UTP23基因在A2780/Taxol細(xì)胞中表達(dá)及對(duì)紫杉醇化療耐藥的影響

章杰捷

[摘要] 目的 探討上皮性卵巢癌紫杉醇耐藥細(xì)胞（A2780/Taxol）中UTP23基因表達(dá)水平及其對(duì)紫杉醇化療耐藥的影響。 方法 利用Real-Time PCR與Western blot分別從基因與蛋白表達(dá)水平檢測(cè)A2780/Taxol 細(xì)胞中UTP23的表達(dá)水平，通過(guò)脂質(zhì)體在A2780/Taxol 細(xì)胞中特異性瞬時(shí)過(guò)表達(dá)UTP23基因，利用MTT細(xì)胞增殖法觀察過(guò)表達(dá)UTP23基因?qū)2780/Taxol 細(xì)胞藥物敏感性的影響；通過(guò)Real-Time PCR檢測(cè)A2780/Taxol 細(xì)胞過(guò)表達(dá)UTP23后抗凋亡基因Bcl-2蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果 A2780/Taxol中UTP23的mRNA表達(dá)水平降低，約為A2780細(xì)胞的50%，UTP23蛋白表達(dá)水平下降，約為A2780細(xì)胞的48%（P<0.01）；相對(duì)于陰性轉(zhuǎn)染組，UTP23基因過(guò)表達(dá)可顯著提高A2780/Taxol 細(xì)胞中UTP23基因表達(dá)水平（P<0.05）；相對(duì)于陰性轉(zhuǎn)染組，UTP23基因過(guò)表達(dá)A2780/Taxol細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性顯著提高（P<0.01）；與陰性轉(zhuǎn)染組相比，過(guò)表達(dá)UTP23基因后A2780/Taxol細(xì)胞Bcl-2基因表達(dá)水平顯著下降（P<0.05）。 結(jié)論 UTP23基因在A2780/Taxol細(xì)胞中低表達(dá)，可能通過(guò)促進(jìn)Bcl-2基因表達(dá)，從而參與A2780/Taxol細(xì)胞的耐藥作用。

[關(guān)鍵詞] UTP23基因；紫杉醇；A2780/Taxol細(xì)胞；Bcl-2

[中圖分類(lèi)號(hào)] R737.31 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2017）08-0086-04

[Abstract] Objective To investigate the expression of UTP23 gene in paclitaxel-resistant epithelial ovarian cancer cells（A2780/Taxol） and its effect on drug resistance of paclitaxel chemotherapy. Methods Real-Time PCR and Western blot were used to detect the expression level of UTP23 in A2780/Taxol cells from the level of gene and protein expression. The UTP23 gene was transiently over-expressed in A2780/Taxol cells via liposomes. The effect of the over-expressed UTP23 gene on the drug sensitivity of A2780/Taxol cells was observed by MTT cell proliferation method. The expression of anti-apoptotic gene Bcl-2 protein after over-expression of UTP23 gene in A2780/Taxol cells was detected by Real-Time PCR. Results The expression level of UTP23 mRNA in A2780/Taxol decreased，which was about 50% of A2780 cells. And the UTP23 protein expression level decreased，which was 48% in A2780 cells（P<0.01）. Compared with negative transfection group， UTP23 gene over-expression could significantly increase the expression level of UTP23 gene in A2780/Taxol cells（P<0.05）. Compared with that in negative transfection group， the sensitivity of A2780/Taxol cells with over-expression of UTP23 gene to paclitaxel was significantly increased（P<0.01）. The expression of Bcl-2 gene after the over-expression of UTP23 gene in A2780/Taxol cells was significantly lower than that in negative transfection group（P<0.05）. Conclusion The expression of UTP23 gene is low in A2780/Taxol cells and may be involved in the drug resistance of A2780/Taxol cells by promoting the expression of Bcl-2 gene.

