反復自然流產患者血清檢測中孕激素誘導阻斷因子的表達意義

楊小芳+顧秀蘭

【摘要】 目的：通過檢測先兆流產患者體內的血清孕酮誘導的封閉因子（progesterone-induced blocking factor，PIBF）在治療前后的表達水平變化，研究妊娠早期PIBF與先兆流產的可能的關聯，從而為臨床治療先兆性流產提供新的支持。方法：選擇2013年6月-2016年6月在本院婦產科門診治療的確診為早孕先兆流產患者40例作為試驗組，在孕期過程中給予相應的治療，另外選擇正常健康的早孕婦女40例作為對照組。采用酶聯免疫吸附方法（ELISA）檢測兩組孕婦治療前后血清孕酮及PIBF水平，探討兩者可能的關系。結果：治療過程中兩組均未出現不全流產和完全流產病例。給藥治療前，試驗組的血清孕酮與PIBF水平均明顯低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）；之后給予黃體酮治療，試驗組的孕酮與PIBF水平隨著孕周的延長，而逐漸升高，從第8孕周起，PIBF水平逐漸升高，直至12孕周趨近于正常水平，孕9、10、12周的PIBF水平與對照組比較，差異均無統計學意義（P>0.05），但與試驗組治療前水平比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。對照組的血清孕酮及PIBF具有相關性，以血清孕酮水平做X軸，以血清PIBF水平為Y軸進行相關性分析，得到相關曲線為：Y=1.789+1.897X（R2=0.954），該相關性在試驗組患者中不存在。結論：PIBF對于預測和診斷反復自然流產具有重要的意義，為臨床治療先兆性流產提供重要的價值。

【關鍵詞】 反復自然流產； 孕激素誘導阻斷因子； 孕酮

Expression of Progesterone Induced Blocking Factor in Serum of Patients with Recurrent Spontaneous Abortion/YANG Xiao-fang，GU Xiu-lan.//Medical Innovation of China，2017，14（09）：004-007

【Abstract】 Objective：To detect the expression level of serum progesterone induced blocking factor（PIBF） before and after treatment in patients with threatened abortion，to study the possible association between PIBF and threatened abortion in early pregnancy，so as to provide new support for clinical treatment of threatened abortion.Method：40 patients with threatened abortion in our hospital obstetrics and gynecology clinic from June 2013 to June 2016 were selected as the experimental group and were given corresponding treatment during pregnancy，another 40 cases in normal healthy pregnant women were selected as control group.The levels of progesterone and PIBF were detected by using enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） in these two groups and then explore the relationship between them.Result：There were no cases of incomplete abortion and complete abortion in the two groups.Before given treatment，the levels of serum progesterone and PIBF in experimental group were significantly lower than those in control group，the differences were statistically significant（P<0.05）；after treated with progesterone treatment，the progesterone and PIBF levels with the prolongation of gestation in experimental group，and gradually increased from eighth weeks of gestation，PIBF levels increased gradually，until 12 weeks of gestation was close to normal levels，compared to 9，10，12 gestational weeks PIBF levels compared with the control，there were no significant differences（P>0.05），but compared with the experimental group before treatment，the differences were statistically significant（P<0.05）.Correlation between serum progesterone and PIBF in control group，the serum progesterone levels in X axis，the level of serum PIBF was correlation analysis of Y axis，get the correlation curve：Y=1.789+1.897X（R2=0.954），the association between patients in the experimental group.Conclusion：PIBF plays an important role in the prediction and diagnosis of recurrent spontaneous abortion，it can provide important value for clinical treatment of threatened abortion.

