黨參可溶性粉的薄層色譜鑒別

喬美娟，晏永新，孫娜，孫耀貴，劉旭東，張向杰，李宏全

（1.山西農業大學動物科技學院，山西省新型中獸藥協同創新基地，山西太谷030801；2.江西新世紀民星動物保健品有限公司，江西南昌330096；3.太原恒德源動?？萍奸_發有限公司，山西太原030027；4.山西博銳生物工程有限公司，山西太原030031）

黨參可溶性粉的薄層色譜鑒別

喬美娟1，晏永新2，孫娜1，孫耀貴1，劉旭東3，張向杰4，李宏全1

（1.山西農業大學動物科技學院，山西省新型中獸藥協同創新基地，山西太谷030801；2.江西新世紀民星動物保健品有限公司，江西南昌330096；3.太原恒德源動?？萍奸_發有限公司，山西太原030027；4.山西博銳生物工程有限公司，山西太原030031）

為了優選黨參可溶性粉黨參藥材的薄層鑒別方法，建立其質量標準。以黨參為對照藥材，按照《中國獸藥典》（2010版二部）附錄方法，對黨參可溶性粉進行薄層鑒別；通過不同前處理方法、展開系統和顯色方法對黨參可溶性粉中黨參藥材的鑒別，從中優選出黨參可溶性粉的薄層鑒別條件。以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5）為展開劑，以10%硫酸乙醇溶液為顯色劑。結果表明，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品與黨參對照藥材在相應位置顯相同顏色的污綠色斑點。優選出的方法可行性強、重復性好、專屬性強，可以作為黨參可溶性粉質量標準的薄層色譜鑒別方法。

黨參可溶性粉；薄層色譜；質量標準

黨參為桔?？浦参稂h參的干燥根，主產于山西、陜西、四川、甘肅及東北地區[1]，具有健脾益肺、養血生津之功效[2-3]。黨參主要含有多糖及糖苷類、甾醇類、揮發油、生物堿類、三萜類、諸多必需氨基酸和無機元素等化學成分[4-5]，其中，主要含有黨參皂苷和黨參多糖等活性成分。黨參多糖具有免疫增強[6-10]、抗應激[11]、抗氧化[12-13]和抗炎、增強胃腸道功能[14]等藥理作用，在畜禽養殖的治療與疾病預防上具有廣泛的應用價值。目前，國內外迫切要求解決因濫用抗生素、化學藥物和激素類藥物所帶來的肉、蛋、奶畜產品中藥物殘留的問題，中藥制劑具有毒副作用小、增強機體免疫力、不易產生耐藥性等諸多優點，具有廣闊的市場前景。

黨參在獸醫臨床中的用途很廣，并已運用到綠色飼料添加劑中，以提高動物生產性能。以黨參為主組成的方劑廣泛應用于獸醫臨床中[15]，如參苓白術散、理中散、健雞散和七補散等。近年來，黨參制劑研制開發不多，主要以復方散劑的配伍開發為主，存在服用量大、有效成分利用低等問題。山西省新型中獸藥協同創新基地實驗室主要針對黨參藥材中黨參多糖成分進行提取，采用現代先進的提取精制工藝，大大提高了有效成分的含量，該產品特點是使用劑量小、生物利用度高，并將其制成便于拌料與飲水的可溶性粉新劑型。經臨床試驗證明，黨參可溶性粉具有增強機體免疫、抗氧化、抗應激、抗菌、抗病毒作用。隨著獸藥管理制度的不斷完善，獸藥產品的檢驗也更為全面與嚴格，高效液相技術和薄層色譜技術應用廣泛。

本研究對黨參可溶性粉中黨參藥材薄層色譜鑒別方法進行優化，旨在為黨參可溶性粉申報三類新獸藥制定黨參藥材的薄層色譜鑒別質量標準提供依據。

1 材料和方法

1.1 材料

黨參（批號：121057—201206，供鑒別用，購自中國食品藥品檢定研究院）；黨參可溶性粉（20150901，20150902，20150903，亳州市乾元動物藥業有限責任公司）。