[Key words] UTP23 gene； Paclitaxel； A2780/Taxol cells； Bcl-2

上皮性卵巢癌是最常見(jiàn)的卵巢癌，位居女性生殖系統(tǒng)癌癥死亡率榜首，由于缺乏早期臨床癥狀及特異的早期診斷標(biāo)志物，大部分患者確診時(shí)已是腫瘤晚期階段，嚴(yán)重威脅著女性患者的生存[1]。目前，臨床手術(shù)及術(shù)后紫杉醇等化療藥物的聯(lián)合治療，一部分患者初步有效，然而，大部分患者往往由于化療藥物耐藥性的產(chǎn)生，最終死亡[2]。大量研究表明，逆轉(zhuǎn)化療藥物耐藥將有助于改善患者預(yù)后[3]。UTP23是一種核仁蛋白，與90S前核糖體顆粒相互連接，參與18S rRNA的A0、A1及A2早期位點(diǎn)修飾，核糖體是蛋白質(zhì)合成的重要組成部分，rRNA直接調(diào)控蛋白合成的過(guò)程[4]。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)UTP23在多重耐藥的腫瘤中呈現(xiàn)異常表達(dá)，并且與腫瘤的耐藥密切相關(guān)[5]。本研究旨在探討UTP23在上皮性卵巢癌耐紫杉醇細(xì)胞中的表達(dá)及其與耐藥的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株及培養(yǎng)

上皮性卵巢癌細(xì)胞株A2780與上皮性卵巢癌紫杉醇耐藥細(xì)胞株A2780/Taxol均購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)，均使用含有10%胎牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液，在37℃、5%CO2條件下恒溫培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

胎牛血清購(gòu)自Gibco公司，噻唑藍(lán)（MTT）、RPMI1640培養(yǎng)液、紫杉醇均購(gòu)自Sigma公司，BCA蛋白濃度測(cè)定盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)公司，兔抗人UTP23抗體、兔抗人Bcl-2抗體、抗GAPDH抗體及相對(duì)應(yīng)的二抗均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑、陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自Santa Cruz公司，qRT-PCR試劑盒購(gòu)自Takara公司。

1.3 RT-PCR測(cè)定UTP23基因表達(dá)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A2780細(xì)胞與A2780/Taxol細(xì)胞，使用Trazol裂解液提取細(xì)胞總RNA，按照Takara公司提供的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)合成cDNA。以GAPDH作為內(nèi)參，進(jìn)行UTP23基因擴(kuò)增。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30 s，95℃ 5 s，60℃ 20 s 40個(gè)循環(huán)。應(yīng)用2-ΔΔCt方法分別計(jì)算A2780細(xì)胞與A2780/Taxol細(xì)胞UTP23基因的相對(duì)表達(dá)量，重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。

1.4 Western blot蛋白印跡法測(cè)定UTP23蛋白表達(dá)水平

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A2780細(xì)胞與A2780/Taxol細(xì)胞，棄去細(xì)胞上清培養(yǎng)液，使用蛋白裂解液提取細(xì)胞蛋白后，BCA法進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)蛋白濃度，以相同的作蛋白上樣總量，進(jìn)行凝膠蛋白電泳，電泳后將蛋白轉(zhuǎn)移至預(yù)處理的硝酸纖維素膜，用5%濃度的脫脂牛奶封閉60 min，一抗孵育UTP23抗體（1∶100）、GAPDH抗體（1∶1000）4℃過(guò)夜。TBST溶液洗滌5次，每次3 min，加入相對(duì)應(yīng)的二抗（1∶1000）室溫孵育60 min。洗滌后加入化學(xué)發(fā)光液，進(jìn)行曝光成像。

1.5 脂質(zhì)體過(guò)表達(dá)UTP23基因與陰性對(duì)照

將A2780/Taxol細(xì)胞以3×105/孔接種于六孔板，含有10%胎牛血清完全培養(yǎng)液，在37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱孵育至大約融合狀態(tài)，參照脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)，分別將陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染試劑及UTP23基因與脂質(zhì)體混合后，加入A2780/Taxol細(xì)胞中，在37℃、5%CO2恒溫箱繼續(xù)孵育48 h。

1.6 MTT細(xì)胞增殖法觀察UTP23基因?qū)2780/Taxol細(xì)胞耐藥的影響

空白對(duì)照組（A2780/Taxol細(xì)胞）、陰性轉(zhuǎn)染組（陰性轉(zhuǎn)染A2780/Taxol細(xì)胞）與UTP23過(guò)表達(dá)組（過(guò)表達(dá)UTP23 基因A2780/Taxol細(xì)胞），以相同的細(xì)胞密度接種于96孔板，每組五個(gè)復(fù)孔，于37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)24 h。分別加入紫杉醇（分別加入10、50、250、1250 nmol/L），繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，加入5 mg/mL的MTT培養(yǎng)液恒溫孵育6 h，吸取上層細(xì)胞培養(yǎng)液棄去，加入100 μL DMSO完全溶解結(jié)晶，570 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值（A）。

