金蕎麥總黃酮提取物抗氧化作用研究

王盼+王毅紅+方玉梅

摘 要：該研究采用鄰苯三酚自氧化法和水楊酸分光光度法，測定了金蕎麥70%醇提物清除超氧陰離子自由基（O-2）以及羥基自由基（·OH）的效果。結果表明：金蕎麥總黃酮提取物能顯著地清除超氧陰離子和羥基自由基，且隨提取物濃度的升高其抗氧化性作用逐漸增強[1]。

關鍵詞：金蕎麥；總黃酮提取物；超氧陰離子；羥基自由基

中圖分類號 S567 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2017）08-0023-02

Abstract：The scavenging effect on superoxide anion and hydroxy radical of 70% ethanol extract is determined using the pyrogallol autoxidation and the salicylic acid method from Fagopyrum dibotrys.The results show Fagopyrum dibotrys（D.Don） Hara flavonoids can remove superoxide anion radical（O-2） and hydroxyl radical（·OH） remarkably.With the concentration of flavonoids increasing in Fagopyrum dibotrys （D.Don） Hara，their antioxidant activities have gradually increased.

Key words：Fagopyrum dibotrys （D.Don） Hara；The total flavone extract；Superoxide anion；Hydroxy radical

金蕎麥[Fagopyrum dibotrys （D.Don） Hara]系蓼科蕎麥屬植物，別名野橋蕎麥、天蕎麥，其干燥根莖供藥用，微辛、澀、涼，歸肺經[1]，具有清肺排痰、排膿消腫、祛風化濕、活血化瘀、健脾利濕的功效[2]。據相關文獻報道，利用各種色譜和光譜方法分離和鑒定出金蕎麥中含有原兒茶酸甲酯、反式對羥基桂皮酸甲酯、紅車軸草黃酮、β-谷甾醇、β-胡蘿卜苷、海柯皂甙元、原矢車菊甙元等多種黃酮類、甾體、有機酸類、苷類等化學成分[3-5]。

黃酮類化合物是大自然中的一大類化合物，它在食品方面和醫藥工業方面上有著廣泛應用，其有著增強心血管功能，抗腫瘤，增強免疫力，減緩衰老和治療慢性前列腺炎等作用[6]。清除氧自由基的能力是評價一種抗氧化物質生理作用大小的重要指標，本研究使用鄰苯三酚自氧化和水楊酸比色法分別測定金蕎麥總黃酮提取物清除超氧陰離子（O-2）和羥基自由基（·OH）的效果，對金蕎麥黃酮類化合物的抗氧化性進行了探究，以期為未來開發外源性抗氧化劑做一些研究工作，為合理利用中草藥資源提供試驗依據。

1 材料和方法

1.1 試驗材料 金蕎麥采自鐘山區明湖濕地公園山上，洗凈、烘干至恒重（65℃），粉碎；蘆丁標準品（比利時進口，北京化學試劑有限公司）；鄰苯三酚，硫酸亞鐵，水楊酸，亞硝酸鈉，三羥甲基氨基甲烷（Tris），硝酸鋁，無水乙醇，氫氧化鈉等藥品都是國產分析純。Mettler Toledo AL204電子天平 （梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；SP-2000可見光度計（北京瑞利公司）；HH-4型數顯恒溫水浴鍋（常州智博瑞儀器制造有限公司）；DFT-200高速萬能粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準曲線的繪制 將蘆丁標準品置于電熱鼓風干燥箱中120℃干燥至質量恒定，然后稱取10mg已處理的蘆丁標準品，用70%乙醇溶解并定容至100mL，得濃度為100μg/mL的蘆丁溶液。將蘆丁溶液用70%乙醇稀釋成0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg/mL，分別取1mL于試管中，依次加入1mL70%乙醇，0.3mL5%NaNO2溶液振蕩均勻，放置6min，加入0.3mL 10%Al（NO3）3溶液振蕩均勻，放置6min，加入2mL 4%NaOH溶液，振蕩均勻，放置10min，在最大吸收波長（510nm）處分別測定吸光度A[7]。用最小二乘法經線性回歸，得蘆丁濃度C（μg/mL）與吸光度A的回歸方程A=0.002618C-0.01311，R=0.999 5。結果表明線性關系良好。