1.2 儀器

分析天平（CP225D型，Sartorius）；HH數顯恒溫水浴鍋（HH-56型，江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠）；超聲波清洗機（SB25-12D型，寧波新芝生物科技股份有限公司）；薄層色譜半自動點樣儀（Linomat 5型，camag）；薄層色譜成像系統（Visualizer型，camag）；數控薄層顯色加熱器（TH-II型，上海科哲生化科技有限公司）；電動噴霧器（camag）；電熱恒溫干燥箱（KH-75AS型，康恒儀器有限公司）。

1.3 藥劑

硅膠板（G型，青島海洋化工有限公司）；正丁醇、甲酸、乙酸乙酯和三氯甲烷等試劑均為分析純。

1.4 試驗方法

1.4.1 供試品溶液的制備稱取黨參可溶性粉1 g，加稀鹽酸20 mL、三氯甲烷30 mL，加熱回流1 h，放冷，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷30 mL提取一次，合并三氯甲烷液，揮干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

1.4.2 對照藥材溶液的制備稱取黨參對照藥材2 g，加水50 mL，煎煮30 min，過濾，濾液濃縮至近干，加稀鹽酸20 mL、三氯甲烷30 mL，加熱回流1 h，放冷，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷30 mL提取一次，合并三氯甲烷液，揮干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。

1.4.3 展開與顯色吸取上述2種溶液各10 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5）為展開劑展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。

1.4.4 供試品薄層色譜鑒定取中試生產的3批供試品（批號：20150901，20150902，20150903），按

1.4.1 方法制備供試品溶液。照1.4.3方法進行展開與顯色，置日光下檢視。

2 結果與分析

2.1 確定提取方法和展開條件

圖1供試品色譜中，斑點為灰色，樣品與對照藥材條帶分離度均較差，且有拖尾現象，故不將其作為薄層試驗方法；圖2供試品色譜中，只有三氯甲烷樣品處理組出現特征斑點，其余樣品及對照藥材處理組均未出現特征性斑點，且硅膠板易烤糊，故不將其作為薄層試驗方法；圖3供試品色譜中，對照藥材色譜中斑點拖尾嚴重，呈條狀且未出現特征斑點，分離效果差，故不將其作為薄層試驗方法；圖4供試品色譜中，供試品處理組可觀察到2個明亮的黃色熒光點，對照藥材相對應的斑點較暗且不清晰，增大對照藥材點樣量后斑點拖尾，故不將其作為薄層試驗方法；圖5供試品色譜中，供試品處理2組與對照藥材處理2組對應位置處均可見一清晰斑點，背景顏色無干擾，可以作為黨參可溶性粉黨參定性鑒別的標準方法。

2.2 供試品點樣量確定

為確定供試品與對照藥材的點樣量，本試驗依次吸取供試品溶液2，5，10，15，20 μL，對照藥材溶液10 μL進行點樣，結果如圖6所示。展開顯色后發現，當供試品溶液點樣量與對照藥材溶液點樣量一致，均為10μL時，斑點清晰且分離度較好。因此，將供試品與對照藥材溶液的點樣量均定為10 μL。

2.3 供試品薄層色譜鑒定

3批樣品的供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的污綠色主斑點；鑒別圖中斑點清晰，分離度好，3批樣品與黨參對照藥材的Rf值依次為：0.298，0.297，0.295，0.303，0.307，相互之間無顯著差異（圖7），可以作為黨參可溶性粉的黨參藥材薄層鑒別方法。