1.7 RT-PCR法檢測(cè)UTP23基因?qū)2780/Taxol細(xì)胞Bcl-2基因表達(dá)的影響

提取空白對(duì)照組、陰性轉(zhuǎn)染組及過(guò)表達(dá)組細(xì)胞RNA，選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A2780/Taxol細(xì)胞、陰性轉(zhuǎn)染A2780/Taxol細(xì)胞與過(guò)表達(dá)UTP23 基因A2780/Taxol細(xì)胞，如方法1.3提取RNA、合成cDNA，進(jìn)行Bcl-2基因擴(kuò)增，以GAPDH作為內(nèi)參，Bcl-2引物上游5-CATGTGTGTGGAGAGCGTCAA-3下游5- GCCGGTTCAGGTACTCAGTCA-3。實(shí)驗(yàn)條件為：95℃預(yù)變性30 s，95℃ 5 s，60℃ 1 min，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。應(yīng)用2-ΔΔCt方法分別計(jì)算三組細(xì)胞UTP23基因的相對(duì)表達(dá)量，重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 A2780/Taxol細(xì)胞中UTP23基因的mRNA表達(dá)水平

通過(guò)RT-PCR檢測(cè)A2780/Taxol細(xì)胞與A2780細(xì)胞中UTP23基因的mRNA表達(dá)水平，結(jié)果顯示，A2780/Taxol細(xì)胞中UTP23的mRNA表達(dá)水平顯著減少，約為A2780細(xì)胞的50%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（圖1）。

2.2 A2780/Taxol細(xì)胞中UTP23基因的蛋白表達(dá)水平

如圖2所示，Western blot檢測(cè)A2780/Taxol細(xì)胞與A2780細(xì)胞中UTP23基因的蛋白表達(dá)水平，如圖2A所示，UTP23蛋白在A2780/Taxol細(xì)胞中表達(dá)水平顯著下調(diào)，約為A2780細(xì)胞的48%，A2780/Taxol細(xì)胞與A2780細(xì)胞UTP23蛋白表達(dá)水平比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（圖2B）。

2.3 A2780/Taxol細(xì)胞過(guò)表達(dá)UTP23基因

通過(guò)RT-PCR分別檢測(cè)空白對(duì)照組、陰性轉(zhuǎn)染組與UTP23過(guò)表達(dá)組的A2780/Taxol細(xì)胞UTP23基因mRNA表達(dá)水平，如圖3所示，UTP23過(guò)表達(dá)的A2780/Taxol細(xì)胞UTP23 mRNA表達(dá)水平顯著提高，約為陰性轉(zhuǎn)染組的3.5倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而空白對(duì)照組與陰性轉(zhuǎn)染組的A2780/Taxol細(xì)胞UTP23的mRNA表達(dá)水平相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說(shuō)明UTP23基因過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)染有效。

2.4 UTP23基因?qū)2780/Taxol細(xì)胞耐藥的影響

通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，UTP23基因過(guò)表達(dá)的A2780/Taxol細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性顯著增加，相對(duì)于陰性轉(zhuǎn)染A2780/Taxol細(xì)胞，當(dāng)紫杉醇濃度為250 nmol/L時(shí)，UTP23基因過(guò)表達(dá)的A2780/Taxol細(xì)胞增殖受到抑制（P<0.05），當(dāng)紫杉醇濃度達(dá)1250 nmol/L時(shí)，紫杉醇對(duì)UTP23基因過(guò)表達(dá)的A2780/Taxol細(xì)胞的殺傷最為顯著（P<0.01），而空白對(duì)照組與陰性轉(zhuǎn)染組A2780/Taxol細(xì)胞增殖比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（圖4）。

2.5 UTP23基因?qū)2780/Taxol細(xì)胞Bcl-2基因表達(dá)的影響

通過(guò)RT-PCR檢測(cè)UTP23基因?qū)2780/Taxol細(xì)胞Bcl-2基因表達(dá)水平的影響，如圖5所示，與陰性轉(zhuǎn)染組的A2780/Taxol細(xì)胞相比，UTP23基因過(guò)表達(dá)組的A2780/Taxol細(xì)胞Bcl-2基因的表達(dá)水平顯著下降（P<0.05），而空白對(duì)照組與陰性轉(zhuǎn)染組A2780/Taxol細(xì)胞Bcl-2基因的表達(dá)水平相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3 討論