【Key words】 Recurrent spontaneous abortion； Progesterone induced blocking factor； Progesterone

First-authors address：Chen Xinghai Hospital in Zhongshan City，Zhongshan 528415，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.09.002

由于遺傳、環境及內分泌等因素，在孕婦妊娠早期較易發生先兆流產，臨床表現主要為：妊娠12周前出現少量陰道流血、腰背痛及陣發性下腹痛等，但無妊娠物排出[1]。孕酮是妊娠過程的重要激素，其水平低于正常時，易誘發胎兒流產與畸形，即使給予相應的臨床治療使用保胎藥物，但依然有潛在的風險[2-3]。血清孕酮誘導的封閉因子（progesterone-induced blocking factor，PIBF）的表達水平，可以直接反映出孕酮的水平[4-5]，本研究通過檢測PIBF的表達水平，來間接探討血清孕酮水平與先兆性流產的關系，從而為臨床治療先兆性流產提供新的支持，現將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年6月-2016年6月在本院婦產科門診治療確診為早孕先兆流產患者40例作為試驗組，年齡（30.0±1.8）歲，平均孕次（1.5±0.3）次，停經（7.8±1.2）周。另外選擇正常健康的早孕婦女40例作為對照組，年齡（31.0±1.3）歲，平均孕次（1.2±0.5）次，停經（6.9±1.5）周。兩組的年齡、孕次及停經等一般資料比較，差異均無統計學意義（P>0.5），具有可比性。醫生詳細詢問每例患者病史并做詳細記錄，排除遺傳、解剖、自身免疫、內分泌異常及感染性疾病。保證患者無自然流產、死胎、死產史，另外本次妊娠目前未出現陰道流血等先兆流產癥狀和體征，經其他手段進行診斷，例如B超等證實胚胎發育正常。本研究經過醫院倫理委員會同意，研究對象均已被告知相關的信息，簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 試驗組 患者同意試驗后，并在接受其他的藥物治療前，懷孕7周左右時，取空腹靜脈血4 mL，常溫分離血清，并置于-20 ℃保存。之后給予黃體酮治療，分別收集患者懷孕8、9、10和12周空腹靜脈血4 mL，常溫分離血清，同樣-20 ℃保存。采用酶聯免疫吸附雙抗體夾心法（ELISA）測定血清中孕酮及PIBF的含量[6]。檢測試劑盒購自南京建成生物試劑有限公司，嚴格按照試劑盒說明書進行操作和測定。

1.2.2 對照組 收集與試驗組患者的同期的正常健康早孕婦女孕周分別在7、8、9、10和12周取空腹靜脈血4 mL，常溫分離血清，同樣-20 ℃保存。采用酶聯免疫吸附雙抗體夾心法（ELISA）測定血清中孕酮及PIBF的含量。檢測方法及操作同上述試驗組。

1.3 統計學處理 使用SPSS 17.0統計軟件統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組治療前后血清中孕酮與PIBF水平變化比較 治療過程中兩組均未出現不全流產和完全流產病例。給藥治療前即孕7周，試驗組的血清孕酮與PIBF水平均明顯低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05）；之后給予黃體酮治療，試驗組的孕酮與PIBF水平隨著孕周的延長，而逐漸升高，從第8孕周起，PIBF水平逐漸升高，直至12孕周趨近于正常水平，孕9、10、12周的PIBF水平與對照組比較，差異均無統計學意義（P>0.05），但與試驗組治療前水平比較，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 血清中孕酮及PIBF相關性分析 對照組血清孕酮與PIBF呈正相關關系，以血清孕酮水平做X軸，以血清孕酮誘導的封閉因子（PIBF）水平為Y軸進行相關性分析，得到相關曲線為：Y=1.789+1.897X（R2=0.954）；但試驗組中血清孕酮與PIBF水平不具備顯著相關關系。見圖1、2。