1.2.2 金蕎麥總黃酮提取物含量的測定 準確稱量金蕎麥粉末1g于圓底燒瓶中，加入30mL70%乙醇搖勻，于水浴中浸提2h，過濾后用70%乙醇定容至50mL，此為金蕎麥總黃酮提取液。移取2mL提取液到10mL容量瓶中，用70%乙醇定容，振蕩均勻后，移取1mL該稀釋液到試管中，依次加入1mL 70%乙醇，0.3mL 5%NaNO2溶液振蕩均勻，放置6min，加入0.3mL 10%Al（NO3）3溶液振蕩均勻，放置6min，最后加入2mL 4%NaOH溶液，振蕩均勻，放置10min[1]，在510nm下測得金蕎麥總黃酮提取液的吸光度A=0.739，通過回歸方程計算得金蕎麥總黃酮提取物濃度C=287.284μg/mL。

1.2.3 金蕎麥總黃酮提取物對羥基自由基（·OH）的抑制率 反應體系：在25mL容量瓶中加入5mL2mmol·l-1

FeSO4，5mL6mmol·L-1 H2O2，振蕩均勻加入15mL6mmol·l-1水楊酸-乙醇，置于37℃水浴中15min后拿出，用雙蒸水作為參比，在510nm下測吸光度，接著加入1mL被測定樣品，振蕩均勻，在37℃水浴中15min后拿出，用雙蒸水為參比，在510nm下測吸光度。由于色素本身具有吸收光值，所以用5mL2mmol·l-1FeSO4，15mL6mmol·l-1水楊酸-乙醇，不同濃度的被測溶液1mL和5mL雙蒸水作為色素的本底吸收[8]。各取金蕎麥總黃酮提取液1mL，2mL，3mL，4mL，5mL置于10mL容量瓶，用70%乙醇定容，此為不同濃度黃酮類化合物的樣品液。以下為計算抑制率的公式：抑制率（%）=[A0-（Ax-Ax0）]/A0×100

式中：A0—用蒸餾水代替樣品的對照值；Ax—加樣后的吸光度；Ax0—樣品本身的本底值。

1.2.4 金蕎麥總黃酮提取物對超氧陰離子自由基（O-2）的抑制率 （1）鄰苯三酚自氧化速率的測定：吸取5mL50mmol/LTris-HCl緩沖溶液（pH=8.2），2mL雙蒸水搖勻，置于25℃水浴中20min，取出馬上加入0.5mL 3mmol/L鄰苯三酚（已提前在25℃水浴中預熱，用10mmol/lHCl配制，空白管用等體積的10mmol/lHCl代替鄰苯三酚HCl溶液），搖勻后轉移至比色皿中，在420nm下每隔30s測定吸光度值[1]。（2）金蕎麥總黃酮提取物活性測定：按照上述操作在加入鄰苯三酚前先各加入不同濃度的樣品液0.2mL，雙蒸水減少。以10mmol/lHCl代替鄰苯三酚HCl溶液作為空白對照。測定吸光度，計算抑制率。計算公式如下：

抑制率（%）=（A0-A1）/A0×100

式中：A0—鄰苯三酚自氧化平均吸光度；A1—加入樣品液后鄰苯三酚自氧化平均吸光度[1]。

2 結果與分析

2.1 金蕎麥總黃酮提取物對羥基自由基（·OH）的抑制作用 由表1可知，金蕎麥總黃酮提取物對·OH的抑制作用跟隨濃度的增大抑制率也增強，濃度在28.728～143.640μg/mL內抑制率是有效的，當濃度為143.640μg/mL時，抑制率最大，為22.82%。

2.2 金蕎麥總黃酮提取物對超氧陰離子自由基（O-2）的抑制作用 按1.2.4方法測定鄰苯三酚自氧化速率A0=0.076。測得不同濃度的金蕎麥總黃酮提取液對O-2的抑制作用見表2。根據表2可知，在樣品濃度為2.873～11.491μg/mL的范圍內，隨著總黃酮提取物濃度升高，抑制作用增強，且當總黃酮提取物濃度為11.491μg/mL時，抑制率達到40.79%。

3 結論

本實驗研究發現，用70%乙醇浸提得到金蕎麥總黃酮類提取物濃度為287.515μg/mL，通過金蕎麥總黃酮類提取物對羥基自由基（·OH）和超氧陰離子（O-2）抗氧化作用的研究，結果均表明，金蕎麥總黃酮類提取物對羥基自由基和超氧陰離子都表現出較強的清除自由基能力，且在一定濃度范圍內清除自由基能力都隨總黃酮提取物濃度增大抑制作用增強，這與文獻報道一致[1]。實驗證明，金蕎麥總黃酮類提取物具有很強的抗氧化能力，這對于金蕎麥的綜合利用和進一步開發具有重要意義。

參考文獻

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[8]汪河濱，白紅進，王金磊，等.黑果枸杞色素清除自由基活性的研究[J].食品研究與開發，2006（11）：8-10. （責編：張宏民）