上皮性卵巢癌是女性三大生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，死亡率占女性生殖系統(tǒng)腫瘤的第1位，雖然手術(shù)聯(lián)合化療的治療水平提高，但由于腫瘤對(duì)化療藥物耐藥性的產(chǎn)生，患者往往出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)，腫瘤遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，患者的5年生存率僅25%左右[6-9]。目前，臨床紫杉醇是殺傷上皮性卵巢癌細(xì)胞的一線化療藥物，長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用，上皮性卵巢癌耐受紫杉醇，藥物敏感度大大降低，嚴(yán)重影響治療效果，是患者治療過(guò)程死亡的最常見(jiàn)原因。但上皮性卵巢癌對(duì)紫杉醇耐藥的關(guān)鍵分子與具體機(jī)制仍然不清楚。因此，如何逆轉(zhuǎn)細(xì)胞耐藥成為治療上皮性卵巢癌的難點(diǎn)，得到人們的廣泛關(guān)注[10]。

UTP23基因是新發(fā)現(xiàn)的一種小亞基組成部分，參與核糖體的成熟。早期研究顯示UTP23可能參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，在結(jié)直腸癌中通過(guò)基因與環(huán)境的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析表達(dá)發(fā)現(xiàn)，位于8q23.3染色體的易感基因與UTP23表達(dá)高度相同的基因，與結(jié)直腸癌的發(fā)生密切相關(guān)[11]。近來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)UTP23在上皮性卵巢癌化療耐受患者癌組織表達(dá)顯著低于化療敏感患者，此外，UTP23低表達(dá)與患者的不良預(yù)后呈相關(guān)性，提示UTP23可能在上皮性卵巢癌產(chǎn)生耐藥中發(fā)揮重要的作用，然而，其具體分子機(jī)制仍不清楚[12，13]。因此，本文選取上皮性卵巢癌紫杉醇耐藥細(xì)胞對(duì)UTP23基因表達(dá)及其在耐藥中的作用進(jìn)行探討。

通過(guò)RT-PCR檢測(cè)A2780細(xì)胞與A2780/Taxol細(xì)胞UTP23基因表達(dá)水平顯示，A2780/Taxol細(xì)胞中UTP23基因呈現(xiàn)下調(diào)模式，Western blot從蛋白水平驗(yàn)證A2780/Taxol細(xì)胞中UTP23蛋白表達(dá)顯著減少，分別從基因與蛋白水平驗(yàn)證UTP23在A2780/Taxol細(xì)胞表達(dá)減少，與早期報(bào)道一致，提示UTP23在上皮性卵巢癌紫杉醇耐藥細(xì)胞中可能參與耐藥的產(chǎn)生。利用脂質(zhì)體過(guò)表達(dá)UTP23基因后發(fā)現(xiàn)A2780/Taxol細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性顯著提高，提示UTP23基因可促進(jìn)紫杉醇對(duì)A2780/Taxol細(xì)胞的殺傷作用，減少耐藥性。

研究報(bào)道卵巢癌耐藥性產(chǎn)生有多種機(jī)制，不同化療藥物產(chǎn)生耐藥性的具體機(jī)制亦不同。臨床傳統(tǒng)藥物順鉑、阿霉素等主要通過(guò)促進(jìn)多藥耐藥基因表達(dá)，從而導(dǎo)致卵巢癌產(chǎn)生耐藥治療失敗；卵巢癌細(xì)胞中谷胱甘肽及其轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)增多，促進(jìn)環(huán)磷酰胺及紫杉醇耐藥性的產(chǎn)生[14-17]。此外，早期的研究在卵巢癌患者組織發(fā)現(xiàn)Bcl-2抗凋亡基因表達(dá)上調(diào)，與卵巢癌患者化療藥物耐受顯著相關(guān)；Bcl-2是凋亡調(diào)控家族中重要的抗凋亡基因，主要通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的不斷生長(zhǎng)，對(duì)藥物產(chǎn)生耐藥性[18-20]。本研究RT-PCR檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)UTP23基因后A2780/Taxol細(xì)胞Bcl-2基因表達(dá)水平顯著下降，提示UTP23可能通過(guò)抑制A2780/Taxol細(xì)胞Bcl-2基因表達(dá)，從而抑制細(xì)胞增殖，增加A2780/Taxol細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)UTP23基因在A2780/Taxol細(xì)胞表達(dá)減少，過(guò)表達(dá)UTP23基因可下調(diào)Bcl-2抗凋亡基因表達(dá)，促進(jìn)A2780/Taxol細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性，減少耐藥性的產(chǎn)生，可部分逆轉(zhuǎn)A2780/Taxol細(xì)胞對(duì)紫杉醇的耐藥。UTP23基因調(diào)控A2780/Taxol細(xì)胞耐藥的具體分子機(jī)制及胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，有待更進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Patel S，Kumar L，Singh N.Metformin and epithelial ovarian cancer therapeutics[J]. Cell Oncol（Dordr），2015，38（5）：365-375.