3 討論

最早是Szekeres-Bartho在早期提出PIBF是一種調節妊娠免疫應答的有效因子，它在妊娠保護作用機制中起重要作用[7-8]。另有學者認為PIBF可能是一種孕激素調節劑，調節母胎界面的免疫微環境，達到保護胚胎正常免疫系統的形成，從而保護正常的妊娠[9]。有學者研究已經表明：流產婦女血清中PIBF表達水平低于正常妊娠婦女，并發現此類患者尿液中的PIBF濃度也顯著低于正常妊娠婦女[10]。這些現有的研究都表明PIBF水平的異常與妊娠流產之間存在密切聯系。國內也有較多研究已經證明：先兆流產的原因主要表現為妊娠早期血清PIBF水平降低，黃體酮可以通過上調血清PIBF表達水平，保護胚胎降低先兆性流產的發生[11-13]。總之，PIBF的生物學效應為維持正常妊娠，保護妊娠。妊娠婦女PIBF表達水平的變化可能部分的反映妊娠的病變情況，與妊娠的結局有關[14]。因此，檢測血清中PIBF的表達水平，可以預測胚胎發育情況，從而對于臨床使用黃體酮治療先兆流產具有重要的價值。

本研究結果顯示，給藥治療前即孕7周，試驗組的血清孕酮與PIBF水平均明顯低于對照組（P<0.05），之后給予黃體酮治療，試驗組的孕酮與PIBF水平隨著孕周的延長，而逐漸升高，從8孕周起孕酮與PIBF水平均逐漸升高，直至12孕周趨近于正常水平。這與已有的研究結果也是一致的：對于先兆性流產患者，給予黃體酮治療一定的療程后，能起到維持良好的妊娠發育與胎兒成長，改善孕婦正常的激素與內分泌水平的作用[15-16]。也證明了PIBF及孕酮水平對于預測和診斷反復自然流產具有較大的參考意義。進一步的，對于PIBF與孕酮之間的關系進行探討，發現對照組血清孕酮及PIBF呈正相關關系，以血清孕酮水平做X軸，以血清孕酮誘導的封閉因子（PIBF）水平為Y軸進行相關性分析，得到相關曲線為：Y=1.789+1.897X （R2=0.954）；但試驗組中血清孕酮與PIBF水平不具備顯著相關關系。這證明兩者之間的相關性的確存在[17]。在試驗組先兆性流產中兩者無相關性，說明體內的內分泌調節的異常，可能導致了兩者水平的相對變化。

現在廣為接受的PIBF影響妊娠結局的機制主要是：妊娠過程中，父方基因胚胎抗原能夠刺激胎兒-母體之間的胎盤屏障區域，使相鄰界面部分蛻膜細胞及T淋巴細胞產生PR，該受體可以與孕酮結合，并被激活，進一步誘發免疫反應，產生免疫調節蛋白PIBF，降低蛻膜淋巴細胞毒性，維持母體與胎兒的免疫微環境，改善胎兒的生活環境，有利于胚胎的免疫逃避[16-18]。而在先兆流產患者體內，由于血中孕酮分泌不足、當父方基因胚胎抗原刺激誘發免疫反應，蛻膜細胞及T淋巴細胞產生PR后，孕酮無法與其正常結合，或結合數量不足、結合后無法激活等原因而導致母體免疫系統的異常，胚胎可能受到細胞毒性損害[19]；另外可能會出現纖體分泌糖原不足，胚胎著床營養不足等癥狀。而經黃體酮治療后，能夠誘導T淋巴細胞產生免疫應答，與PR結合并激活PR，產生足夠有效的PIBF，提升先兆流產患者血清孕酮水平，維持胎兒的正常免疫環境，促使其正常發育，保護妊娠過程[20-21]。

隨著現代社會的發展，各種的刺激因素越來越多，先兆流產與反復自然流產的患者越來越多，臨床的傳統治療為根據妊娠早期的低水平的孕激素，給予適度甚至過度黃體酮進行治療，這可能會產生嚴重后果，不能夠準確判斷病理妊娠。本研究測定PIBF與孕酮，并納入常規指標，在早孕患者中進行定期檢測，從而為診斷病理妊娠和給予黃體酮治療提供更加準確與可靠的判斷依據，更加準確的預測妊娠結局，大大提高臨床治療先兆性流產的治療效果。

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