兩種人臍帶間充質干細胞源外泌體分離方法的比較

劉高米洋潘興華和法蓮陸容劉菊芬何潔王紅陽

兩種人臍帶間充質干細胞源外泌體分離方法的比較

劉高米洋1,2潘興華2和法蓮3陸容4劉菊芬2何潔2王紅陽1

目的 探索人臍帶間充質干細胞（hUMSCs）來源的外泌體的最佳分離條件并對其進行生物學鑒定。方法 無血清培養法培養hUMSCs，培養上清中收集外泌體，超高速離心法（ult-exo）和沉淀法分離外泌體（pri-exo），Western Blot檢測外泌體標志性蛋白CD63、HSP70、HSP90和陰性對照蛋白TAPA1，透射電鏡觀察分離所得外泌體生物學形態，高清晰質譜分析外泌體包裹蛋白種類。結果 無血清培養法能夠在不改變細胞生物學形態的條件下獲取hUMSCs源外泌體，透射電鏡下可見超高速離心可以獲得具有典型雙層膜結構的外泌體，大小在100 nm左右，而沉淀法分離所得產物不具有典型的外泌體形態表征，大小在30 nm左右；Western Blot結果表明超高速離心法所得外泌體CD63、HSP70、HSP90均呈現陽性，陰性對照蛋白TAPA1呈現陰性，沉淀法只能檢測到HSP90；高清晰質譜檢測出超高速離心法分離所得外泌體有169種蛋白，沉淀法有102種，共有蛋白79種。結論 超高速離心法和沉淀法所得外泌體在蛋白標志物、生物學形態和內含蛋白種類均有差別，本實驗結果提示分離hUMSCs源外泌體超高速離心法優于沉淀法。

臍帶； 間質干細胞； 外泌體； 分離； 鑒定

間充質干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一種來自中胚層間充質，具有多向分化潛能的成體干細胞，主要存在于全身結締組織和器官間充質[1-2]中。人臍帶間充質干細胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUMSCs）從分娩后的廢棄組織臍帶中分離和培養，臍帶中的華通氏膠不但含有豐富的MSCs，且其來源的細胞在形態學、擴增能力、分化功能以及表面標志物等生物學鑒定結果都符合間充質干細胞的標準[3]，是目前最具有轉化應用前景的間充質干細胞。……