[2] Siegel R，Naishadham D，Jemal A.Cancer statistics[J].CA Cancer J Clin，2013，63（2）：11-30.

[3] Bookman MA，Brady MF，McGuire WP，et al.Evaluation of new platinum-based treatment regimens in advanced-stage ovarian cancer：A Phase Ⅲ Trial of the Gynecologic Cancer Intergroup[J]. J Clin Oncol，2009，27（5）：1419-1425.

[4] Li X，Pan QQ，Wan XY，et al.Methylation-associated Has-miR-9 deregulation in paclitaxel- resistant epithelial ovarian carcinoma[J].BMC Cancer，2015，15（1）：509.

[5] Timofeeva MN，Kinnersley B，F(xiàn)arrington SM，et al. Recurrent coding sequence variation explains only a small fraction of the genetic architecture of colorectal cancer[J].Sci Rep，2015，10（5）：16286.

[6] Piccart MJ，Bertelsen K，James K，et al.Randomized intergroup trial of cisplatin-paelitaxel versus cisplatin-cyclophosphamide in women with advanced epithelial ovarian cancer：Three-year results[J]. J Natl Cancer lnst，2000，92（5）：699008.

[7] Webber K，F(xiàn)riedlander M.Chemotherapy for epithelial ovarian，fallopian tube and primary peritoneal cancer[J].Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol，2016，23（16）：30139-30140.

[8] Vallius T，Hynninen J，Auranen A，et al.Postoperative human epididymis protein 4 predicts primary therapy outcome in advanced epithelial ovarian cancer[J].Tumour Biol，2017，39（2）：89.

[9] Li H，Xiao N，Li Z，et al.Expression of inorganic pyrophosphatase（PPA1） correlates with poor prognosis of epithelial ovarian cancer[J]. Tohoku J Exp Med，2017，241（2）：165-173.

[10] Zhang SF，Wang XY，F(xiàn)u ZQ，et al.TXNDC17 promotes paclitaxel resistance via inducing autophagy in ovarian cancer[J].Autophagy，2015，11（2）：225-238.

[11] Hutter CM，Chang-Claude J，Slattery ML，et al.Characterization of gene-environment interactions for colorectalcancer susceptibility loci[J].Cancer Res，2012，72（8）：2036-2044.

[12] Wang X，Wang SS，Zhou L，et al.A network-pathway based module identification for predicting the prognosis of ovarian cancer patients[J].J Ovarian Res，2016，9（1）：73.

[13] Wang X，Teng F，Kong LA，et al.PD-L1 expression in human cancers and its association with clinical outcomes[J].Onco Targets Ther，2016，12（9）：5023-5039.

[14] 李思瑾，張丙忠.紫杉醇聯(lián)合鉑類(lèi)化療在上皮性卵巢癌的耐藥研究[J].中華臨床醫(yī)師雜志，2013，7（22）：10231-10234.

[15] Januchowski R，Sterzyńska K，Zaorska K，et al.Analysis of MDR genes expression and cross-resistance in eight drug resistant ovarian cancer cell lines[J].J Ovarian Res，2016，9（1）：65.

[16] Lopes-Coelho F，Gouveia-Fernandes S，Gonalves LG，et al.HNF1β drives glutathione （GSH） synthesis underlying intrinsic carboplatin resistance of ovarian clear cell carcinoma （OCCC）[J]. Tumour Biol，2016，37（4）：4813-4829.

[17] Ribeiro JR，Schorl C，Yano N，et al.HE4 promotes collateral resistance to cisplatin and paclitaxel in ovarian cancer cells[J].J Ovarian Res，2016，9（1）：28.

[18] Kim JH，Choi JS.Effect of ginsenoside Rh-2 via activation of caspase-3 and Bcl-2-insensitive pathway in ovarian cancer cells[J]. Physiol Res，2016，65（6）：1031-1037.

[19] Liu J，Liu J，Guo SY，et al.HSP70 inhibitor combined with cisplatin suppresses the cervical cancer proliferation in vitro and transplanted tumor growth：An experimental study[J].Asian Pac J Trop Med，2017，10（2）：184-188.

[20] Liang J，Yin K，Cao X，et al.Attenuation of Low Ambient Temperature-Induced Myocardial Hypertrophy by Atorvastatin via Promoting Bcl-2 Expression[J].Cell Physiol Biochem，2017，41（1）：286-295.