3 討論與結論

《中國獸藥典》對黨參藥材的薄層色譜鑒定的前處理需要使用D101型大孔吸附樹脂柱，為了使試驗操作更簡潔，結合該藥品的特點及文獻報道，選取加熱回流、超聲、振搖提取等4種前處理方法、5種展開系統進行了考察。其中，以正己烷超聲20min作為提取處理1組，以樣品的水溶液經水飽和的正丁醇振搖提取的方式作為處理4組，發現這2個方法樣品提取濃度低，斑點不易顯現或顏色很淺，加大點樣濃度后斑點易擴散、拖尾；乙醇回流提取作為處理3組，發現樣品溶液斑點多成條狀，以上3組均不適宜作為本試驗樣品的提取方法，最終選擇了酸化的三氯甲烷液進行回流提取的處理2組方法。同時，結合試驗結果，黨參對照藥材的前處理先經水回流提取后，再用酸液提取效果更好。

本研究參照文獻[16-19]的試驗方法考察了三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水（3∶8∶5∶2）、三氯甲烷-甲醇-水（11∶6∶2）的下層液、甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15∶5∶2）、乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1）4個展開系統，結果顯示，以前3種展開效果均不理想，最終考察選擇三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸[20]（20∶4∶0.5）作為展開劑，斑點清晰，且易于顯現。同時，結合顯色劑噴灑流利程度、斑點顯色時間以及背景與目標斑點對比度3個方面發現，10%硫酸乙醇溶液顯色后背景無色，105℃稍加熱即可顯現污綠色的目標斑點，對比強烈，與10%磷鉬酸溶液和5%硫酸乙醇溶液相比，更適宜作為本品的顯色劑。

同時，試驗對所建立的黨參薄層色譜鑒別方法進行了耐用性試驗，在23～29℃，44%～58%溫濕度條件下對不同廠家的薄層板進行考察，結果顯示，分離效果均較好。經反復試驗證明，本試驗方法目標斑點清晰，背景無干擾，供試品溶液色譜相互之間無顯著差異，重現性較好，可將其作為黨參可溶性粉申報三類新型獸藥的質量標準，也可作為黨參提取制劑的薄層色譜定性檢測的參考方法。

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Identification of Water-soluble Dangshen Powder by TLC

QIAOMeijuan1，YANYongxin2，SUNNa1，SUNYaogui1，LIUXudong3，ZHANGXiangjie4，LI Hongquan1
（1.College ofAnimal Science and VeterinaryMedicine，Shanxi Agricultural University，NewType ofCooperative Innovation Base ofChinese VeterinaryDrugs in Shanxi，Taigu 030801，China；2.Jiangxi NewCenturyStar Animal Health Products Co.，Ltd.，Nanchang330096，China；3.Taiyuan Hengdeyuan Animal Health&TechnologyCo.，Ltd.，Taiyuan 030027，China；4.Shanxi Borui Biological EngineeringCo.，Ltd.，Taiyuan 030031，China）

Theaim of this study was to optimize the thin-layer chromatography（TLC）method of water-soluble Dangshen powder（WSDP）and toprovide basis for the establishment ofits qualitystandard.The WSDP was determined byTLC method in accordance with the standards in the appendix of Chinese Veterinary Pharmacopoeia（2010 Edition,2nd Section）and Dangshen was as a control. Dangshen contained from WSDP was identified and the TLC conditions were optimized via different pretreatment methods,developing systems and coloration methods.Under the condition of TLC with Chloroform-ethyl acetate-formic acid（20∶4∶0.5）as a developing solvent,10%alcoholic solution of sulfuric acid as a chromogenic reagent.The results showed that the samples showed clear dark green spots at 105℃in the same position with the control′s.The optimized TLC condition could be used as an identified method for WSDP qualitystandard with the advantages ofhigh feasibility,better repeatabilityand specific.

water-soluble Dangshen powder;thin-layer chromatography（TLC）;qualitystandard

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.05.15

S567.5＋3

：A

：1002-2481（2017）05-0732-04

2017-02-21

農業科技成果轉化資金項目（2014GB2A300003）

喬美娟（1991-），女，山西太原人，在讀碩士，研究方向：中藥調節動物免疫功能及其分子機制。李宏全為通信作者。