中國沙棘不同器官蘆丁含量的比較

楊雪芳，張洋洋，張瓊姝，王斌，郭海利，張小民

（1.山西大學生命科學學院，山西太原030006；2.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

中國沙棘不同器官蘆丁含量的比較

楊雪芳1，張洋洋1，張瓊姝1，王斌1，郭海利2，張小民1

（1.山西大學生命科學學院，山西太原030006；2.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

試驗采用高效液相色譜法對中國沙棘根、莖、葉、果實中蘆丁的含量進行了測定及比較。所用色譜柱為Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.5%磷酸（33∶67），檢測波長為254 nm。結果表明，中國沙棘根、莖、葉、果實中蘆丁的含量分別為0.132 1，0.216 3，0.930 2，0.127 0 mg/g。研究結果可為沙棘蘆丁的進一步開發和利用提供理論指導。

中國沙棘；高效液相色譜法；蘆丁含量；不同器官

沙棘（Hippophae rhamnoides L.）又名醋柳、酸刺、酸溜溜等，為胡頹子科沙棘屬落葉灌木或小喬木。我國沙棘資源豐富，素有“沙棘王國”之稱[1-3]。沙棘屬植物在我國分布有5個種（柳葉沙棘、江孜沙棘、肋果沙棘、西藏沙棘、沙棘）和屬于沙棘種的4個亞種（中國沙棘、云南沙棘、中亞沙棘、蒙古沙棘）[4]。其中，中國沙棘亞種（H.rhamnoid L.subsp. sinens Rousi）在我國分布最廣，山西省分布的野生沙棘全部為中國沙棘[5-6]。

蘆丁是沙棘黃酮中重要的生物活性成分，具有清除自由基、抗脂質過氧化、舒張血管等作用[7]，是一種天然的抗氧化劑[8]，對于沙棘的開發和利用意義重大。王軍憲等[9]通過分光光度計對中國沙棘不同部位總黃酮含量進行了測定；李春英等[10]通過分光光度計對沙棘不同部位總黃酮含量進行了測定及比較；謝久祥等[11]通過分光光度計對青海沙棘不同部位總黃酮含量進行了比較研究。通過前人研究發現，沙棘的果實、種子、葉、莖等各部器官中都含有豐富的營養及多種生物活性成分，并發現它有多方面經濟價值和生態價值，廣泛引起了人們的關注。

由于分光光度計不能準確測定黃酮含量，故本試驗首次選用高效液相色譜法測定中國沙棘根、莖、葉、果實這4個沙棘器官中蘆丁的含量，旨在為沙棘的有效開發和利用提供依據。

1 材料和方法

1.1 材料

供試材料為2015年10月從山西省晉中市祁縣來遠鎮唐河底村灘地采集的中國沙棘根、莖、葉、果實，經烘干后備用。

1.2 儀器

島津SPD-15C高效液相色譜儀（日本，島津公司）；N-3000色譜工作站（浙江大學）；BG-01超聲波清洗機（廣州邦潔超聲波設備有限公司）；FA1604N電子分析天平（上海精密科學儀器有限公司）；HealForce SMART-N超純水機（上?？道追治鰞x器有限公司）。

1.3 試劑

蘆丁對照品購自國家標準物質網；甲醇為色譜純，水為超純水；其他試劑均為分析純。

1.4 方法

1.4.1 色譜條件色譜柱為DiamonsilC18柱（150mm× 4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.5%磷酸（33∶67），流速為1.0 mL/min，檢測波長254 nm，柱溫是30℃。進樣量20 μL，進樣前經0.22 μm的針頭過濾器過濾。

1.4.2 溶液的配制

1.4.2.1 標準品溶液的配制精密稱取蘆丁標準品31.25 mg，置于25 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度線，待標準品溶解后，搖勻，即得標準品溶液。1.4.2.2供試樣品的配制分別稱取沙棘根、莖、葉、果實粉末各5 g，置50 mL具塞錐形瓶內，精密加入甲醇50 mL，稱質量，超聲波輔助提取40 min（功率80 W，頻率40 kHz），待其冷卻至室溫，再稱其質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，過濾，取續濾液；再經0.22 μm有機微孔濾膜過濾，取濾液，即得供試樣品。

2 結果與分析

2.1 蘆丁對照品的HPLC分析

在1.4.1色譜條件下得到蘆丁標準品的HPLC圖，如圖1所示。

2.2 線性關系的考察

分別精密吸取蘆丁對照品溶液1，5，10，15，20 μL。在1.4.1色譜條件下，分別注入高效液相色譜儀進行測定。以蘆丁的進樣量（X，μg）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，得到回歸方程為：Y＝1.0× 106X，R2＝0.996 2（n＝5）。結果表明，蘆丁對照品進樣量在0.25～5.00 μg時，蘆丁進樣量與峰面積呈現良好的線性關系。

