殖的叢生苗長(zhǎng)至3～4 cm高時(shí)，將其轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)30 d可見(jiàn)，供試培養(yǎng)基中均有根的發(fā)生。由表3可知，1/2MS培養(yǎng)基對(duì)根系發(fā)生的效果要明顯優(yōu)于MS培養(yǎng)基，這與前人的研究結(jié)果一致[2]。生根率尤以1/2MS+NAA 0.2 mg/L+1.5 g/L活性炭培養(yǎng)基最佳，為86.7%，且根系較長(zhǎng)、粗壯，狀態(tài)良好。

2.4 移栽與管理

生根的試管苗經(jīng)過(guò)3～5 d的煉苗后，洗凈根部培養(yǎng)基，用多菌靈1 000倍液浸泡30 s，移栽至溫室大棚。移栽基質(zhì)為珍珠巖∶草炭土=1∶3。試管苗移栽后，用清水澆透，溫度控制在20 ℃以上，相對(duì)濕度85%～95%。移栽30 d后成活率可達(dá)到80%以上。

3 討論與結(jié)論

多肉植物以其美觀(guān)獨(dú)特的外形、肥厚多汁的莖葉以及簡(jiǎn)單粗放的管理方式，已逐漸在園藝花卉產(chǎn)業(yè)中占有一席之地。本研究旨在利用其優(yōu)勢(shì)器官——肉質(zhì)化葉片作外植體，通過(guò)不同濃度的細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素配比對(duì)其進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)和再生植株的研究，以獲得優(yōu)化的組培再生體系。

試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)于肉質(zhì)葉片的消毒，在75%酒精和0.1%升汞處理之間，加用含吐溫的無(wú)菌水沖洗1次，對(duì)于減少消毒液的殘留和褐化發(fā)生率都比較有效。愈傷誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L，誘導(dǎo)率達(dá) 85.0%，且褐化率最低。分化增殖誘導(dǎo)試驗(yàn)結(jié)果顯示，6-BA的濃度對(duì)不定芽的分化與增殖效率起到關(guān)鍵作用，6-BA與NAA的比例失調(diào)可能會(huì)導(dǎo)致玻璃化的發(fā)生。最終確定MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L為最佳分化增殖培養(yǎng)基，增殖系數(shù)達(dá)8.8。最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.2 mg/L+1.5 g/L活性炭。生根試驗(yàn)結(jié)果表明，1/2MS對(duì)根系發(fā)生的效果明顯優(yōu)于MS培養(yǎng)基，這可能是因?yàn)榈偷柠}濃度有利于植物吸收營(yíng)養(yǎng)而促進(jìn)生根的結(jié)果。此外，不同濃度的NAA均可誘導(dǎo)出根的分化，而且在不定芽分化與增殖過(guò)程中也觀(guān)察到有根的發(fā)生。這表明，火祭與其他幾種景天科多肉植物一樣，均為易生根植物[3]。這也為組培苗的生根與移栽工作奠定了一定的基礎(chǔ)。

4 參考文獻(xiàn)

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