2.3 精密度試驗

精密吸取1.25 μg/mL蘆丁標準溶液20 μL，進樣，重復5次。結果表明，蘆丁峰面積的RSD為1.37%（n＝5），精密度較好。

2.4 穩定性試驗

取中國沙棘葉供試樣品，分別于0，2，4，6，8，12 h進樣，在1.4.1色譜條件下測定，結果表明，蘆丁峰面積的RSD為1.12%（n＝6），表明中國沙棘供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.5 重復性試驗

取中國沙棘葉供試樣品5份，每份約5 g，精密稱量，按1.4.2.2方法制備樣品溶液，在1.4.1色譜條件下分別進樣測定，RSD為1.28%，表明重現性良好。

2.6 加樣回收試驗

精密稱量已知含量的供試品5份，每份約5 g，置于50 mL具塞錐形瓶中，分別精密加入1 mL質量濃度為1.25 mg/mL的蘆丁對照品溶液，按照1.4.2.2供試品溶液的制備方案制備成5份供試品溶液，在1.4.1色譜條件下進行測定，結果如表1所示。試驗結果表明，試驗中測定的蘆丁含量的加樣回收率符合要求。

表1 沙棘葉蘆丁回收率測定結果

2.7 樣品含量測定

取中國沙棘根、莖、葉、果實在1.4.2.2的方法下制備好供試樣品，在1.4.1色譜條件下，分別進樣20 μL，記錄峰面積，計算樣品中蘆丁的含量。

由表2可知，中國沙棘根、莖、葉和果實中所含的蘆丁含量不同，依次為0.132 1，0.216 3，0.930 2，0.127 0 mg/g?？梢缘贸?，沙棘葉中蘆丁含量最高，明顯高于根、莖、葉中的蘆丁含量；果實中的蘆丁含量最低；沙棘根中的蘆丁含量略高于沙棘果實中的蘆丁含量；沙棘莖中的蘆丁含量略高于根中的蘆丁含量。

表2 中國沙棘不同部位蘆丁含量mg/g

3 討論

本試驗采用高效液相色譜法測定中國沙棘根、莖、葉、果實不同器官中蘆丁的含量。用50%甲醇在超聲波輔助提取下提取，濾液經0.22 μm有機微孔濾膜過濾后，利用反向高效液相色譜法測定沙棘不同器官蘆丁的含量。結果表明，蘆丁進樣量在0.25～5.00 μg，與峰面積呈現良好的線性關系。

中國沙棘根、莖、葉、果實中蘆丁含量分別為0.132 1，0.216 3，0.930 2，0.127 0 mg/g，野生中國沙棘蘆丁含量大小依次為葉＞莖＞根＞果實。趙文娟等[12]研究結果表明，吳起野生沙棘中總黃酮含量沙棘果實＞沙棘葉＞沙棘枝桿，與本研究結果有差異，可能是因為所用測定方法以及沙棘植物所處的地理位置、氣候環境等因素存在差異。而謝久祥等[11]研究表明，葉中總黃酮含量遠高于根和莖，與本研究結果相符。沙棘葉所含蘆丁含量最高，因此，可以大力對沙棘葉進行開發和產品加工，擴大沙棘葉資源的有效利用。

山西省的野生沙棘種植面積約占全國的1/2，位居首位[13]，中國沙棘資源豐富，大力開發野生沙棘可以帶來經濟效益和生態效益。目前，對沙棘的開發和利用主要是針對沙棘果，其產品有沙棘汁、沙棘果油、沙棘果醋、沙棘化妝品等，而對沙棘葉開發和利用的報道較少，其產品只有沙棘葉茶[14-15]。根據前人的研究來看，沙棘葉除蘆丁含量較高外，還含有科羅索酸等多種生物活性物質[16-18]，有較為廣闊的開發空間，可廣泛應用于食品、醫藥、輕工業等產品加工中。

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Comparison of Rutin Contents in Different Organs of Chinese Seabuckthorn

YANGXuefang1，ZHANGYangyang1，ZHANGQiongshu1，WANGBin1，GUOHaili2，ZHANGXiaomin1
（1.College ofLife Science，Shanxi University，Taiyuan 030006，China；2.Shanxi Jinkehai Biological TechnologyCo.，Ltd.，Taiyuan 030006，China）

The contents of rutin in the roots,stems,leaves and fruits of Chinese seabuckthorn were determined by HPLC.The chromatographic column was Diamonsil C18column（150 mm×4.6 mm,5 μm）.The mobile phase consisted of methanol-0.5% phosphoric acid（33∶67）,and the detection wavelength was 254 nm.The results showed that the contents ofrutin in roots,stems,leaves and fruits were 0.132 1,0.216 3,0.930 2,0.127 0 mg/g,respectively.It will provide theoretical guidance for the further development and utilization ofrutin ofseabuckthorn.

Chinese seabuckthorn;HPLC；rutin content;different organs

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.05.12

S793.6

：A

：1002-2481（2017）05-0722-03

2016-11-29

楊雪芳（1992-），女，山西大同人，在讀碩士，研究方向：植物化學與藥理。張小民為通信作者。